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“Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV:

“Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV: epidemiologia molecular e avaliação de técnicas diagnósticas”. “Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV: epidemiologia molecular e avaliação

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“Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV:

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Presentation Transcript

  1. “Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV: epidemiologia molecular e avaliação de técnicas diagnósticas”.

  2. “Tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos soropositivos ao HIV: epidemiologia molecular e avaliação de técnicas diagnósticas”. Equipe: Profa. Dra. RosemeriMaurici da Silva (UNISUL); Enf. Mônica Ferreira Gruner, MSc (HNR); Dra. Simone Gonçalves Senna (UFSC); Farmac. DarcitaBurguerRovaris (LACEN); Mestranda Letícia MuraroWildner (UFSC); Mestranda Christiane Lourenço Nogueira (UFSC); Graduanda Susie Coutinho Liedke (UFSC). Coordenação: Profa. Dra. Maria Luiza Bazzo

  3. Laboratório de Biologia Molecular e Micobactérias (LBMM) estuda métodos moleculares aplicáveis ao SUS para diagnóstico da tuberculose e identificação de micobactérias não-tuberculosas. Micobactérias Contexto Brasil: 45/100.000 hab. Espessa camada lipídica 27/100.000 hab.

  4. Objetivo Estudar a epidemiologia molecular e avaliar as técnicas diagnósticas para a tuberculose e doença pulmonar causadas por micobactérias em indivíduos HIV soropositivos.

  5. Estratégias: • Avaliar um método modificado para o tratamento das amostras de escarro; • Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosis no Estado de Santa Catarina; • Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina; • Avaliar técnicas moleculares rápidas para diagnóstico e identificação de micobactérias

  6. Estratégia: • Avaliar um método modificado para o tratamento das amostras de escarro Espessa camada lipídica Micobactérias

  7. Estratégia: • Avaliar um método modificado para o tratamento das amostras de escarro Resultado: Protocolo Rotina Protocolo Modificado 16SrRNA 56,7% (IC 95%) 73,3% (IC 95%) IS 6110 81,7% (IC 95%) 100% & + IS 6110 16S rRNA PCR

  8. Estratégia: Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosis no Estado de Santa Catarina

  9. Estratégia: Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosisno Estado de Santa Catarina DR DR DR Spoligotyping Região cromossômica específica do complexo MTB Locus de repetição direta DR (DirectRepeats) DR Sequências repetitivas de 36 - 41 pb ausência ou presença

  10. Estratégia: PGG1 Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosisno Estado de Santa Catarina East African Indian (EAI) Spoligotyping Beijing PGG2 Latin American and Mediterranean (LAM) Central Asian (CAS) Harleem X PGG3 T RASTOGI & SOLA, 2007

  11. Estratégia: Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosisno Estado de Santa Catarina Beijing PGG2 Latin American and Mediterranean (LAM) Harleem PGG3 T

  12. Estratégia: Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosisno Estado de Santa Catarina 406 isoladosclínicos 111 spoligotypes 74 SITs(SharedInternationalTypes) 84,7% 7 famílias 32 subfamílias 2,0% 6 perfis Orphan 31 perfis Unknown 13,3%

  13. Estratégia: SIT42/LAM9 (1) SIT42/LAM9 (2) SIT106/U(LAM3?) (1) SIT106/U(LAM3?) (1) SIT50/H3 (1) SIT93/LAM5 (1) Unk21 (3) SIT73/T2-T3 (2) SIT150/LAM9 (1) SIT17/LAM2 (1) SIT216/LAM9 (1) SIT42/LAM9 (1) SIT106/U(LAM3?) (1) Cepas MDR idênticas SIT50/H3 (2) SIT93/LAM5 (1) SIT73/T2-T3 (1) Risco para a saúde pública Unk21 (1) Unk3 (1)

  14. Estratégia: Estudar a epidemiologia molecular de cepas circulantes de M. tuberculosisno Estado de Santa Catarina Dissertação defendida por Christiane Lourenço Nogueira 13/4/2012 “Diagnóstico e epidemiologia molecular de cepas de Mycobacteriumtuberculosis no Estado de Santa Catarina”

  15. Estratégias: Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina

  16. Estratégias: Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina 150 espécies Mycobacterium M. leprae Complexo M. tuberculosis (CMTB) Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) TUBERCULOSE MICOBACTERIOSE Pulmonar ou extrapulmonar Clinicamente indistinguíveis Tratamento diferente para cada espécie (ROSEMBERG; TARANTINO, 2002; LEÃO et al., 2004; BARRERA, 2009)

  17. Estratégias: Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina Culturas suspeita MNT – Lacen/SC Amostras (escarro ou cultura) pacientes internados HNR Identificação da espécie BsteII HaeIII PRA-hsp65 A + MTB A + MKA A + MAV A + MFO A + MGO MMSA Sequenciamento (discordantes)

  18. Estratégias: 5,4% Cultura 57 amostras de Escarro 152 Suspeitas MNT 56 M. tuberculosis 49 CMTB 88 MNT 1 M. intracellulare/ M. chimaera(1,8%)

  19. Estratégias: Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina Perfil dos Pacientes internados com Micobacteriose Diagnóstico Inicial TB: 4/6 pacientes TB MNT 8 meses a 3 anos 3 internações até a alteração do diagnóstico 2 casos Gastos desnecessários Tratamento Inadequado 15 internações 6 pacientes Complicações Falha Terapêutica 34,3 dias

  20. Distribuição dos Isolados 5,0% 26,1% 35,3% Países desenvolvidos Distribuição dos casos de TB em Santa Catarina. TB MNT

  21. Estratégias: Isolar e identificar Micobactérias Não-Tuberculosas (MNT) em Laboratório e Hospital de Referência para Micobactérias do Estado de Santa Catarina Dissertação defendida por Letícia MuraroWildner em 09/03/2012 “Isolamento e Identificação de Micobactérias Não-Tuberculosas em Laboratório e Hospital de Referência do Estado de Santa Catarina”

  22. Estratégias: Avaliar técnicas moleculares rápidas para diagnóstico e identificação de micobactérias Padronização da técnica PRA-hsp65 (comparação com MMSA e sequenciamento); Padronização de uma PCR multiplex para micobactérias, CMTB e MNT; Padronização da PCR em tempo Real (comparação com PCR convencional com IS6110 e 16S rRNA).

