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Les examens biologiques en Hématologie. Rémi Letestu Laboratoire d’Hématologie CHU Avicenne UFR SMBH DCEM1 (2006-07). Hématopoïèse. Cellules souches. Progéniteurs lymphoïdes. CFU-GEMM. MOELLE OSSEUSE. BFU-E. CFU-E. Tpo. réticulocytes. mégacaryocytes. SANG. plaquettes. monocytes.

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Presentation Transcript
les examens biologiques en h matologie

Les examens biologiquesen Hématologie

Rémi Letestu

Laboratoire d’Hématologie

CHU Avicenne

UFR SMBH

DCEM1 (2006-07)

h matopo se
Hématopoïèse

Cellules souches

Progéniteurs lymphoïdes

CFU-GEMM

MOELLE OSSEUSE

BFU-E

CFU-E

Tpo

réticulocytes

mégacaryocytes

SANG

plaquettes

monocytes

éosinophiles

T

B

érythrocytes

neutrophiles

basophiles

lymphocytes

macrophages

les diff rents examens
Les différents examens

MOELLE OSSEUSE

Myélogramme

Biopsie médullaire

SANG

NFS ou hémogramme

Frottis sanguin

GANGLION (adénopathie)

Ponction gg

Biopsie gg

BIOPSIES

Chirurgicales ou à l’aiguille

les diff rentes techniques
Les différentes techniques

CYTOMETRIE EN FLUX

ou

IMMUNOPHENOTYPAGE

CYTOLOGIE

Cytochimie

CYTOGENETIQUE

HISTOLOGIE

ou

ANATOMO-PATHOLOGIE

BIOLOGIE

MOLECULAIRE

h mogramme ou nfs
Hémogramme ou NFS
  • Définition: analyse quantitative et qualitative des éléments figurés du sang
    • Décompte des GR, GB, et plaquettes par unité de vol de sang (numération)
    • Décompte des ≠ sous-types de GB (formule sanguine)
    • Analyse morphologique de ces éléments
slide6
La Numération Formule Sanguine (NFS)
  • Ponction de sang veineux
  • Prélèvement sur anticoagulant : EDTA
  • Compteurs Automatiques :
    • importance des contrôles ++
valeurs normales de l h mogramme
Valeurs Normales de l ’Hémogramme

La Numération

  • Globules Blancs : 4-10x109/L 4-15x109/L
  • Plaquettes : 150-450 x109/L 20 x109/L
  • Globules Rouges
  • H : 4.5-6.2 x1012/L F : 4-5.4 x1012/L
  • E : 3.6-5 x1012/L NRS : 5-6 x1012/L
  • Hémoglobine (Hb)
  • H : 13-18 g/dL F : 12-16 g/dL
  • E : 12-16 g/dL NRS : 14-20 g/dL
  • Hématocrite
  • H : 40-54% F : 35-47%
  • E : 36-44% NRS : 44-62%
valeurs normales de l h mogramme1
Valeurs Normales de l ’Hémogramme
  • Les Réticulocytes
    • Automates / Coloration sur lame (/1000 GR)
    • Environ 1-/120° des GR
    • Expression en valeur absolue
    • 25000 à 100000 quand Hb Normale
  • La Formule
    • Polynucléaires Neutrophiles : 1.7-7x109/L
    • Polynucléaires Eosinophiles : 0-0.5x109/L
    • Polynucléaires Basophiles : 0-0.05x109/L
    • Lymphocytes : 1.5-4x109/L
    • Monocytes : 0.1-1x109/L
valeurs normales de l h mogramme2
Valeurs Normales de l ’Hémogramme

