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IDENTIFICATION DES MYCOBACTERIES W. MAHJOUBI Laboratoire de Microbiologie H ôpital A. Mami de l’Ariana 31-Mars-2006 PowerPoint Presentation
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IDENTIFICATION DES MYCOBACTERIES W. MAHJOUBI Laboratoire de Microbiologie H ôpital A. Mami de l’Ariana 31-Mars-2006

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IDENTIFICATION DES MYCOBACTERIES W. MAHJOUBI Laboratoire de Microbiologie H ôpital A. Mami de l’Ariana 31-Mars-2006. MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS COMPLEXE. Mycobacterium tuberculosis: réservoir homme Mycobacterium bovis: réservoir bovin Mycobacterium africanum: Afrique noir.

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IDENTIFICATION DES MYCOBACTERIESW. MAHJOUBILaboratoire de MicrobiologieHôpital A. Mami de l’Ariana31-Mars-2006
mycobacterium tuberculosis complexe
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSISCOMPLEXE
  • Mycobacterium tuberculosis:réservoir homme
  • Mycobacterium bovis:réservoir bovin
  • Mycobacterium africanum:Afrique noir

MYCOBACTERIES NON TUBERCULEUSESATYPIQUES

  • Présentes dans l’environnement sans danger pour l’homme
  • Responsable d’infections opportunistes chez les ID
  • Pays développés: recrudescence de la tuberculose (SIDA)
  • Nécessité d’identification des mycobactéries

MYCOBACTERIUM LEPRAE

classification de runyon
CLASSIFICATION DE RUNYON
  • GROUPE O: Les bacilles tuberculeux
  • GROUPE I :Mycobactéries à croissance lente, photochromogènes
  • GROUPE II : Mycobactéries à croissance lente, scotochromogènes
  • GROUPE III : Mycobactéries à croissance lente, non chromogènes
  • GROUPE IV : Mycobactéries à croissance rapide, pigmentées ou non
production de pigment
PRODUCTION DE PIGMENT
  • TECHNIQUE : Ensemencer deux tubes L et O avec une dilution 10-5, culture à 37°. Croissance sur tube L, illuminer tube O sous une lampe à fluoréscence
  • RESULTATS :

Mycobactéries sans pigmentation: Souche non chromogène ( gp III)

Mycobactéries pigmentant sans illumination: Souche scotochromogène (gp II)

Mycobactéries pigmentant à la lumière: Souche photochromogène (gp I)

identification par les tests biochimiques
IDENTIFICATION PAR LES TESTS BIOCHIMIQUES
  • Indispensables
  • Seuls à établir un diagnostic d’espèces
  • Applicables sur les colonies obtenues par culture
  • Mycobactéries tuberculosis complexe ≠ Atypiques
niacine test
NIACINE TEST
  • Principe: Recherche de la niacine ou acide nicotinique
  • Technique: R1: aniline à 4% dans alcool éthylique à 95° (fl brun à 4°) R2 :bromure de cyanogène à 10% dans ED (fl brun à 4°)
  • Mode opératoire: +1ml ED dans un tube de culture,

laisser en contact 15min,

reprendre 0.5ml dans un tube et

ajouter 0.5ml R1 +0.5ml R2: col jaune

  • Résultats: M. tuberculosis: niacine +M. africanum: production variable M. bovis: Négatif

Mycobactéries non tuberculeues: Négatif

  • NB: Tests sur bandelettes (DIFCO) remplace cette manipulation
reduction des nitrates
REDUCTION DES NITRATES
  • Techniques: R1: Sol de nitrate de Na 0.01M R2 : Hcl dilué

R3 : sol de sulfaniline R4 : sol de alpha naphtylamine

  • Mode opératoire: Mettre en suspension des colonies dans la solution1, incuber 2 heures à 37°, ajouter une goutte R2, deux gouttes R3 et deux gouttes R4
  • Résultats: Positif, virage de la coloration au rouge (intensité de la couleur: + jusqu’à 5+)

M.tuberculosis: positifM.bovis et M. africanum: négatif

Mycobactéries non tuberculeuses: négatif

NB: Pour confirmer une réaction négative ajouter poudre de zinc

thermosensibilite de la catalase
THERMOSENSIBILITE DE LA CATALASE
  • TECHNIQUE: Deux tubes contenant une suspension bactérienne dans tampon phosphate, un tube à température ambiante, l’autre à 68°c pendant 20 min. Après refroidissement ajouter 0.5ml de H2O2 à 30%
  • RESULTAT: Positif, observation de bulles à la surface
  • La catalase est thermolabile pour les 3 espèces pathogènes, thermorésistante pour les atypiques
beta glucosidase
BETA- GLUCOSIDASE
  • TECHNIQUE: Suspension de colonies de culture dans 0.5ml de sol. de para nitrophényl ß-D glucoside, 3h à 37°
  • RESULTAT: positif, apparition d’une coloration jaune

M.tuberculosis:positif

M. bovis: négatif

Mycobactéries non tuberculeuses: négatif (groupe I variable)

utilisation du milieu l wenstein jensen contenant differents inhibiteurs
UTILISATION DU MILIEU LÖWENSTEIN-JENSENCONTENANT DIFFERENTS INHIBITEURS

TECHNIQUE: Ensemencer avec 0.1ml de la dilution au 1/1000 de la suspension bactérienne, incuber 3 semaines à 37°

  • P. nitrobenzoate PNB à 500ug/ml: Sensible pour les M.de la tuberculose:
  • Hydroxylamine HYD à 250 ug/ml: Sensible pour les M. de la tuberculose
  • Acide thiophène 2 carboxylique (TCH) à 2 ug/ml:

Résultats: M. tuberculosis: Résistant

M. bovis: Sensible

M. non tuberculeuse: Résistant

  • D-cyclosérine:Résistantavec BCG
  • Pyrazinamide PZA à 50 et 100ug/ml: Résistant avec bovis
tests de biologie moleculaire
TESTS DE BIOLOGIE MOLECULAIRE
  • Différentiation génétique du MTBC et des atypiques
  • Extraction ADN bactérien de la culture
  • Amplification de la cible par PCR
  • Hybridation des amplicons aux sondes sur bandelettes
  • Révélation par un conjugué marqué et son substrat
  • Interprétation des signaux à l’aide d’une matrice
genotype mtbc
GenoType®MTBC

M.tuberculosis

BCG