Coliformes, Coliformes Fecales and E. coli

1. Coliformes, Coliformes Fecales and E. coli Laboratorio de Microbiologia de Alimentos

2. Coliformes • Aerobicos y facultativos anaerobicos • Gram negativo • No formadores de esporas • Forma de bacilo • Fermentan lactosa, con produccion de acido y gas dentro de 48 hr a 35 C

3. Coliformes- Porque son importantes • Organismo indicador (no necesariamente un patogeno) • Coliformes fecales • Potencial contaminate en carne • Patogeno potencial • Enterobacter en formula de infantes • Coliformes no fecales – agua, suelo, ambiente

4. Métodos para Detectar Coliformes • MPN • Basado en probabilidad estadistica • NO es contaje directo • Técnica líquida • Sólido • Contaje directo en medio

5. Coliforms

6. MPN - Continuación El objetivo es “diluir el organismo • Seleccione la muestra más diluída con todos los tubos positivos y los próximos dos • 3,2,1 – Nuestra combinación • Determine el MPN utilizando la tabla de MPN

7. Coliformes

8. MPN • Puede tambien utilizarse 5 tubos para MPN – Aumenta la exactitud • EXACTITUD – Cuan cercano a los valores reales • PRECISION – Cuan cercano son los números uno al otro • Asegúrate de usar la tabla apropiada

9. Se asume en MPN • Distribución al azar de la bacteria • Los organismos no se aglutinan • Si hay un microorganismo presente, crecera • Existen las condiciones apropiadas para crecer

10. Ventajas sobre el uso de placas • El tamano de la muestra puede ser mayor • Mejor para números bajos de organismos • El medio líquido es más suave para el organismo porque no se expone al calor • Requiere preparación de medio con antelación

11. Medio - LST • Lauryl Sulfate Tryptose Broth • Prueba PRESUMPTIVA para coliformes • Se informa como “presumptive coliforms/g” • Ingredientes • Lauryl Sulfate – Algunas bacterias no pueden crecer - Selectivo • Lactosa – Producción de gas – Diferencial w/durham tubo • NaCl – Aumenta razón de reproducción • Tryptona – Fuente de Nitrógeno • Incube a 35 C por 48 horas

12. Medio - BGLB • Brilliant Green Lactose Bile • Incube a 35 C por 48 horas • Producción de gas – Positivo • Ingredientes • Oxgall – forma de bilis • Brilliant Green Dye – Inhibe Gram + • Resultados son coliformes confirmados • No utilize BGLB directamente – Altamente inhibitorio

13. Medio – EMB Agar • Eosine Methylene Bule Agar • Placas ya servidas • Estriado para aislar del MPN • Ingredientes - Diferencial • Peptona – Proteina • Lactosa – Produccion de acido • Tinte Eosine – Inhibitorio • Azul de metileno – Indicador de pH • E. coli and Enterobacer • Nucleated, dark centered, with or without a metallic green sheen – CONFIRMED COLIFORMS

14. Coliforms

15. Coliforms

16. Método Sólido • VRBA • Violet Red Bile Agar • Peptone – Nitrogen Source • Lactose – Acid Production • Neutral Red – Indicator (6.8 red, 8.0 yellow) • Crystal Violet – Inhibits Gram + • NaCl – Increase Growth Rate • Bile Salts

17. VRBA • Típica – Rojo-púrpura, Colonias Elípticas, puede ser una zona de precipitación • Se recomiendan placas con 10-100 colonias– Colonias más grandes • Ponga una capa de agar luego que la primera solidifique • Resultados – Presumptive Coliformes

18. Coliformes