Les constantes de Wintrobe

  • Volume Globulaire Moyen (VGM) 85-95 fl (83-97)
  • Concentration Corpusculaire Moyenne en Hb (CCMH) 32-36%
  • Teneur Corpusculaire Moyenne en Hb (TCMH) 27-32 pg/cellule
frottis sanguin
Frottis sanguin
  • Technique
    • Étalement d’une goutte de sang sur une lame
    • Coloration May-Grünwald-Giemsa (MGG)
    • Analyse au microscope
  • Indications
    • Diagnostic d’anomalies morphologiques
      • Des GR
      • Des GB
      • Des plaquettes
    • Recherche et identification de cellules anormales
      • myélémie,
      • blastes
      • cellules lymphomateuses
    • Vérification du nombre de plaquettes++
quand prescrire un h mogramme en urgence
Quand prescrire un Hémogrammeen urgence
  • Etat de choc
  • Pâleur intense, asthénie,
  • Angine ulcéro-nécrotique ou résistante aux antibiotiques
  • Fièvre élevée après prise de médicament, surtout après chimiothérapie anti-mitotique
  • Fièvre résistante aux antibiotiques
  • Purpura pétéchial, syndrome hémorragique
valeurs de l h mogramme indiquant une consultation sp cialis e en urgence
Valeurs de l’hémogramme indiquant une consultation spécialisée en urgence
  • Hématocrite supérieur à 60 %
  • Anémie inférieure à 7 g/dl ou mal tolérée
  • Neutropénie inférieure à 200/mm3 (0.2 G/L)
  • Hyperleucocytose faite de cellules immatures supérieure à 20 000/mm3
  • Thrombopénie inférieure à 20 000/mm3 (20 G/L) même sans syndrome hémorragique
      • Après élimination d’une fausse thrombopénie à l’EDTA
le my logramme
Le Myélogramme
  • Historique
    • 1920-1927 Arinkin -1935 Mallarmé
  • Ponction Sternale / Iliaque Post > Antérieure
  • Indications
    • Nombreuses : toute suspicion d’anomalie centrale de production des éléments du sang

Anémies normo ou macrocytaires arégénératives

et/ou Neutropénies

et/ou Thrombopénie

Pancytopénie

Pic monoclonal

    • Diagnostic
    • Analyses spécialisées
  • Contre-indications
    • Très rares - Enfant - Contre indication sternale
    • Troubles graves de la coagulation
le my logramme1
Le Myélogramme
  • Précautions
    • Indispensables
    • Chez l ’enfant
    • Formation au geste
    • Règles strictes
  • Déroulement du geste
    • Anesthésie locale
    • Ponction
    • Réalisation des frottis :

point essentiel

Trocart de type

Mallarmé

Trocarts de type

Jamshidi

slide15
Le Myélogramme
  • Quantité & Qualité de la Moelle Osseuse
  • Cellules à l ’origine des éléments circulants
  • Exploration des lignées Myéloïde et Lymphoïde
slide16

La lignée granuleuse neutrophile

MB

Myéloblaste

PML

Promyélocyte

MLN

Myélocyte neutrophile

MMLN

Métamyélocyte

PN

Polynucléaire neutrophile

slide17

PROER

Proérythroblaste

La lignée érythroblastique

ERB

Érythroblaste basophile

ERP

Érythroblaste

polychromatophile

ERA

Érythroblaste acidophile

l ad nogramme
L ’Adénogramme
  • Organe lymphoïde
  • Exploration des lignées Lymphoïdes
  • Ponction aiguille
  • Frottis

Facile, non douloureux, informatif ++

les biopsies
Les Biopsies
  • Chirurgicales
      • Masse tumorale (lymphomes)
      • Ganglion : La biopsie ganglionnaire
  • A l’aiguille
      • Sous Scanner
      • La Biopsie Ostéo-Médullaire (BOM)
la biopsie ganglionnaire
La biopsie ganglionnaire
  • Prélèvement ganglion entier par technique chirurgicale
  • Morphologie, coupes histologique
  • Immunomarquages sur lame
    • immunocytochimie
  • Suspension de cellules
la biopsie ost om dullaire bom
La biopsie ostéomédullaire (BOM)
  • Historique
    • 1920-1927 Arinkin
    • 1950 développement
  • Ponction Iliaque Post
  • Indications
    • Nombreuses
    • Diagnostic et Bilan d ’extension
    • Analyses spécialisées
  • Contre-indications
    • Rares
    • Troubles graves de la coagulation
    • Thrombopénie sévère, thrombopathie
  • Déroulement du geste
slide22

La Cytométrie enFlux

Système Fluidique

  • Mélange cellulaire hétérogène et complexe
  • Injection de la suspension cellulaire
  • Liquide de gaine sous pression
  • Etirement de la veine liquide
  • Alignement et passage des cellules une par une dans la chambre d ’analyse

Paramètres Optiques

  • Dans la chambre d’analyse : impact avec un faisceau LASER
  • Lumière monochromatique cohérente
  • «Eclairage de la cellules»
    • Taille relative : Forward Scatter ou FSC
    • Complexité cytoplasmique : Side Scatter SSC
  • Excitation des fluorochromes et émission de fluorescence
slide23

Paramètres fluorescents

Pourquoi la cellule est-elle fluorescente ?

