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Identificación y medición de la respuesta inmune

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Identificación y medición de la respuesta inmune. PRUEBAS SECUNDARIAS. La prueba a realizar depende de las características del Ag. SOLUBLE PARTICULADO SUPERFICIE + COMPLEMENTO. PRECIPITACIÓN. AGLUTINACIÓN. FIJACIÓN DE COMPLEMENTO. Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y.

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Presentation Transcript
slide2

La prueba a realizar depende de las características del Ag

  • SOLUBLE
  • PARTICULADO
  • SUPERFICIE + COMPLEMENTO

PRECIPITACIÓN

AGLUTINACIÓN

FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

slide3

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Comparación precipitación - aglutinación

Antígeno SOLUBLE

Antígeno PARTICULADO

Anticuerpo

Y

Formación de “retículo”

“Amontonamiento”

Y

Y

AGLUTINACIÓN

PRECIPITACIÓN

slide4

PRECIPITACIÓN

Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

slide5

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Precipitación

Exceso de Ag

Exceso de AC

Proporciones

óptimas

MEDIO

PROPORCIÓN

AC ESPECÍFICO

Ag SOLUBLE

Ag/mg

RETÍCULO SOLUBLE

slide6

LÍQUIDO

SÓLIDO

MEDIO

Test de Ascoli - Valente

CARBUNCLO

  • DIFUSIÓN DOBLE
  • INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
  • INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
  • CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
slide7

DIFUSIÓN DOBLE

Inmunodifusión en Gel de Agar

Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible

Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

slide8

7

2 4 6

5. Antígeno específico (reactivo)

4. Suero testigo (+) (reactivo)

1

2

2

2

6

6

6

7

7

7

3

5

4

4

4

Test de Coggins para AIE

Placa de Petri

1 3 5

3. Suero problema

1. Agar gel

1

6

2

7

5

3

4

2.Sacabocados

slide9

G

A

D

H

B

E

F

I

C

2

6

7

4

6.Cámara húmeda 48 hs

7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN

D. NEGATIVO

E. Fuertemente POSITIVO

F. POSITIVO

A. NEGATIVO

B. POSITIVO

C. Débilmente POSITIVO

G. POSITIVO

H. Banda INESPECÍFICA

I. Banda INESPECÍFICA

slide10

APLICACIONES EN VETERINARIA

  • ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
  • PIROPLASMOSIS EQUINA
  • LEUCOSIS BOVINA
  • BRUCELOSIS OVINA
  • BRUCELOSIS CANINA
slide11

AGLUTINACIÓN

Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

slide12

FENÓMENO DE ZONA O PROZONA

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

slide13

AGLUT I NAC I ÓN

AGLUTINACIÓN

AGLUTINACIÓN PASIVA

COAGLUTINACIÓN

HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

slide14

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Proporción

+

Antígeno particulado (reactivo)

AGLUTINACIÓN

Suero problema

Medio

slide15

En PLACA

En TUBO

AGLUTINACIÓN

Salmonella

Brucella

Micoplasma

Brucella

BPA

SAT+2-ME

PAL

slide16

Aglutinoscopio + placa de vidrio

Aglutinación en placa: BPA

Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado

1. Suero problema

2. Antígeno específico (reactivo)

slide17

8 MINUTOS

LECTURA E INTERPRETACIÓN

3. Mezclar

Con GRUMOS

Sin GRUMOS

AGLUTINACIÓN POSITIVA

Negativa

slide18

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME

SAT (Seroaglutinación en Tubo)

+

Se realizan en simultáneo

Ig M

Ig G

2- ME (2- Mercaptoetanol)

slide19

1/50

1/25

1/100

1/200

En TUBO: SAT + 2- ME

2. Solución fisiológica fenicada (SFF)

1. Suero problema

3. Antígeno

60 MINUTOS

SUERO BPA (+)

SAT

37ºC-48 hs

Título

2-ME

2. Solución 2-ME

slide20

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-48 hs

INCOMPLETA

NEGATIVA

POSITIVA

slide21

Aglutinación en tubo: PAL

PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE

Fundamento: si en una muestra de leche se encuentraun anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

slide22

PAL

2. Antígeno (reactivo)

1. Leche problema

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-1 hora

+

++++

++

+++

slide23

APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA

slide24

PRUEBAS TERCIARIAS

  • IN VITRO

NEUTRALIZACIÓN

PROTECCIÓN

  • IN VIVO
slide25

NEUTRALIZACIÓN

Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

slide26

PROTECCIÓN

Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

slide27

RESPUESTA INMUNE CELULAR

  • PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS
  • IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T
  • IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B
  • PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS