Universidad Nacional Autónoma de México

1. Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Química Inmunología Aplicada Hipersensibilidad Tipo I Frausto Castorena Jarumi Fernanda Gallardo Celis Janet García Hernández Liliana Hernández Carvajal Ixzel

2. Hipersensibilidad tipo I • Los individuos que tiende a desarrollar reacciones de hipersensibilidad intensas se denominan atópicos y se dice que sufren alergias. • Los antígenos que desencadenan intensas reacciones de hipersensibilidad inmediata se llaman alérgenos. • Atopia significa “inusual”, pero se sabe que la alergia es bastante común.

3. Anticuerpo IgE • La IgE fue la última inmunoglobulina descubierta (año 1967). Es el isotipo de inmunoglobulina que contiene la cadena pesada . • Su concentración sérica y su vida media son las más bajas de todas las inmunoglobulinas, normalmente presente en el plasma en una concentración menor a 1 g/mL.

4. Anticuerpo IgE • El valor de IgE sérica se expresa normalmente en unidades internacionales (UI) por ml (1 UI = 2,4 ng de proteína). • El nivel de IgE varía con la edad; en la sangre de cordón de recién nacidos normales es interior a 0.5 UI/ml, y en el adulto normal es alrededor de 20 UI/ml. • Se encuentra aumentada en diferentes condiciones alérgicas.

5. Anticuerpo IgE • La defensa contra muchas infecciones por helmintos está mediada por anticuerpos IgE y eosinófilos. • Los helmintos estimulan a Th2, que secretan IL-4 e IL-5. La IL-4 estimula la producción de IgE, y la IL-5 estimula el desarrollo y activación de los eosinófilos.

6. Anticuerpo IgE

7. Alergénos • Son glicoproteínas, lipoproteínas o sustancias químicas conjugadas con proteínas o haptenos de origen generalmente biológico. • Todos los epítopos alergénicos dentro de una proteína producen una respuesta biológica bien definida y medible en individuos alérgicos.

8. Alergénos • Los alérgenos habituales consisten en proteínas de polen, ácaros del polvo doméstico, capas de animales y ciertos alimentos • Las proteínas alergénicas pueden identificarse usando los anticuerpos IgE contenidos en el suero en combinación con numerosos ensayos inmunoquímicos.

9. Alergénos • Extractos de alérgenos de origen natural se consideran heterogéneos, debido a que contienen muchas proteínas alergénicas. • Los pacientes responden a combinaciones de isoalergénos de forma diferente, los cuales son casi idénticos excepto por pequeñas diferencias en su composición de aminoácidos.

10. Diagnóstico de Laboratorio • Se basa en la historia clínica y examen físico del paciente. • Todos los pacientes con antecedentes de una alergia pueden tener un resultado positivo en la prueba de IgE específica-alérgeno.

11. Pruebas Cutáneas • Se usan en el diagnóstico de las enfermedades alérgicas inducidas por alergenos inhalados y por alimentos. • Pueden ser epicutáneos ("prick" o punción y "scratch" o escarificación) o intracutáneos (intradérmicos).

12. Pruebas Cutáneas • Se produce una respuesta positiva cuando el alergeno se une a las moléculas de IgE específicas presentes en la superficie de las células cebadas de la dermis causando su entrecruzamiento. • Esta reacción Ag-Ac causa la rápida liberación (en 15 a 20 min) de mediadores químicos como la histamina y otros, responsables de la respuesta edematosa rodeada de un eritema.

13. Formación del habón

14. Pruebas Cutáneas • Son simples de efectuar, seguros, rápidos y económicos. Sin embargo, están sujetos a numerosas variables relacionadas tanto con la técnica misma como con el paciente. • Los alergenos a usar dependen de la historia clínica, de la edad del paciente, y de la exposición ambiental.

15. Pruebas Cutáneas (Interpretación) • Puede registrarse el diámetro promedio del edema, el diámetro mínimo de un edema significativo (>2,3,4, o 5 mm). • Se recomienda en general la medición de los diámetros mayores,  tanto del edema como del eritema y sus correspondientes diámetros, y su interpretación en relación con el control negativo y positivo.

16. Pruebas Cutáneas (Interpretación) • Un prick test igual o mayor que el control de histamina probablemente es de relevancia clínica, en cambio, reacciones menores que la causada por histamina son probablemente irrelevantes.

17. Tabla 14.3. Tabla de lectura de pruebas cutáneas

18. Pruebas Cutáneas Los siguientes medicamentos pueden interferir con las pruebas cutáneas y deben evitarse: • Antihistamínicos, tanto de acción rápida como prolongada (el astemizol puede interferir hasta por 6 semanas). • Antidepresivos tricíclicos como, la doxepina, clorpromazina, hidroxicina. • Uso prolongado de esteroides tópicos potentes en el sitio de la prueba.

