1 / 28

UTJECAJ RAZLIČITIH RAZVOJNIH ČIMBENIKA NA NORMALNO OBLIKOVANJE DONJE ČELJUSTI U ČOVJEKA

UTJECAJ RAZLIČITIH RAZVOJNIH ČIMBENIKA NA NORMALNO OBLIKOVANJE DONJE ČELJUSTI U ČOVJEKA. Javna rasprava o temi doktorske disertacije Pristupnica: Snježana Mardešić Brakus, dr. med. Mentorica: prof. dr. sc. Mirna Saraga-Babić, dr. med

tao
Download Presentation

UTJECAJ RAZLIČITIH RAZVOJNIH ČIMBENIKA NA NORMALNO OBLIKOVANJE DONJE ČELJUSTI U ČOVJEKA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. UTJECAJ RAZLIČITIH RAZVOJNIHČIMBENIKA NA NORMALNO OBLIKOVANJE DONJE ČELJUSTI U ČOVJEKA Javna rasprava o temi doktorske disertacije Pristupnica: Snježana Mardešić Brakus, dr. med. Mentorica: prof. dr. sc. Mirna Saraga-Babić, dr. med Zavod za anatomiju, histologiju i embriologiju; Medicinski fakultet, Sveučilište u Splitu

  2. SADRŽAJ PREZENTACIJE uvod problematika i cilj istraživanja hipoteza metode istraživanja rezultati znanstveni doprinos

  3. UVOD

  4. PROBLEMATIKA ISTRAŽIVANJA Nedostatak istraživanja ranih razvojnih stadija donje čeljusti u čovjeka Istraživanja na pokusnim životinjama pokazala su značajne razlike u prostorno-vremenskom izražaju pro-apoptotskih, anti-apoptotskih i čimbenika rasta tijekom razvoja donje čeljusti Poremećaji proliferacije, apoptoze i diferencijacije tijekom razvoja čeljusti dovode do pojave raznih patoloških promjena (često u sklopu sindroma): Anomalije oblika, veličine, građe i položaja donje čelusti Raznih cista i tumora

  5. CILJ ISTRAŽIVANJA Utvrditi prostorni i vremenski raspored pojavljivanja anti-apoptotskih (Bcl-2, Hsp70) i pro-apoptotskih bjelančevina (Bax, p53, kaspaza-3) te njihovu ulogu u regulaciji stanične smrti tijekom ranog razvoja donje čeljusti Utvrditi prostorni i vremenski raspored čimbenika rasta (TGFβ1, CTGF, VEGF, fibronektin) u ranim razvojnim stadijima donje čeljusti

  6. CILJ ISTRAŽIVANJA

  7. CILJ ISTRAŽIVANJA Istražiti moguću ulogu čimbenika rasta u morfogenezi, proliferaciji i diferencijaciji stanica različitih tkiva donje čeljusti Dvostrukim bojenjem dokazati moguću istovremenu prisutnost različitih čimbenika u istoj stanici (Bax i Bcl-2)

  8. HIPOTEZA Imunohistokemijsko istraživanje ranih faza (5.-10. tjedan)u razvoju donje čeljusti ukazat će na moguću ulogu istraživanih čimbenika u normalnom razvoju i diferencijaciji tkiva donje čeljusti u čovjeka: U ranijim razvojnim stadijima donje čeljusti očekuje se veća uloga kaspaze-3 i manja uloga p53apoptotskog čimbenika Postupan porast izražaja Hsp-70 iBcl-2 očekuje se tijekom razvoja donje čeljusti posebno u području Meckelove hrskavice i zone okoštavanja Jaki izražaj CTGF, TGFβ1 ifibronektina očekujemo u svim istraživanim tjednima razvoja u svim tkivima donje čeljusti Pojavu VEGFčimbenika očekujemo u području zone okoštavanja tijekom svih razvojnih stadija

  9. HIPOTEZA Interakcije istraživanih čimbenika mijenjati će se tijekom razvoja donje čeljusti te će omogućavati rast i preživljenje Meckelove hrskavice u ranim razvojnim fazama, a njenu resorpciju u kasnijim fazama Pretpostavljamo da ravnoteža istih razvojnih čimbenika utječe na odlaganje kolagena, mineralizaciju, rast i oblikovanje kosti u donjoj čeljusti

