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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA

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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA. VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA. Familia Retroviridae Subfamilia Orthoretrovirinae Género Lentivirus. Tipos: VIH-1 y VIH-2 Virus esférico envuelto (90–130 nm) Genoma:2 hebras simples de ARN + (9,8 kb) Proteínas de Superficie

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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA

FamiliaRetroviridae

SubfamiliaOrthoretrovirinae

Género Lentivirus

  • Tipos: VIH-1 y VIH-2
  • Virus esférico envuelto (90–130 nm)
  • Genoma:2 hebras simples de ARN + (9,8 kb)
  • Proteínas de Superficie

gp120-gp41 // gp105-gp36

  • Polimerasas unidas al ARN

p65/51; p31 // p68 – p34

  • Proteinas del Core

p17 -p24 // p16 - p26

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VIH-1

VIH-2

  • Los viriones contienen 2% de ácido nucleico.(2 ARN (+) y 1 ARNt (trp, pro,lys)
  • Genoma : 2 moléculas de ARN de sentido positivo que poseen cap en el extremo 5’ y una cadena polyA en su extremo 3’.
  • Su tamaño varía entre 8 a 11 kb.

R: repetidos directos (18-250 nt)

U5: región no codificante. Comienza retrotranscripción

PBS: sitio de union del primer para la retrotranscripción

Leader: aprox 90-500 nt. Está en el extremo 5’ de todos los ARNm

PPT: zona de polipurinas. (aprox 10 nt). Lugar de iniciación de la síntesis de la hebra + durante la retrotranscripción

U3: Contiene los elementos promotores de la transcripción del provirus

gag: codifica proteinas del Core y la PR

pol: codifica enzimas (RT, IN)

env: codifica glicoproteinas de superficie

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DIVERSIDAD GENETICA DEL VIH

TIPOGRUPOSUBTIPORECOMBINANTES

M (mayor)A,B,C,D,E,F B/F, A/G, A/E, A/C,

G,H,I,J,K,LA/G/J

HIV-1 O (outlier)

N (no M, no O)

HIV-2 A,B,C,D,E,F

slide7

Alta tasa de variabilidad

  • Alta tasa de error en la lectura de la Retrotranscriptasa: 1 nucleótido/ciclo replicativo
  • Alta tasa de replicación viral: 4,4 x 1010 particulas virales por dia.
  • Recombinacion retroviral: “Formas Recombinantes Circulantes” (CRFs),
          • “Formas Recombinantes Unicas” (URFs)

VIRUS HETEROCIGOTO

VIRUS RECOMBINANTE

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CRFs

URFs

A B C D E F G H J K Sin Clasificar Sin Secuenciar

ESTRUCTURA GENÓMICA DE LAS FORMAS RECOMBINANTES

slide9

Distribución geográfica del VIH

(Tipos,Subtipos y CRFs)

A

B,A,C,D,G

A

A,B

A,C,D,F

A,B

A,D,E,O

B

A,B

A

A,B, C,D

B,D

B

,C,D

B/F,B/D

CRF12-BF

A

B,F,C

VIH-1

VIH-2

?

slide10

Infección asintomática

Seroconversión

SIDA

4-8 semanas aprox. 10 años 2-3 años

HISTORIA NATURAL DE LA INFECCION POR VIH

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ARN viral HIV

CICLO DEL VIRUS DE

INMUNODEFICIENCIA HUMANA

  • PCR DNA proviral (cualitativa)
  • RNA viral (cualitativa)
  • Carga Viral
  • (nºde copias ARNv /ml)
  • (cuantitativa)

Células blanco:

Linfocitos T CD4,

Monocitos

,

Macrofagos

, Células de

Langherans

,

Células dendríticas

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DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

  • Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG
      • Test de Tamizaje :
          • Enzimo inmuno análisis (EIA)
          • Test rápidos
          • Aglutinación de partículas
      • Test Confirmatorios
          • Western Blot (WB)
          • Ensayo en Línea (LIA)
  • Detección directa de presencia viral
      • Estudio de Proteinas virales (Ag p24)
      • Estudio de Acidos nucleicos: ADN proviral
          • ARN viral
slide13

Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG

  • Los test serológicos se basan en la interacción Antígeno – Anticuerpo.
  • Test de Tamizaje
    • Son altamente sensibles para poder detectar los Ac en la muestra.
    • Detectan anticuerpos para HIV-1 y HIV-2 (sin lograr discriminar)
    • Detectan anticuerpos contra grupo M y O
    • Antígenos: Lisado total de virus, Proteinas recombinantes, Peptidos sintéticos
  • Test Confirmatorios
    • Son altamente específicos para confirmar con certeza la presencia de Ac. Específicos contra HIV.
    • Pueden discriminar infección por HIV-1 o por HIV-2
eia 4 generacion
EIA 4ª GENERACION