19. Pruebas Cutáneas • Método de tamizado (screening) más útil en la identificación de atopia, tanto en casos individuales como en grupos de individuos. • Un test posiftvo sólo identifica la presencia de anticuerpo (Ac) IgE contra el Ag usado, lo que en un paciente sintomático no permite suponer que estos Ac sean los responsables de los síntomas, sin considerar cuidadosamente la historia del paciente, puede constituir una manifestación de alergia actual, o ser el resultado de una, sensibilización previa.

20. PRUEBAS DIAGNÓSTICO • IgE total en suero • Triptasa de las células mastoides • IgG específica para el veneno de Hymenoptera • Medida de la cantidad de leucotrienos, así como de la cantidad de proteínas granulares de los eosinófilos, y óxido nítrico • Precipitinas para PH

21. ENSAYO RAST Medición de la respuesta

22. Ensayo RAST de 2a. Generación. • Mayor cantidad de alergenos y de mejor calidad • Nuevas matrices • Nuevos marcadores • Calibración que permite obtener datos de forma cuantitativa • Son ensayos más sensibles, específicos, cuantitativos, reproducibles y automatizados • Sin embargo se deberá tener un estricto control de calidad.

23. Comparación de resultados en los ensayos de piel y suero

24. Ensayos de cernimiento para multialergenos IgE • Se emplean alrededor de 15 alergénos • Permite confirmar la ausencia de enfermedades atópicas o bien que no estén mediadas por IgE • Reducen la necesidad de realizar múltiples pruebas de forma in vitro o in vivo.

25. IgE total en suero • Única prueba regulada • Se emplea la fase estacionaria más adecuada • Se emplean los marcadores adecuados • La sensibilidad analítica del ensayo es de 0.5 a 1 mg/L • Resultados reportados de acuerdo a la edad del paciente

26. HABILIDAD DE LA PRUEBA PARA EL TOTAL Y ANTICUERPOS ALERGENO ESPECIFICO DE IgE • CLIA-88 requiere un estudio de habilidad externo. • El estudio consiste en el análisis de 5 pruebas cada 17 semanas (3 ciclos por año), para el el total de IgE en suero y 5 para anticuerpos IgE alergeno-especifico, y un multialergeno. • Para el suero total se informan, la media, SD, coeficiente de variación y el valor medio, bajo y alto, para cada método. • Los laboratorios que reportan el total de IgE en suero fuera de media +/- 3 SD, son clasificados como “fuera de control”. • Los IgE alergeno-especifico son analitos no regulados por los estatutos de CLIA-88

27. RAST ENSAYO DE VENENO POR INHIBICION COMPETITIVA • Similitud estructural entre avispas vespid y Polistes. REACTIVIDAD- CRUZADA • Los alergénos del veneno son hialuronidasa, fosfolipasa A1/B y antigeno 5. • Se usa para definir bien lacomposición terapéutica apropiada de venenos por la picadura de insecto a pacientes alérgicos que tienen sensibilidad multiple a reactividad-cruzada potencial y son elegidos para recibir inmunoterapia.

28. Esta prueba se indica para pacientes que tiene una respuesta superficial fuerte o un nivel alto de anticuerpos IgE en suero, al veneno de chaqueta amarilla (YJV) y una reactividad superficial débil o un nivel bajo de anticuerpo IgE específico en suero para el veneno de avispa Polistes (PWV). • El suero de un paciente que contiene anticuerpos especificos IgE YJV y PWV es preincubado con YJV soluble (veneno heterologo), PWV (veneno homologo control), o buffer (control no inhibidor). • Las mezclas son incubadas en tubos separados con PWV allergosorbent y el ensayo se completa normalmente con la final adición de anticuerpo IgE antihumano marcado.

29. La cantidad de IgE anti-PWV unida al PWV-allergosorbent es medida, si existe una inhibición > 95% de ligar al anticuerpo con el YJV soluble es considerada una completa inhibición-cruzada.

30. HYMENOPTERA IgG VENENO-ESPECIFICO. • Clínicamente la inmunoterapia exitosa se acompaña casi siempre por los niveles altos de IgG en suero alergeno-específico. Sin embargo en pacientes con rhinitis alergica donde por regla general se mide IgG (o subclases) no hay correlación con la mejora en los sintomas clínicos de pacientes con inmunoterapia de veneno.

