GENÈTICA HUMANA

1. GENÈTICA HUMANA Un cas d’homocistinúria clàssica

2. ESTRUCTURA DEL TREBALL • PART I: Introducció a la genètica humana • PART II: Homocisteïna i malaltia: Homocistinúria clàssica • PART III: Part experimental: Un cas d’Homocistinúria clàssica

3. Transcripció RNA DNA Traducció GÈNETICA Duplicació Proteïnes MUTACIONS

4. CLASSIFICACIÓ DE LES MUTACIONS GENÒMIQUES MUTACIONS CROMOSÒMIQUES Substitució de base GÈNIQUES Pèrdua o inserció de nucleòtids

5. CONSEQÜÈNCIES DE LES MUTACIONS GÈNIQUES EN LES PROTEÏNES

6. HOMOCISTIEÏNA I EL SEU METABOLIME Met Cicle de la metionina MS MTs Hcy CBS Transulfuració Cys

7. ENZIM I GEN CBS ENZIM CBS GEN CBS

8. HOMOCISTINÚRIA CLÀSSICA • SIMPTOMES: • Sistema ossi: Pectus excabatum, aracnodactilia, osteoporosi. • Sistema ocular: Luxació del cristal·lí, miopia. • Sistema nerviós: Retràs mental • Sistema vascular: Complicacions cardiovasculars

9. PRESENTACIÓ EXPERIMENT A la universitat va arribar el material genètic d’un pacient (al que vam anomenar pacient 94) el qual patia els símptomes de la malaltia Homocistinúria Clàssica. Als laboratoris es va dur a terme un seguit de tècniques en que es va seqüenciar el gen CBS i van descobrir que, efectivament, el pacient 94 era afecte i es tractava d’un heterozigot que era portador de les dues mutacions següents: la T191M(exó 4-6)i la I278S (exó 8).

11. 94p 94m ?/? ?/ ? 94 T191M/I278S 94h ?/? QUADRE FAMILIAR (Familia 94)

12. QÜESTIÓ I HIPÒTESI DE L’EXPERIMENT “A partir de les dades obtingudes del pacient 94, quin serà el patró genètic de la seva família?” QÜESTIÓ HIPÒTESI Basant-nos en que la Homocistinúria Clàssica és una malaltia recessiva hereditària, ambdós pares haurien de ser portadors de alguna de les mutacions (una el pare i l’altre la mare), i la germana tindria un 25% de probabilitat de ser portadora de les dues mutacions, un 50% a presentar la mutació però no expressar-la i un 25% a no tenir cap de les mutacions.

13. ELS OBJECTIUS • OBJECTIU GENERAL: • Trobar el patró genètic de la família a partir de les mutacions que presenta el fill • OBJECTIUS ESPECÍFICS: • Averiguar quina mutació presenta el pare i quina la mare • Mirar si la germana presenta alguna de les mutacions o si pateix Homocistinúria Clàssica.

14. DISSENY DE L’EXPERIMENT PREPARACIÓ DE L’EXPERIMENT METODOLOGIA DNA DNA (94) PCRd’amplificació PCR de seqüenciació DIGESTIÓ(Enzims de restricció) Seqüència del DNA i detecció de les mutacions ELECTROFORESI (Gel d’Agarosa)

15. SEQÜENCIACIÓ DEL GEN CBS WT 94

16. LA PCR Polymerase Chain Reaction Material: DNA motlle, dNTPs, els “primers”, Magnesi, el “Buffer”, la Taq DNA polimerasa, H2Od, tubs eppendorf i el termociclador. • Cicle de 3 fases: • Desnaturalització del DNA motlle • Alineació dels “primers” • Extenció del nou DNA Repetició del cicle

17. PCRs SENSE DIGERIR Marcador pUC Mutació I278S Mutació T191M

18. DIGESTIÓ AMB ENZIMS DE RESTRICCIÓ Material: DNA amplificat, enzims de restricció, H2Od, “Buffer”, incubadora. Enzims de restricció Tsp RI Hsp 92

19. ELECTROFORESI AMB GEL D’AGAROSA Gel agarosa: TBE x1, Agarosa, Bromur d’Etidi, base, peinetes.

20. PCRs DIGERIRIDES Marcador Ф-Hae III Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)

21. RESULTATS Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)

22. CONCLUSIONS • Com que la malaltia Homocistinúria Clàssica és una malaltia autosòmica recessiva hereditària cada un dels pares del pacient 94 són portadors de una mutació diferent. El pare (94p) és portador de la mutació T191M i la mare (94m) és portadora de la mutació I278S. Cap dels dos l’expressa ja que es comporta de manera recessiva. • La germana (94h) no presenta la malaltia però, com era més probable (amb un 50% de probabilitat), si que és portadora de una de les mutacions, la T191M.

23. 94p 94m T191M/WT I278S/WT 94 T191M/I278S 94h T191M/WT QUADRE FAMILIAR COMPLET (família 94)

24. GENÈTICA HUMANA Un cas d’homocistinúria clàssica