Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke

1. Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke Bekő Gabriella SE, Laboratóriumi Medicina Intézet 2013.május 30.

2. A hematológiai paraméterek intra-individuális biológiai variabilitása www. Westgard.com

3. Az elvárt analitikai variabilitás www. Westgard.com

4. Optikai, fényszórás (vagy szórt lézer) elvű mérés Advia Hidrodinamikailag fókuszált sejtáramlás, megvilágító lézer fény és detektor Kis szög (2-4o) alatti fényszórás a sejt mérettel, a nagyobb szög alatti (10-15o) fényszórás a sejt tartalommal (pl. hemoglobin koncentráció, vagy sejtmag sûrûség) arányos A kis és a nagy szög alatt szórt fény intenzitásának komplex matematikai összefüggését a Mie teória írja le

5. Optikai, fényszórás (vagy szórt lézer) elvű mérés 7 lézer detektorral Beckman Coulter DXH-800 - Volume (térfogat) - Conductivity (vezetőképesség) - Axial light loss (AL2) - Low angle light scatter (LALS) - Median angle light scatter (MALS) - Lower median angle light scatter (LMALS) - Upper median angle light scatter (UMALS) fényáteresztő képesség (transparency) sejt komplexitás sejt granularitás, sejtmembrán felszíne

6. Fluoreszcens áramlásos cytometria Sysmex MAPPS (Multi Angle Polarized Scatter Separation) A fényszóródás mérésetöbb szögből

7. CellDyn Saphire sejt méret sejt komplexitás sejt lebenyezettség sejt granuláltság MAPPS

8. Fluoreszcens festés A sejtek emelkedett nukleinsav (DNS vagy RNS) tartalmával arányos a fluoreszcens jel nagysága

9. Felhődiagram fluorescens festéssel Sysmex XN-2000 automatán Sysmex XE-2100

10. IG (Immature Granulocytes) Promyelocyta Promyelocyta IG Myelocyta Myelocyta Metamyelocyta Metamyelocyta

11. Felhődiagram peroxidáz festéssel (ADVIA 120) 1 Zaj 2 Magvas vörösvérsejt3 Összetapadt thrombocyták 4 Lymfocyták és basophylek5 Large Unstained Cells (LUC)6 Monocyták 7 Neutropylek 8 Eosinophylek Morfológiai flag-ek: ATYP(Atípusos lymphocyták) IG (Éretlen granulocyták) MPO index(Myeloperoxidase hiány) NRBC(Magvas vörösvérsejtek) PLT-CLM(Összetapadt thrombocyták)

12. Emelkedhet: Bakteriális infekció Akut gyulladás Tumor (csontvelő metastasis) Szövet nekrózis Akut transzplantátum rejekció Sebészeti, ortopédiai trauma Myeloproliferatív neoplasia Steroid Terhesség (harmadik trimeszter) Nagyobb jelentőségű az emelkedés (IGs>2%): idősek, újszülöttek, koraszülöttek akut infekció myeloszupresszált betegek akut infekció neutropeniával járó szepsis IG (Immature Granulocytes)

13. Felnőtt referenciatartomány (n=58) Bernard Fernandes, Yukio Hamaguchi:Automated Enumeration of Immature Granulocytes Hematopathology 2007

14. Éretlen granulocyták (IG%) optimalizált cutoff értéke infekció esetén Balamurugan Senthilnayagam at all.:Automated Measurement of Immature Granulocytes: Performance Characteristics and Utility in Routine Clinical Practice - Pathology Research International 2012

15. Infekcióban szenvedő betegek fehérvérsejt és IG értékei szignifikánsan magasabbak pozitív hemokultúra esetén v Balamurugan Senthilnayagam at all.:Automated Measurement of Immature Granulocytes: Performance Characteristics and Utility in Routine Clinical Practice - Pathology Research International 2012

16. IG % alakulása különböző betegcsoportokban (Sysmex XN1000) Ig% N=45 N=80 N=48 NS Egészséges kontrol Akut coronaria szindróma Szepszis gyanú

17. Az éretlen neutrofil granulocyták abszolút számának (#IG) alakulása különböző betegcsoportokban N=45 N=80 N=48 NS Egészséges kontrol Szepszis gyanú Akut coronaria szindróma

