VPLYV SELEGILÍNU (DEPRENYLU) NA VZNIK OXIDAČNÉHO STRESU

1. VPLYV SELEGILÍNU (DEPRENYLU) NA VZNIK OXIDAČNÉHO STRESU RNDr. Mašlanková Jana PhD. a kol. Ústav lekárskej a klinickej biochémie UPJŠ LF a LABMED, a.s., Univerzita Pavla Jozefa Šafárika v Košiciach, Slovenská republika

2. Parkinsonová choroba • Parkinsonová choroba – 2 najčastejšie neurodegeneratívne ochorenie (1 – 2 % populácie nad 65 rokov) • Za väčšinu symptómov zodpovedá predčasný zánik (neurodegenerácia) nigrostriatálnych neurónov v substantia nigra (pars compacta) s následným nedostatkom dopamínu • V posledných rokoch sa detekovalo veľa možných príčin zániku neurónov, medzi ktorými dominuje oxidačný stres

3. Liečba Parkinsonovej choroby • Základným a najúčinnejším liekom je L-DOPA (levodopa) • L-DOPA prechádza do mozgu, kde sa mení na dopamín, ktorého nedostatok chorobu spôsobuje. • L-DOPA sa vyznačuje krátkym časom pôsobenia v mozgu a rýchlym odbúravaním ( do 1,5 hod. sa vylúči asi polovica podaného množstva), preto sa hľadajú viaceré spôsoby ako dosiahnuť jej stabilnejšie pôsobenie.

4. Liečba Parkinsonovej choroby • L-DOPA, MAO inhibítory, COMT inhibítory a pod. • Moderná koncepcia liečby vo včasných štádiách uprednostňuje používanie liekov s miernym antiparkinsonským účinkom a potenciálom ochrany nervových buniek pred degeneráciou tzv. neuroprotektívnym efektom: selegilín, amantadín, ktoré nepodliehajú enzymatickej premene a degradujú sa zreteľne pomalšie ako L-DOPA.

5. Selegilín • je selektívny irerverzibilný inhibítor MAO-B • do dennej dávky 10 mg. • antidepresívny efekt sa dosahuje až pri dávke 20 – 60 mg/denne u 50 – 70 % liečených • nežiadúce účinky: • poruchy sebaovládania -patologické hráčstvo, chorobné nakupovanie, záchvatove prejedanie sa a hypersexualita. • psychiatrické poruchy a ochorenia (zmeny nálady)

6. Parkinsonová choroba a vznik kyslíkových radikálov • Associácia s dysfunkciou mitochondrií (redukcia produkcie ATP v mitochondriách a zvýšenie tvorby kyslíkových radikálov (ROS)

7. Metódy • 15 samcov potkanov kmeňa Wistar(390 g, 8-9 týž.) Intraperitoneálne - 30 dní, podávaný deprenyl 3 skupiny vysoká dávka 0,25 mg/kg kontrola nízka dávka 0,0025 mg/kg • Po poslednej dávke, boli samce usmrtené letálnou dávkou tiopentalu • Vzorky pečene boli odobraté a vložene do izolačného roztoku (sacharoza, tris-HCl, EDTA). Nasledne z nich boli vyizolované mitochondrie a stanovený RKP (kontrolný respiračný pomer). • Súčasne bolo odobrané sérum na stanovenie hladiny antioxidačných enzýmov a testosterónu.

8. Stanovenie respiračného kontrolného pomeru (RKP) Respiračná kontrola je mechanizmus, pomocou ktorého je proces spriahnutia oxidácie a fosforylácie riadený/ kontrolovaný mitochondriálnou koncentráciou ADP Respiračný kontrolný pomer – závislosť spotreby kyslíka v mitochondrii od prísunu ADP

9. Stanovenie respiračného kontrolného pomeru (RCP) Respiračný kontrolný pomer

10. Antioxidačné enzýmy Aktivita katalázy (CAT) v semeníkoch potkanov Aktivita superoxiddizmutázy (SOD) v semeníkoch potkanov

11. Závery • Pri podávaní nízkych dávok selegilínu sa RKP zvýšil o 29 % • Pri podávaní vysokých dávok sa RKP znížil o 31 % • Podávanie selegilínu zvyšuje produkciu antioxidačných enzýmov (SOD a CAT) v semeníkoch – ochrana buniek pred apoptózou • Vysoké dávky selegilínu (0,25mg/kg) sa spájajú s nepriaznivými vedľajšími účinkami. Bolo by vhodné klinicky otestovať liečebný účinok nízkych dávok selegilínu (0,0025mg/kg) u ľudí trpiacich Parkinsonovou chorobou, kedže u potkanov sa potvrdil ich pozitivny efekt na respiračny kontrolny pomer mitochondrii.

12. Ďalšie ciele • Stanovenie počtu spermií konfokálnym mikroskopom • Stanovenie hladiny hormónov LH, FSH a testosterónu ELISA metódou • Stanovenie antioxidačných enzýmov SOD, CAT, GSH v mitochondriach pečene ELISA metódou a porovnanie s koncentráciami týchto enzýmov v semeníkoch

13. Ďakujem za pozornosť!