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Histología (anatomía microscópica)

Histología (anatomía microscópica). Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos , y correlacionar la estructura con su función. Técnicas de microscopía óptica más usadas:

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Histología (anatomía microscópica)

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Presentation Transcript

  1. Histología (anatomía microscópica) • Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas,comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos, y correlacionar la estructura con su función. Técnicas de microscopía óptica más usadas: • Combinación de colorantes basófilos y acidófilos(por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory) • Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-Schiff]) • Inmuno-histoquímica (uso de Ac contra estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas) Microscopía electrónica de transmisión (MET) y de barrido (MEB)

  2. Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración • Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos  mal fijador de membranas). • Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno, luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina  Taco  cortes de 5-15  de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos. • Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina. • Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina. Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente.

  3. Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). • La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): • Heterocromatina y nucléolos • RNA ribosomal • Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)

  4. Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehído. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso. • La reacción de PAS tiñe carbohidratos, y se usa para detectar: • Gránulos de glucógeno • Moco en diversas células • Membrana basal de los epitelios • Fibras reticulares del tejido conjuntivo

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