  10. METODE ISTRAŽIVANJA Sakupljanje tkiva i određivanje starosti zametaka Tkivo normalnih ljudski zametaka starosti 5-10 tjedana (iz postojeće arhivske zbirke Zavoda za anatomiju, histologiju i embriologiju te tkivo sakupljeno u Kliničkom zavodu za patologiju, sudsku medicinu i citologiju KBC Split, a uz suglasnost Etičkog povjerenstva za biomedicinska istraživanja MF u Splitu) Kriteriji očuvanosti tkiva: bez vanjskih znakova maceracije, promjene boje i anomalija Određivanje starosti: na temelju podataka o ovulacijskoj dobi, mjerenjem (CRL) te uspoređivanjem sa stadijima Carnegie instituta

  11. METODE ISTRAŽIVANJA Vođenje, uklapanje i rezanje tkiva: Mikrosekcija (odvajanje tkiva koje sadrži donju čeljust) Fiksacija u 4% formaldehidu, ispiranje u PBS-u, dehidracija, ksilol, uklapanje u parafinu Rezanje na sagitalne, frontalne ili transverzalne rezove debljine 5-7 µm Lijepljenje na predmetna stakla, orijentacijsko bojenje svakog desetog stakla H&E (razina reza, očuvanost tkiva)

  12. METODE ISTRAŽIVANJA Imunohistokemijsko bojanje rezova Primarna protutijela: Bax Bcl-2 p53 kaspaza-3 Hsp-70 CTGF TGFβ1 VEGF fibronektin Sekundarna detekcija primarnih protutijela: Bojanje DAB-om Imunofluorescencija

  13. METODE ISTRAŽIVANJA TUNEL metoda Detekcija apoptotskih stanica dokazat će se uporabom deoksinukleotidil-transferaza (TdT) metode označavanja hidroksilnih skupina na krajevima fragmenata DNK

  14. METODE ISTRAŽIVANJA Kvantifikacijska analiza Hsp-70 , Bcl-2, kaspaza-3 i p53 pozitivnih stanica i statistički postupci: Brojenje pozitivnih stanica (smeđe obojenje stanice DAB-om) i računanje njihovog udjela u ukupnom broju stanica Određivanje moguće statistički značajne razlike u postotku pozitivnih stanica među razvojnim tjednima Udio pozitivnih stanica će se izraziti kao srednja vrijednost ± standardna devijacija

  15. METODE ISTRAŽIVANJA Semi-kvantifikacijska analiza: određivanja intenziteta i prostorne raspodjele pojedinih čimbenika u raznim dijelovima donje čeljusti tijekom razvoja (označeno kao odsustvo, blaga, umjerena ili jaka izraženost) Kolokalizacijska analiza: određivanje prisustva dvaju čimbenika u istoj stanici primjenom dvostruke imunofluorescencije te određivanje stanica koje pokazuju dvostruki izražaj

  16. REZULTATI PILOT STUDIJE Imunohistokemijsko bojenje DAB-om kaspaza-3 p53 Hsp-70 Bcl-2 CTGF TGFβ1 VEGF fibronektin Imunofluorescentno bojenje (dvostruko bojenje) Bax i Bcl-2 TUNEL metoda

  17. Mardešić-Brakus S, KalibovićGovorko D, Vukojević K, AlujevićJakus I, Carev D, Petričević J, Saraga-Babić M, Apoptotic and antiapoptotic factors in early human mandible development. Eur J Oral Sci (2010) • Novaković J, Mardešić-Brakus S, Vukojević K, Saraga-Babić M; DevelopmentalpatternsofKi-67, bcl-2 and caspase-3 proteinsexpressionin the human upperjaw. Acta Histochem. (2010) • KalibovićGovorko D, Bečić T, Vukojević K, Mardesic-Brakus S, Biočina-Lukenda D, Saraga-Babić M, Spatial and temporal distribution of Ki-67 proliferation marker, Bcl-2 and Bax proteinsin the developing human tooth. Arch Oral Biol (2010) REZULTATI PILOT STUDIJE

  18. Bcl-2 kaspaza-3 P53 Hsp70

  19. TUNEL metoda

  20. TGFβ1 CTGF VEGF fibronektin

  21. ZNANSTVENI DOPRINOS Dobivanje novih saznanja o ranom razvoju donje čeljusti u čovjeka o kojima ne postoje literaturni podaci te o raspodjeli, vremenu i mjestu pojavljivanja pojedinih razvojnih čimbenika Određivanje % pozitivnih stanica za pojedini istraženi čimbenik (tijekom 5.-10. razvojnog tjedna) ukazat će na procese rasta i razvoja koji su uvjet normalnog oblikovanja donje čeljusti Nove spoznaje o ovim procesima tijekom ranog razvoja čovjeka mogu imati značajan utjecaj na razumijevanje nastanka oro-facijalnih anomalija, te nov pristup u njihovom liječenju

  22. HVALA NA PAŽNJI

More Related