  23. Estratégias: Avaliar técnicas moleculares rápidas para diagnóstico e identificação de micobactérias Artigosubmetidoparasaludiciencia “Identification of Mycobacterium Species by Multiplex PCR Assay in University Hospital from Florianópolis - Santa Catarina – Brazil” (ICE 18815.03.12).

  24. Aplicabilidade para o SUS • Parceria estabelecida com o Setor de Tuberculose LACEN (referência Estadual) Identificação das amostras de MNT • Parceria com o Hospital Nereu Ramos (referência estadual para o tratamento) Identificação de amostras e testes moleculares para TB em líquor. • Diagnóstico molecular da TB em líquor, tecidos, escarro e outros materiais para o HU/UFSC • Implementação de novas técnicas tanto para diagnóstico (Real Time) como para tipificação (PRA hsp65) e genotipagem do M. tuberculosis(spoligotipping) permitirão maior resolutividade diagnóstica e compreensão da dinâmica das infecções TB e MNT no Estado de Santa Catarina.

  25. Impactos do Projeto – Científico • 2 dissertações defendidas • 2 trabalhos de Iniciação Científica • Consolidação do LBMM e do Grupo de Pesquisa

  26. Produção Científica Artigos publicados: Wildner, LM, Nogueira, CL, Souza, BS, Sena, SG, da Silva, RM, Bazzo, ML. 2011. Micobactérias: Epidemiologia e Diagnóstico. Revista de Patologia Tropical. V. 40 (3):207-229 Nogueira CL, Wildner LM, Senna SG, Rovaris D, Gruner MF, Jakimiu AR, da Silva RM, Bazzo ML. Alternative sputum treatment to improve the PCR assay for Mycobacterium tuberculosis detection. 2012. Int J Tubercul Lung Dis. V. 16(6), 783-787.

  27. Produção Científica Artigos submetido: “Identification of Mycobacterium Species by Multiplex PCR Assay in University Hospital from Florianópolis - Santa Catarina – Brazil” (ICE 18815.03.12).

  28. Produção Científica Resumos em Congressos e seminários: • NOGUEIRA, C L; SENNA, SG, ROVARIS DB, MAURICI da SILVA R, BAZZO, ML. Epidemiological Profile of Tuberculosis in Santa Catarina State, Brazil. In: II Workshop da Rede-TB, 2011, Rio de Janeiro. II Workshop da Rede-TB. Rio de Janeiro : Universidade Gama Filho, 2011. v. 1. p. 167-168. • LIEDKE, SC, DAIKURA, L, SENNA, SG, NOGUEIRA CL, WILDNER LM, MAURICI da SILVA, R, BAZZO, M. L. . Padronização da Metodologia Molecular Multiplex PCR para Diferenciação de Isolados Clínicos de Micobactérias. In: II Workshop da Rede-TB, 2011, Rio de Janeiro. II Workshop Rede-TB. Rio de Janeiro : Universidade Gama Filho, 2011. v. 1. p. 220-221 • NOGUEIRA, C L, WILDNER, LM, SENNA SG, LIEDKE, SC, ROVARIS, D,B, GRUNER MF, JAKIMIU, A R, BAZZO ML. Improved DNA Extraction Directly fo Sputum to Detect Mycobacterium tuberculosis with IS6110 and 16S rRNA gene. In: 26 CongressoBrasileiro de Microbiologia, 2011, Foz do Iguaçú - PR. Microbiologia in focoedição especial. São Paulo : VoxEditora Ltda., 2011. v. 16. p. 145-145. • WILDNER, LM, SENNA SG, BAZZO ML. Padronização de PCR em tempo real para detecção e identificação de micobactérias na rotina do HospUniversitPolydoro Ernani de São Thiago, Fpolis- SC. In: 26 CongBras de Microbiologia, 2011, Foz do Iguaçú - PR. Microbiol in foco. SP: Vox Editora Ltda, 2011. v. 16. p. 205-205.

  29. Produção Científica Resumos em Congressos e seminários: • LIEDKE SC, DAIKURA, L, SENNA SG, NOGUEIRA C L, WILDNER, LM, da SILVA, RM, BAZZO ML. Padronização da Metodologia Molecular Multipelx PCR para Diferenciação de Isolados Clínicos de Micobactérias do Estado de Santa Catarina. In: 26 Congresso Brasileiro de Microbiologia, 2011, Foz do Iguaçú - PR. Microbiologia in foco edição especial. São Paulo: Vox Editora Ltda, 2011. v. 16. p. 167-167.

  30. Considerações Finais Agradeçemos à FAPESC e as demais agências fomentadoras do edital PPSUS pelo financiamento que tem possibilitado o desenvolvimento do grupo de pesquisa do Laboratório Biologia Molecular e Micobactérias e das parcerias estabelecidas. Nos alegra saber que os testes por nós realizados já estão possibilitando aos pacientes atendidos no SUS acesso às modernas técnicas diagnósticas. LBMM

  31. Obrigada! m.l.bazzo@ufsc.br Maria Luiza Bazzo

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