31. Se realizó un estudio utilizando el suero de 109 pacientes veneno alergicos. Con el proposito de examinar si los niveles de IgG pudieran predecir el riesgo de una reacción sistémica despuésde la picadura en los pacientes que reciben inmunoterapia. • De211 picaduras realizadas en este grupo en un período de 4años, los síntomas sistémicos ocurrieron en 16% de aquellos con un nivel de anticuerpos IgG veneno específico <3 ug/mL y en sólo 1.6% de aquellos con un nivel de anticuerpos IgG veneno específico > 3 ug/mL. La proporción más alta de reacciones alérgicas (26%) ocurrió entre pacientes que tenían ambos; un nivel de anticuerpo IgG veneno específico <3 ug/mL y <4 años de inmunoterapia de veneno. • El estudio concluyó que la cantidad de anticuerpoIgG veneno-específico puede ser de valor para individualizar la dosis y frecuencia de inyecciones mientrasaumentan al máximo los efectos protectores.Esta es la utilidad clínica de medir el anticuerpo IgG veneno-específico, sin embargo, parece ser restringida a los primeros 4 años de inmunoterapia de veneno.

32. ANTICUERPO IgG PRECIPITADO • HP, también llamada alveolitis alérgica extrínseca, es una reacción inflamatoria en la parte intersticial del pulmón y la parte terminal del bronquiolo que resultan de la exposición crónica a antígenos orgánicos. • La histología de la lesión pulmonar indica una patología mediada por células; la mayoría de los pacientes con HP desarrolan niveles altos de IgG vs. el antigeno orgánico en la sangre. • En el laboratorio clínico todavía se realiza la difusión doble clásica (ouchterlony).

34. Triptasa de Células Mast • Serin esterasa de 4 subunidades cada una con un sitio enzimáticamente activo.

35. Triptasa de Células Mast -protriptasa (número de mastocitos) -triptasa (activación de mastocitos) -protriptasa = triptasa total - -triptasa

36. Ensayo BHTBasophil Histamine Release • Determinar la potencia de extractos alergenos • Detectar la presencia de IgE alergeno-específica en la superficie de basófilos Prueba Directa (Direct Challenge) Sensibilización Pasiva

37. Ensayo BHTBasophil Histamine Release Incubar con diferentes concentraciones del extracto alergeno DC Leucocitos Liberación de Histamina Antígeno SP Incubar con suero que contiene anticuerpos IgE Cuantificación de histamina en el sobrenadante por técnicas enzimáticas, radiométricas o espectrofluorométricas Basófilos

38. CDR del ensayo BHT 100 % Liberación de Histamina 50 0 [alergeno] Sensibilidad Relativa

39. Broncoprovocación: Identificar la relación entre una sustancia inhalada y el cambio en la fisiología bronquial del paciente. Útil en el diagnóstico de casos difíciles de asma. Se lleva a cabo administrando metacolina o histamina y además un alergeno en dosis crecientes. Se toma como respuesta positiva a la concentración del agonista en una gota de volumen de expiración 1 segundo o más después de el tiempo de preprovocación. Pruebas in vivo(Diagnóstico)

40. Pruebas in vivo • Provocación Nasal Administración de un buffer y de un alergeno a diferentes concentraciones. Se evalúan los síntomas posteriores a la concentración correspondiente administrada (número de estornudos inducidos y/o la concentración de mediadores liberados por mastocitos o la albúmina liberada en el fluido nasal).

41. Pruebas in vivo • DBPCFC (Double-blind, placebo-controlled food challenge). Ingestión controlada de alimentos frecuentemente consumidos y que contienen potentes alergenos. Leche de vaca (caseína, -lactoglobulina, -lactoalbúmina) Huevo (ovoalbúmina, ovotransferrina) Cereales (trigo, centeno, cebada, avena) Legumbres (cacahuates, soya) Pescado y mariscos (camarón, langosta, cangrejo)

42. Pruebas in vivo Se elimina la ingesta de las comidas sospechosas entre 7 y 14 días antes de la prueba. Se administran diferentes cantidades de comida liofilizada o en cápsulas. Se excluyen una reactividad de importancia clínica si se toleran 10 g de el liofilizado o la comida en cápsulas.

43. Pruebas de aeroalergenos en interiores • Se colecta el polvo en una determinada área. • Se extraen alergenos solubles • Se cuantifican por anticuerpos monoclonales basados en ensayos inmunoenzimáticos

44. Der p1 / Der f 1 Dermatophagoides Fel d 1 Gato Can f 1 Perro Bla g 1 / Bla g 2 Cucaracha Mus m 1 Ratón Principales aeroalergenos (interiores)

45. Pruebas de aeroalergenos en interiores • Se utiliza una placa rotatoria que se expone al medio ambiente • Las partículas suspendidas en el aire se “pegan” a esta placa. • Generalmente se reportan niveles de polen (granos por m3) y moho (esporas por m3).