1 / 14

DOPPIA COLORAZIONE IMMUNOCITOCHIMICA AUTOMATIZZATA

DOPPIA COLORAZIONE IMMUNOCITOCHIMICA AUTOMATIZZATA. M.Marconi, G.Bogina, M.Fontana, S.Lonardi, L.Furlani, e G.Zamboni. Servizio di Anatomia Patologica, Ospedale S.Cuore – Don Calabria di Negrar (VR). SOLUZIONE: - divisione del preparato in più aree

nguyet
Download Presentation

DOPPIA COLORAZIONE IMMUNOCITOCHIMICA AUTOMATIZZATA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. DOPPIA COLORAZIONE IMMUNOCITOCHIMICA AUTOMATIZZATA M.Marconi, G.Bogina, M.Fontana, S.Lonardi, L.Furlani, e G.Zamboni Servizio di Anatomia Patologica, Ospedale S.Cuore – Don Calabria di Negrar (VR)

  2. SOLUZIONE: - divisione del preparato in più aree - doppia colorazione ICC INTRODUZIONE L’ESAME CITOLOGICO è una metodica di ampio utilizzo. Il suo potenziale diagnostico è affinato dall’ applicazione di procedure immunocitochimiche (ICC). PROBLEMA: limitato numero di preparati disponibili.

  3. INTRODUZIONE La DOPPIA COLORAZIONE ICC utilizza due anticorpi sulle stesse cellule contemporaneamente. RISULTATO: visualizzazione di due anticorpi diversi sulle medesime cellule. La STANDARDIZZAZIONE della metodica con l’utilizzo di un IMMUNOCOLORATORE la rende eseguibile in 3.5 ore.

  4. MATERIALE LA DOPPIA COLORAZIONE ICC É APPLICABILE A: • materiale citologico strisciato ottenuto per agoaspirazione • citocentrifugato di liquido endocavitario o endocistico • materiale citologico in fase liquida Fissazione immediata del materiale dopo l’allestimento in alcool etilico 95° per almeno 15 minuti.

  5. METODI VARIABILI nella STANDARDIZZAZIONE AUTOMATIZZATA della metodica: • materiale e fissazione • scelta degli anticorpi da abbinare • recupero antigenico combinato per i due anticorpi • denaturazione di eventuali legami aspecifici

  6. METODI PROTOCOLLO DI ESECUZIONE • Eventuale recupero antigenico 2. Incubazione del primo anticorpo 3. Rivelazione con multimero coniugato con perossidasi 4. Sviluppo con cromogeno DAB. 5. Denaturazione a 90°C per 4 minuti 6. Incubazione del secondo anticorpo 7. Rivelazione con multimero coniugato con fosfatasi 8. Sviluppo con cromogeno FAST RED.

  7. METODI ANTICORPI UTILIZZABILI CONTEMPORANEAMENTE: - Anticorpi diretti contro antigeni presenti su cellule di diversa origine e mutuamente esclusivi. - Anticorpi diretti contro antigeni presenti sulla stessa cellula ma con localizzazione differente (nucleare, citoplasmatica, di membrana).

  8. CD45 PAN CK APPLICAZIONI - Metastasi (linfonodale, epatica, polmonare) di origine sconosciuta combinando: CD45-Pan Citocheratina; antiEpatocitario-CK7; TTF1-CK20; CDX2-ER. Metastasi linfonodale di carcinoma a piccole cellule

  9. antiEpatocyte CK7 APPLICAZIONI - Metastasi (linfonodale, epatica, polmonare) di origine sconosciuta combinando: CD45-Pan Citocheratina; antiEpatocitario-CK7; TTF1-CK20; CDX2-ER. Metastasi epatica di adenocarcinoma del polmone

  10. TTF-1 CK7 APPLICAZIONI - Tipizzazione di carcinomi primitivi del polmone con: TTF1-CK7; P63-Sinaptofisina. Adenocarcinoma primitivo del polmone

  11. CD3 CD20 APPLICAZIONI • Diagnosi di processi linfoproliferativi con: CD3-CD20; • Ciclina D1-CD5 e BCL6-CD23. B-CLL (evidente infiltrato linfoide B)

  12. CD5+CD3 CD5 APPLICAZIONI • Diagnosi di processi linfoproliferativi con: CD3-CD20; • Ciclina D1-CD5 e BCL6-CD23. B-CLL (evidente infiltrato linfoide B CD5+)

  13. BerEp4 Calretinina APPLICAZIONI - Discriminazione tra cellule epiteliali e mesoteliali in liquidi pleurici/peritoneali con: BerEP4(ESA)- Calretinina. Liquido pleurico da metastasi di carcinoma mammario

  14. CONCLUSIONE La STANDARIZZAZIONE AUTOMATIZZATA della DOPPIA COLORAZIONE ICC ha reso la metodica ancora più facile e meno dispendiosa in termini di: - tempo - personale - materiale cellulare impiegato

More Related