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TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS Parte 1

TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS Parte 1. IMUNODIAGNÓSTICO: Diagnóstico laboratorial por meio de técnicas imunológicas.

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TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS Parte 1

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Presentation Transcript

  1. TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS Parte 1

  2. IMUNODIAGNÓSTICO: Diagnóstico laboratorial por meio de técnicas imunológicas. Busca:Anticorpo ou Antígeno no organismo do paciente por meio de ensaios de Precipitação, Aglutinação, