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PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO






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avongara
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TABLA DE CONTENIDO. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOSLINFOCITOTOXICIDADEIA-ELISAIFIINMUNOPEROXIDASAENASANASANCAS. . . ANTI-DNAAMAATAMEIAAGLUTINACI
PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO

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1. PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO LADY YURANI RODRIGUEZ GONZALEZ U.C.M.C VIII-D 2004

2. TABLA DE CONTENIDO CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS LINFOCITOTOXICIDAD EIA-ELISA IFI INMUNOPEROXIDASA ENAS ANAS ANCAS

3. ANTI-DNA AMA ATA MEIA AGLUTINACI?N ELFA TABLA DE CONTENIDO

4. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS FUNDAMENTO: El CML es un procedimiento in-Vitro que mide reconocimiento y proliferaci?n celular. El ensayo representa la medida funcional de inmunidad celular en el cual los linfocitos ayudadores (CD4) de un individuo son inducidos a proliferar despu?s de estar en contacto con las c?lulas mononucleares de otro individuo. La se?al de activaci?n o estimulaci?n es originada por los determinantes de las mol?culas de clase II regi?n HLA-D que est?n expresadas en c?lulas B y monocitos que est?n situados en en el,primer dominio en la regi?n hipervariable de las mol?culas HLA II. Cuando dos poblaciones alogenicas de linfocitos que difieren en la regi?n HLA-D son puestas juntas en cultivo va a ver una mutua activaci?n celular en un periodo de seis d?as.

5. Esta activaci?n es manifestada metabolicamente con incremento de prote?nas, s?ntesis de RNA y DNA y morfol?gicamente por la transformaci?n de linfocitos peque?os en linfoblastos (blastogenesis). C?lulas normales alcanzaran un pico m?ximo de s?ntesis o la rata m?xima de proliferaci?n de DNA en u periodo de seis d?as. Las c?lulas activadas se dividen y se proliferan. Para medir esta actividad se mide la incorporaci?n de Timidina Tritiada al nuevo DNA sintetizado. La activaci?n de una poblaci?n celular es mediada por el tratamiento de la segunda poblaci?n con un inhibidor de DNA (mitomicina C) o irradiaci?n para bloquearla s?ntesis de DNA.Las c?lulas tratadas son llamadas poblaci?n estimuladora (E) y las c?lulas sin tratar son la poblaci?n respondedora( R) . Si hay compatibilidad en el locus D entre los individuos, y por supuesto si hay diferencias entre las mol?culas D entre las dos poblaciones celulares estimulaci?n fuerte ocurrir?.

6. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS

7. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS

8. LINFOCITOTOXICIDAD FUNDAMENTO: El HLA-antisuero se liga a su membrana celular especifica de antigenos blanco de los linfocitos. El complemento es activado por el complejo Ag-Ac sobre la c?lula la cual conduce a lisis celular. Este es detectado por la entrada de tinte dentro de la c?lula muerta (=reacci?n positiva), y cundo no existe complejo Ag-Ac la c?lula no se lisa y por lo tanto no es coloreada por el tinte (= reacci?n negativa)

11. ENZIMUNOENSAYO ELISA FUNDAMENTO: ENZIMUNOANALISIS O ENZIMUNOENSAYO, en este se determina la presencia de antigenos (Ag) o anticuerpos (Ac) a partir de una fase s?lida en la que est?n fijados Ag o Ac dependiendo de lo que se determine y de la t?cnica, si es en Sandwich, por competencia o por captura. Esta t?cnica es basada por la presencia de una enzima como la peroxidas de r?bano picante o fosfatasa alcalina que permitir? la detecci?n de Ag o Ac por medio de la acci?n sobre un sustrato. EJEMPLO: InmunoComb, Enzymun-Test

12. ELISA (Sandwich)

13. ELISA (Sandwich)

14. ELISA (Captura)

15. ELISA (Competitivo)

16. InmunoComb

17. IFI FUNDAMENTO: El m?todo est? dividido en dos etapas. En la primera se coloca en contacto la muestra del paciente con el antigeno dej?ndose incubar, luego se retiran los excesos de muestra no unida. En la segunda etapa se colocan en contacto el complejo inmune y el conjugado que es un anticuerpo marcado con fluorocromo, se incuba, se retira el exceso de anticuerpo no unido y se observa la preparaci?n al microscopio. Este m?todo es indirecto porque es necesario utilizar un anticuerpo que actuara sobre el anticuerpo unido al antigeno para la detecci?n del complejo inmune.El sustrato siempre ser?n c?lulas o el parasito.

