slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis PowerPoint Presentation
Download Presentation
Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 17

Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis - PowerPoint PPT Presentation


  • 186 Views
  • Uploaded on

Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis. Revisão bibliográfica Os antígenos Extração Purificação Material e método Extração Purificação. Representação esquemática da localização das frações antigênicas de C. pseudotuberculosis. Ag.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis' - zenevieva


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1

Extração e purificação

dos antígenos imunodominantes de

Corynebacterium pseudotuberculosis

  • Revisão bibliográfica
          • Os antígenos
          • Extração
          • Purificação
  • Material e método
          • Extração
          • Purificação
slide2

Representação esquemática da localização das frações antigênicas de C. pseudotuberculosis

Ag.

Extra

celulares

Ag. de parede /

membrana

Peptidoglicano

Ácidos

teicóicos

Ag.

Intra

celulares?

Membrana

Parede

Camada

lipídica

Ag. fracamente

ligados à parede

slide7

As frações antigénicas de

Corynebacterium pseudotuberculosis

Antígenos extracelulares

Antígenos fracamente ligados à parede

Antígenos celulares (parede/membrana, intracelulares)

slide14

Obtenção de soro para imunodifusão e Cromatografia de imunoafinidade

(E. Harlow and D. Lane, 1988, Weare et al, 1982)

Imunodifusão

Frações antigénicas extraídas (4)

C. Imunoafinidade Reversa

Frações obtidas a partir de PAGE NÃO DESNATURANTE

  • Esquema de vacinação: (3 coelhos por extrato)
  • Injeção inicial SC: 0,5 mg de proteína com adjuvante de Freund completo,
  • Boosts a cada 30 dias, 0,25 mg, SC (Freund incompleto) ou IV (Ag sem adjuvante)
  • Sangria 15 dias após cada boost.
  • Preparação do soro:
  • Aquecimento 56ºC, 30 min.
  • Precipitação com (NH4)2SO4 ou Cromatografia Exclusão
  • Resuspensão em NaHCO3(CIAR)
  • Desalinização (Diálise ou Sephadex G-25) (ID)
slide16

Celulares (3)

Extracelulares (4)

PAGE não desnaturante

Bandas contaminantes

Gel de Sepharose 6MB

ativado com Brometo

de cyanógeno

+

Sóro anti

“Contaminantes”

Cromatografia de Imunoafinidade Reversa

slide17

Controle de qualidade

Extração por detergentes/Sonicado

Outros Extratos

E. Intracelulares (2)

Lowry

PAGE / Imunoblot

E. S-Layer (1)

E. Celulares (3)

E. Extracelulares (4)

EXTRAÇÃO

Soro ID (4)

Extratos 3 e 4

Extratos 1 e 2

  • Lowry
  • Soro ID
  • PAGE / Imunoblot

C. I. A. R.

C. Exclusão

C. Exclusão

PURIFICAÇÃO