  • Les cellules expriment des marqueurs antigéniques :
    • Protéines
    • Sucres
  • En surface ou en intracytoplasmique
  • Marqueurs classés en CD (Cluster de Differenciation)
  • Sélection d’anticorps reconnaissant spécifiquement ces marqueurs
  • Couplage des anticorps à différents fluorochromes
  • Signaux fluorescents recueillis :
    • Nombre et type de marqueurs exprimés Qualitatif
    • Densité d’expression Quantitatif
slide24

Conversion en données numériques

  • Recueil des signaux optiques :
    • Miroirs, filtres, photomultiplicateur
  • Transformation en signaux électroniques pour une analyse informatique avec un logiciel dédié
  • Mise en forme des données
  • Analyse des graphes, positionnement des seuils de positivité et des populations d’intérêt, statistiques
slide25

Applications dans un Laboratoire de Recherche

  • Etudes de la fonction Immune
  • Cellules Hématopoïétiques
  • Etudes Multi-drug résistance (cancer)
  • Etudes cinétiques (fonction cellulaire)
  • Analyse des plaquettes
  • Détection des Microorganismes (Bactéries, Parasites)
  • Analyse des échantillons de l’environnement (Giardia, Cryptospiridium)
  • Détection Micro-Particules & Virus
slide26

Applications en Biologie Médicale

  • Immunophénotypage Leucémie et Lymphomes
  • Suivi de la maladie résiduelle des hémopathies
  • Immunophénotypage VIH
  • Comptes Absolus CD4
  • Numération cellules progéniteurs (CD34)
  • Analyse des glycoprotéines plaquettaires
  • Cycle cellulaire et ploïdie de tumeurs
  • Numération des Réticulocytes
  • Cross-Match (transplantation d’organe)
  • Détection des Leucocytes Résiduels
cytog n tique
Cytogénétique

CaryotypeCultureMitosesClassement des chromosomes

FISH

Hybridation in situ de sondes fluorescentes

biologie mol culaire

X2

X2

X2

Biologie Moléculaire
  • Séquençage
  • PCR : Polymerase Chain Reaction
    • Sur ADN
    • Sur ADN complémentaire RT-PCR

n Cycles

=

2n copies

biologie mol culaire1

PRAD1/BCL1/CCND1

D1

D2

D3

Biologie Moléculaire

14q32

  • Recherche d’équivalent moléculaire de translocation
    • IgH-Bcl1 et t(11;14)
    • IgH-Bcl2 et t(14;18)
  • Recherche d’expression dérégulée d’un gène
    • Cycline D1 (t(11;14))
  • Recherche de transcrit de fusion
    • BCR-Abelson et t(9;22)

m

d

g

a

e

VH

DH

JH

120kb

11q13

RT-PCR quantitative (RQ-PCR) pour le suivi des patients

culture des prog niteurs h matopo tiques
Culture des progéniteurs hématopoïétiques

EEC

CFU-E

EEC = endogenous erythroid colonies

Formation des colonies érythroïdes « spontanées » in vitro

slide31

Conclusion : Orientation Diagnostique

Hyperlymphocytose ou Lymphocytes atypiques

Syndrome mononucléosique

Cytométrie en Flux

Lymphome T

Monotypie

douteuse

CD19+5+

Monotypie

CD19+5-

Monotypie

Score bas 0-1-2-3

Compléments CMF

Score 4-5

Score 1-2-3

LNH Folliculaire

LNH Zone marginale

L. à Tricholeucocytes

SLVL

LNH lymphoplasmocytaire

L. Prolymphocytaire B (Galton)

LNH du Manteau

SLPC CD5+

(LLC atypique ou autre)

LLC

typique :

diagnostic

positif

Immuno-

phénotypique

Examens spécialisés complémentaires

Cytogénétique

FISH

Biologie

Moléculaire

Anatomie

pathologique