18. IFI

19. INMUNOPEROXIDASA (PEROXISET) FUNDAMENTO: Utiliza en m?todo indirecto, este procedimiento se basa en tres reacciones. El primer paso el suero del paciente se pone en contacto con el sustrato antig?nico. Si los Ac est?n presentes, ?stos se unir?n al Ag, formando un complejo Ag-Ac. El segundo paso se agrega una antigamma-globulina humana marcada con peroxidasa y si esta el complejo presente ?sta se unir?. En el tercer paso, se revela con una reacci?n colorimetrica en presencia de un crom?geno y agua oxigenada, dando un complejo insoluble y estable en el que se pueda visualizar al microscopio ?ptico.

20. INMUNOPEROXIDASA (PEROXISET)

21. ENAS (Prueba inmunoenzimatica para la determinaci?n de antigenos extractables) FUNDAMENTO: Prueba inmunoenzimatica para la determinaci?n de antigenos extractables (ENAS) detecta anticuerpos IgG, IgM y IgA para los antigenos ya identificados Smith (Sm), Sm/RNP (ribonucleoproteina), SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70 y Jo-1. Los antigenos purificados se encuentran en la superficie del pozo. Se realiza una diluci?n a la muestra del paciente y se agrega a los pozos, all? se formara un complejo Ag-Ac si el paciente posee un Ac para los Ag mencionados anteriormente, agrega un conjugado anti- IgG, IgM o IgA marcado con peroxidasa, este reacciona con el complejo, se adiciona crom?geno/sustrato (TMB/H2O2). Lee la absorbancia a 450 nm es directamente proporcional a la concentraci?n de Ac.

22. ENAS ELISA

23. ENAS IDR

24. ENAS CONTRAINMUNOELECTROFORESIS

25. ANAS (anticuerpos antinucleares) Sustrato: C?lulas tumorales T?cnica: ELISA, IFI, Peroxiset

26. ANCAS (anticuerpos anticitoplasmaticos) Sustrato: Mieloperoxidasa del neutr?filo T?cnica: ELISA, IFI, Peroxiset

27. ANTI-DNA (anticuerpos anti-DNA) Sustrato: Crithidia luciliae T?cnica: ELISA, IFI, Peroxiset

28. AMA (anticuerpos antimitocondriales) Sustrato: C?lulas con su mitocondria T?cnica: ELISA, IFI, Peroxiset

29. ATA (anticuerpos antitiroideos) Sustrato: Cortes de tiroides T?cnica: IFI

30. MEIA (enzimunoensayo de micropart?culas) FUNDAMENTO: Es la tecnolog?a de enzimunoensayo de micropart?culas recubiertas de Ag o Ac (MEIA). Se basa en la determinaci?n de Ag o Ac en la muestra comparando la tasa de formaci?n de fluorescencia y la tasa de punto de corte determinada a partir de una calibraci?n index del ensayo Ejemplo: AxSYM

31. MEIA (Ac pte.)

32. MEIA (Ag pte.)

33. AGLUTINACI?N FUNDAMENTO: Aglutinaci?n indirecta: Es aquella en la que un ant?geno celular o de part?culas insolubles es aglutinado directamente por al Ac presente en el suero; los eritrocitos, una gran variedad bacteriana y de hongos, pueden aglutinar directamente los anticuerpos s?ricos. Aglutinaci?n directa: existen otras sustancias para ser utilizadas como la Bentonita, el l?tex, el carb?n activado Ejemplo: Serodia

34. AGLUTINACI?N

35. ELFA (Reacci?n inmunoenzimatica a una detecci?n final en fluorescencia)

36. ELFA


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