18. IG% IG=24,4% IG=4,7% IG=2,8% D. P.né 81 éves, vastagbél rezekciót követően egy hónappal subileusos tünetek jelentkeznek, beteg belázasodik Immature Granulocytes

19. A blast flag klinikai értéke 4 különböző hematológia automatán mérve (n = 430) S.-H. KANG at al: Comparison of four hematology analyzers, CELL-DYNSapphire, ADVIA 120, Coulter LH 750, and SysmexXE-2100, in terms of clinical usefulness INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY HEMATOLOGY 2008

20. Felhődiagram a bazofil csatornán (ADVIA) 1. Zaj 2. Blasztok sejtmagja 3. Monociták és limfociták sejtmagja 4. Bazofil sejtek 5. Bazofil gyanús sejtek 6. Szaturáció 7. Neutrofil és eosinofil sejtmagok Morfológiai flag-ek: BLASTS(Blasztok) LS(Nem szegmentált granulocyták)

21. Blasztok és abnormál lymphocyták elkülönítése a WPC csatornán (SYSMEX XN-1000)

22. 45 leukémiás beteg „blaszt” értékeinek összehasonlítása Khí-négyzet próbával BLASTM → blaszt pozitivitás mikroszkóppal BLASTA → blaszt pozitivitás Advia2120 BLASTXN → blaszt pozitivitás Sysmex XN BLASTZ → blaszt pozitivitás Celldyn Saphire Kappa: 0,4-0,8 között→ jó megfelelőség Kappa: 0,8 fölött → kiváló megfelelőség

23. Az „ atyp flag „klinikai értéke 4 különböző hematológia automatán mérve (n = 430) S.-H. KANG at al: Comparison of four hematology analyzers, CELL-DYNSapphire, ADVIA 120, Coulter LH 750, and SysmexXE-2100, in terms of clinical usefulness INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY HEMATOLOGY 2008

24. 45 leukémiás beteg „Atyp” értékeinek összehasonlítása (Advia, Sysmex XN, CellDyn Saphire) Khí-négyzet próbával Kappa: 0,4-0,8 között→ jó megfelelőség Kappa: 0,8 fölött → kiváló megfelelőség ATYP A → ATIP Ly pozitivitás Advia2120 ATYP XN → ATIP Ly pozitivitás Sysmex XN ATYP Z → ATIP Ly pozitivitás Celldyn Saphire

25. Különböző érettségű erythroblastok

26. Magvas vörösvérsejtek az Advia 2120 automata esetén

27. UniCel DxH 800 Coulter • NRBC mérés: • Vérminta hígítás • Nem magvas vvtlizálás • Elkülönítve marad: • - fehérvérsejt • + magvas vvs • - thrombocyta • - sejttörmelék • Minta a flowcell-be kerül • Lézer analízis • - sejtméret • - sejt karakterisztika • - sejtmag differenciálás • AL2 fénynyalábbal • interferencia kiszűrése

28. Magvas vörösvérsejtek a Sysmex XN-1000 WNR csatornáján

29. NRBC mérés CellDyn-Sapphire automatán Az FL3 (speciális DNS festékanyag) 630 nm középhullámhosszú vörös fluoreszcencia -NRBC-k azonosítására alkalmas

30. Leletkiadás magvas vörösvérsejt esetén

31. A magvas vörösvérsejtek megjelenése a periférián • Újszülött korban: - újszülöttkori hemolitikus betegség - koraszülöttek és újszülöttek hypoxiás károsodása • Felnőttkorban: - thalassemia - myeloproliferatív neoplasia ( myelofibrosis) - szolid tumor csontvelői metasztázissal - extramedulláris hematopoiesis - hematopoietikus stressz ( szeptikémia, masszív hemorrhagia, súlyos hypoxia) Clin Chem Lab Med 2012;50(2):357–360

32. NRBC előfordulása hematológiai betegségekben Clin Chem Lab Med 2012;50(2):357–360

33. Ajánlott klinikai alkalmazás • hematológiai betegségek diagnózisa • súlyos kardio-thorakális műtéten átesett, egyéb sebészet intenzív ellátást igénylő nem hematológiai betegségben prognosztikai faktor - csontvelő transzplantáció után ( >0,2x 109/L fölött magas mortalitási ráta) - thalasszémia szindromában transzfúziós terápia hatékonyságának monitorozása

