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实验一： 糖的定量分析 --- 还原糖的测定 杜海莲、徐庆妍、王勤、周化民 2013.9.24/25

生命科学学院. 生物化学实验. 实验一： 糖的定量分析 --- 还原糖的测定 杜海莲、徐庆妍、王勤、周化民 2013.9.24/25. 一、目的： 理解还原糖的基本特征，掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法 二、要求（ OTO ）： 理解定量实验的关键要素，训练“ 观察 → 思考 → 操作 ” 科学思维！贯穿始终！ 三 、原理 单糖 以及含有 游离醛基或酮基 的寡糖，具有还原性，属于还原糖类；多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质，可通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。

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实验一： 糖的定量分析 --- 还原糖的测定 杜海莲、徐庆妍、王勤、周化民 2013.9.24/25

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  1. 生命科学学院 生物化学实验 实验一：糖的定量分析---还原糖的测定杜海莲、徐庆妍、王勤、周化民2013.9.24/25

  2. 一、目的： 理解还原糖的基本特征，掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法 二、要求（OTO）： 理解定量实验的关键要素，训练“观察→思考→操作”科学思维！贯穿始终！ 三、原理 单糖以及含有游离醛基或酮基的寡糖，具有还原性，属于还原糖类；多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质，可通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖测定中的滴定方法有多种，本实验采用硫代硫酸钠间接滴定法。

  3. H 半缩醛羟基 葡萄糖分子（环式） 葡萄糖分子（链式）

  4. 硫代硫酸钠间接滴定法原理：在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价的砖红色氧化亚铜(Cu2O)沉淀，氧化亚铜在酸性环境中与定量的过量碘起反应（氧化）成二价铜（蓝色），再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还原糖的含量。硫代硫酸钠间接滴定法原理：在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价的砖红色氧化亚铜(Cu2O)沉淀，氧化亚铜在酸性环境中与定量的过量碘起反应（氧化）成二价铜（蓝色），再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还原糖的含量。

  5. COOK COOK CHO COOH H― C ―O 2 H― C ―OH Cu + (CHOH)4+ 2 H2O = 2 （ CHOH）4 + Cu2O↓ + H―C ―O H―C―OH CH2OH CH2OH COONa COONa 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸 反应方程式： 2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O Cu + 2 H2O H―C―OH H―C―O COONa COONa 酒石酸钾钠 可溶性的氧化铜络合物(蓝色)

  6. + IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O 2+ + Cu2O + I2 + H Cu + I -+ H2 O 2- 2- I2（剩余的） + 2（Na+ +S2O3）S4O6 + 2 I- 因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原糖的含量。

  7. 碱性铜试剂：硫酸铜 + 草酸钾 Fehling试剂：硫酸铜 + 酒石酸钾钠 Benedict试剂：硫酸铜 + 柠檬酸钠 上述试剂同属于碱性铜试剂作用原理相同！

  8. 三、试剂与器材 1.样品：标准葡萄糖溶液、待测糖溶液 2.试剂：（1）碱性铜试剂； （2）0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液； （3）2%碘化钾溶液； （4）0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液； （5）1％淀粉指示剂。 3. 器材：滴定管、恒温水浴锅

  9. 四、操作步骤 • 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。 （注：用移液管量取溶液，禁用量筒！）

  10. 2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次（均使用移液管）； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止（？？）。

  11. 五、计算： 0.5（mg/ml） X = ×（V空－V待测） V空－V标 X = ( x1 + x2 ) / 2

  12. 六、注意事项！！！ • 各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸水中，再同时从沸水浴中取出。 • 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会影响滴定结果的准确性（未洗净会使结果？）。 • 滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切勿将它与近终点的碘蓝色混淆（如何区别？）。 • 用相应的移液管量取溶液，勿用量筒。

  13. 七、思考题 1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优点？ 2、提前终止滴定会出现哪种误差? 3、分析X1与X2存在差异的原因？若差异较大说明什么？

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