Proteinas

recombinantes

Peptidos sinteticos

Ac paciente

Ag viral

Ac conjugado

E

E

Sustrato

HIV-2 env

HIV-2 env

HIV-1 env

HIV-1 env

HIV-1gag

HIV-1gag

HIV-2 env

HIV-2 env

E

E

E

HIV-2

HIV-1 env

HIV-1 env

HIV-1 pol

HIV-1 pol

HIV-O

HIV-O

Soporte Solido

  • Muy buena especificidad
  • Detecta bajos títulos de Anticuerpos(seroconversión)
  • Buena sensibilidad para Ac. anti HIV-2 y Ac. anti grupo M y O de HIV-1,
  • Detecta IgG e IgM
  • Detecta Ag virales
  • HIV-1 (grupo M y O)
  • HIV-2
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TEST CONFIRMATORIOS

LIA

WB mejorado

Western Blot

ID muestra

3.+

1+

+/-

gp120

gp 41

p31

p24

P17

gp105

gp36

Criterios:

WB Positivo: p24,gp41,gp120/160

(p24 con al menos otra)

WB Negativo: Ausencia total de Bandas

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Algoritmo para el diagnóstico serológico de la infección por VIH

No Reactivo

informar

Técnicas de Tamizaje

Laboratorio Periférico

Banco de Sangre

Reactivo

Laboratorio de Referencia

2 Técnicas de Tamizaje

Distinta Configuración antigénica

No Reactivo

(-/-)

informar

Reactivo

(+/+)

Discordante

(+/-)

WESTERN BLOT

INFORMAR

Positivo *

Indeterminado

Negativo

Repetir serología en 30 días

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Diagnostico Molecular de la Infección por HIV

  • Detección cualitativa de Acido Nucleico (ADN proviral o ARN viral)
  • Diagnóstico en niños nacidos de madres seropositivas
  • Serología indeterminada
  • Hipoglobulinemia
  • Detección cuantitativa de Acido Nucleico (ARN viral)
  • Carga Viral ( nº copias de ARN v/ml) en pacientes infectados
  • Inicio de tratamiento
  • Evaluación de tratamiento
  • Cambios de tratamiento
  • Estudio resistencia a drogas antiretrovirales
slide19

infectado

serorrevertido

IgA en sangre:indicador de una respuesta inmunológica específica a la infección viral en el niño.

slide20

PCR -

PCR -

PCR +

PCR +

Seguimiento en el laboratorio del niño

nacido de madre VIH +

48 hs – 2 semanas de vida

1 – 2 meses de vida

>5 meses de vida

PCR, Elisa, Western Blot

PCR -

PCR+-

  • PCR
  • Carga Viral
  • Población Linfocitaria

PCR

PCR -

PCR +

PCR +

PCR -

PCR

Carga Viral

Población Linfocitaria

PCR

Carga Viral

Población Linfocitaria

PCR

PCR

PCR +

PCR -

PCR -

infectado

nueva PCR

Infección poco probable

nuevaPCR

slide21

Seguimiento en el laboratorio del niño

nacido de madre VIH +

  • Diagnostico de no infección: 3 PCR –
  • 2 muestras negativas en dos momentos distintos en niños >1 mes de vida, más 1 muestra negativa en > 4 meses de vida
  • Diagnostico de infección: 3 PCR +
  • 3 muestras positivas en dos momentos distintos y al menos una de ellas en niños > 4 meses
  • Diagnostico de serorreversión:
  • 2 o más muestras con ELISA y Western Blot negativos entre los 6 y 18 meses de edad y dosificación de inmunoglobulinas normales

En todos los casos seguir con ELISA hasta 18 meses de edad

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El LABORATORIO de VIROLOGÍA

EN LA INFECCIÓN POR VIH EN PEDIATRIA

  • Diagnostico de la Infección por VIH
  • Niños mayores de 18 meses: ELISA - Western Blot
  • Niños menores de 18 meses: Determinación Cualitativa
          • ADN proviral
  • ARN viral
  • Seguimiento de Niños infectados
  • Carga Viral : nº de copias de ARN v/ ml Inicio de tratamiento
      • Evaluación de tratamiento
      • Cambios de tratamiento
      • Estudio de Resistencia a drogas antirretrovirales
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Epidemia de SIDA en Uruguay

1983 inicio de la epidemia del VIH/SIDA

6.463 casos acumulados de VIH + (1983- 06/2006)

2.895 casos acumulados de SIDA (1983- 06/2006)

9.358 casos acumulados VIH/SIDA (1983-06/2006)

estado de situaci n
Estado de Situación
  • Tendencia creciente del VIH /SIDA

Prevalencia de 0,23% en el 2000 a 0,45% 2004

  • Pico máxima incidencia en población joven, con aumento progresivo de las mujeres. JUVENILIZACIÓN Y FEMINIZACIÓN DE LA EPIDEMIA
  • La situación de vulnerabilidad de mujeres y adolescentes / jóvenes, y de las poblaciones con prevalencia mayor a 5%:usuarios de drogas, hombres que tienen sexo con hombres (HSH), personas privadas de libertad,
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Uno de los riesgos de ésta epidemia es elSilencio

Rompamos el silencio y derribemos los obstáculos que impiden una prevención y atención del VIH/SIDA eficaces.