34. High Angle (5-15 degrees) Oxazine 750 Absorbance Reticulocyta cytogram - reticulocyta érés Advia

35. Reticulocyta mérés Beckman Coulter UniCel DxH 800 automatán Metilénkék festést használva

36. Reticulocyta mérés a Sysmex XN automatán

37. Reticulocyta cytogram Sysmex XN-2000 automatán

38. Reticulocyta mérés CellDyn- Saphire automatán • A készülék a FL1 RNA és7o Light scatter-t használja • A ”retic-box” - ot egy hisztogramba transzformálja • Egy dinamikus küszöb felállításával választja el az RBC és a RETC populációt. • Második lépésben, újabb küszöb felállításával választja el az érett és az éretlen reticulocytákat (IRF) WBC

39. P < 0,001 P < 0,001 P < 0,001 NS Advia 2120, Beckman DXH 800. Sysmex XN-1000, CellDYN Saphire Reticulocyta % összehasonlítása 110 hemodializált beteg esetén

40. Advia 2120, Beckman DXH 800, Sysmex XN-1000, CellDyn- Saphire Reticulocyta % összehasonlítása NS Advia DxH800 Sapphire Sysmex

41. Származtatott reticulocyta paraméterek • MCVr(vagy MRV)a reticulocyta populáció átlagos sejtmérete • CHrvagy RetHe a reticulocyta populációban egy sejt átlagos hemoglobin tartalma • CHCMr a reticulocyta populáció átlagos hemoglobin tartalma • M-RTC% a közepes abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban • M-RTC# a közepes abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya abszolút értékben • H-RTC% a nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban • H-RTC# a nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya abszolút értékben • IRF-M+Ha közepes és nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban

42. CHr vagy Ret-He klinikai jelentősége A reticulocyta hemoglobin content (CHr vagy Ret-He) → jelzi a vörösvérsejtek termelődéséhez, a megelőző 3- 4 napban funkcionálisan rendelkezésre álló vaskészletet Klinikai jelentősége: Vashiányos anémia diagnózisa felnőttekben(Mast et al., Blood 2002;99:1489–1491) és gyermekekben(Brugnara et al., JAMA 1999;281:2225–2230; Ullrich et al., JAMA 2005;294:924–930; Bakr and Sarette, Eur J Pediatr 2006;165:442–445). Intravénás és orális vasterápia hatékonyságát már 2-3 nap múlva jelzi (Brugnara et al., Blood 1994;83:3100–3101). Korai indikátor az erithropoein terápia monitorozásakor(Fishbane et al., Kidney Int 1997;52:217–222; Fishbane et al., Kidney Int 2001;60:2406–2411; Mittman et al., Am J Kidney Dis 1997;30:912–922; Tsuchiya et al., Clin Nephrol 2003;59:115–123; Chuang et al., Nephrol Dial Transplant 2003;18:370–377). Vashiányos anémia elkülönítése más anémiáktól Reticulocyte hemoglobin content is a recent addition to an expanding list of biomarkers that can be used to differentiate iron deficiency from other causes of anemia. Am. J. Hematol., 2008.

43. R= 0.93

44. R=0,42 RSf→Red blood cell size factor

45. IRF(Immature reticulocyte fraction) használata • Anémiák differenciálása • Táplálkozással kapcsolatos anémiák terápiájának monitorozása • Csontvelő regeneráció korai monitorozás (csontvelő transzplantáció vagy kemoterápia után) • Aplasztikus anémia verifikálása • Csontvelő sejtek gyűjtésének időzítése

46. R=0.77

47. R=0.85

48. R= 0,42

49. RBC fragmentocyták a Sysmex XE 2000 felhődiagramon RBC

50. Fragmentált vörösvérsejtek Sysmex XE 2000 automatán Klinikai alkalmazás: Microangiopathiák diagnózisa és Monitorozása a, DIC b, thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) c, hemolytic-uremic syndrome (HUS) Thrombotic microangiopathic anemia (TMA) Csontvelőtranszplantáció utáni monitorozás HELLP syndrome Vvt-k fizikai ártalma kóros felszínen (műbillentyű, artériás graft)