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Thierry Orsière, Ph D

Mise en place d’un test de mutation génique pour évaluer la participation de l’environnement à la survenue de leucémies aigües. Thierry Orsière, Ph D. Institut de Biodiversité et d’Ecologie (IMBE UMR CNRS 7263) Equipe Biogénotoxicologie , Santé Humaine et Environnement.

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  1. Mise en place d’un test de mutation génique pour évaluer la participation de l’environnement à la survenue de leucémies aigües Thierry Orsière, Ph D

  2. Institut de Biodiversité et d’Ecologie (IMBE UMR CNRS 7263) Equipe Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement Identification des dangers ↓ Définition des risques ↓ Politique de Prévention de la pollution des environnements Exposition de l’Homme aux cancérogènes d’origine naturelle et anthropiques Les cancérogènes génotoxiques agissent au niveau des noyaux de nos cellules…. … et peuvent créer des mutations de gènes : certaines de ces mutations sont susceptibles d’initier un processus carcinogénique

  3. Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement Programme Européen ANR INERIS – Post-GRENELLE ANSES ADEME DRTE-FP DIRECCTE ECCOREV ARS-PACA / PRSE Antimutagènes Expositions professionnelles Particules Fines (urbaines, industrielles, trafic routier) Quantification de lésions de l’ADN ou de mutations géniques / chromosomiques sur les cellules de ses patients Environnement HAP / Tabagisme NanoparticulesP Biogénotoxicologie Bisphenol A Leucémies aigües (projet) Patients consultant pour troubles de la fertilité Risque de cancer ou de troubles de la fertilité Santé Humaine

  4. Equipe Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement (IMBE) : de nombreux outils validés Test du Micronoyau Immuno-marquage 8-OHdG Immuno-marquage adduits BPDE Lymphocytes humains Expositions professionnelles Fibroblastes humains Exposition in vitro au particules fines (PM 2.5) Non fumeurs Fumeurs Non fumeurs Fumeurs Spermatozoïdes humains Spermatozoïdes humains Test des Comètes Cellules épithéliales pulmonaires humaines (A549 Exposition in vitro aux nanoparticules d’argile Test de Mutation génique : Pig-A Ovocytes de souris Exposition in vitro au BPDE

  5. Mise en place d’un test de mutation génique pour évaluer la participation de l’environnement à la survenue de leucémies aigües Ce projet est le fruit d’échanges sur les préoccupations scientifiques et médicales entre : Pr Alain Botta Dr Thierry Orsière Dr Aurélie Bonnefoy Pr François Eisinger Pr Patrice Viens Implication de la participation : - des expositions professionnelles - de l’environnement - de l’hérédité sur la genèse de cancers Développement d’outils de toxicologie génétique applicables à la surveillance des expositions afin de prévenir les cancers et/ou troubles de la reproduction Proposition de tester la mutagénicité globale au moyen du test de mutation génique au locus Pig-A (phosphatidylinositolglycan class A : Pig-A )

  6. Mutations au locus Pig-A : synthèse bibliographique (~50 publications) Principe Type Cellulaire Méthodologie

  7. Le gène Pig-A en Toxicologie génétique Rats administrés (IP) avec une dose unique de N-ethyl-N-nitrosourée (ENU) 142.4 mg/kg 35.6 mg/kg 8.9 mg/kg Accumulation et persistance d’érythrocytes Pig-A- sur une période de 26 semaines (6 mois) D’après DaishiroMiura et al, Mutatio Research 2009

  8. Le gène Pig-A en Clinique • HémoglobinurieParoxystique Nocturne • - Trouble hématopoïétique au niveau des cellules souches hématopoïétiques • Expansion de cellules Pig-A- • Sensibilité anormale des GR Pig-A- à l’action lytique du complément : lyse des GR • Cellules HPN fréquemment retrouvées chez les patients atteints d’anémie aplasique, de syndromes myélodysplasiques, d’autres formes de dysfonctionnement de la moelle osseuse • Fréquence de cellules Pig-A- de l’ordre 0.001 – 0.3 http://www.pnhsource.com • Biosurveillance mutations Pig-A chez l’homme • Une seule étude • Suivi des effets de diverses chimiothérapies sur patients atteints de cancers différents • Nécessité de développer ce test sur des cohortes de sujets plus importantes et plus homogènes • Nécessité d’améliorer les critères méthodologiques (choix du type cellulaire, des protéines liées au GPI, du marquage du GPI, etc…) V.N. Dobrovolsky et al, Environ. Mol. Mutagen. 2011

  9. Définition de notre stratégie de mise au point du test Choix des sujets et des types cellulaires analysés Choix des protéines marquées et des anticorps: Marqueur cellulaire : GR : CD235a-Alexa 647 GB : CD15-Alexa 647 Protéines liées au GPI : CD55 et CD59 – Alexa 488 Marqueur GPI : FLAER-Alexa 488 Partenariat avec plateforme de cytométrie en flux: Plateau FACS/Tri cellulaire – Charles Prevot (IR CNRS) - INSERM UMR_S 911

  10. Premiers Résultats Erythrocytes Marquage CD 235 (rouge) : 18% Marquage CD 59 (vert) : 20% Co-marquage CD 235 – CD 59 : 94% Protocole en cours d’optimisation

  11. Je vous remercie de votre intérêt…

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