Resultados de purificación de Proteínas (LDH)

1. Septiembre, 2010 Resultados de purificación de Proteínas (LDH) Curva estándar Interpolar valor de peso molecular LDH Geles de poliacrilamida de cada equipo Identificar la banda de interés en el gel de su equipo

2. Instrucciones • Hacer curva de calibración con los estándares de peso molecular que se proporcionan en la siguiente transparencia, • Calcular los Rfs, Rf =distancia recorrida de la proteína de interés distancia total recorrida por el colorante • Realizar el gráfico del log del peso molecular vs Rf

3. PESOS MOLECULARES ESTÁNDAR Estás proteínas se salen del gel, ya que migran más rápido que el colorante que el azul de bromofenol, colorante que usamos de indicador de la corrida de las proteínas

4. Curva std de proteínas Para encontrar en donde está la banda de interés se hace una curva estándar. interpolar el log del peso molecular y conocer en que posición o Rf debe estar la proteína

5. Equipos 1 a 4 Recuerden la banda anaranjadita es la fosforilasa B 36 36 36 36 Equipo 1 Equipo 2 Equipo 4 Equipo 3

6. No se logra observar la primera banda de alto peso molecular pero les puse las que yo puedo distinguir, son suficientes para producir la gráfica de calibración Equipo 5 Fosforilasa BSA GlutDH Alcohol DH Anhidrasa Carbon

7. Les coloque los estándares que pude detectar. Equipo 7 Miosina Fosforilasa BSA GlutDH Alcohol DH Anhidrasa Carbonica

8. Excelente gel del equipo 6. El gel que corrieron hoy Comentarios • Le falto correrse pero quedo precioso, supongo que las fracciones menos puras son las que tienen bandas de peso molecular más alto. • ¿Qué resina usaron para la purificación? Fue intecambio iónico? Std FPA FPB F4 F3 F2 F1 F0 75 25

9. Mi gel COMENTARIOS: • Yo use otros estándares de peso molecular • Como ven al pasar de la F2 a la 3 se pierden proteínas de alto peso molecular • Y al pasar al intercambio iónico perdemos una banda gorda arriba de 37, • Mientras que en afinidad se purifica una banda preferencial a los 37 kDa de peso molecular

10. Stds usados en el gel del equipo 6 y el mío

11. Reporte • Recuerden que la entrega del reporte será hasta pasando el puente del 15 y 16 de septiembre. • Y llevará en los resultados: • La concentración de proteína en cada una de las fracciones obtenidas de la purificación, • El gel de las fracciones (pueden usar otro gel para comparar lo que ustedes obtuvieron con lo que se debería de ver), • La curva patrón del estándar del gel con la predicción de la localización de la proteína y • la actividad total de cada fracción o de las que alcancemos a medir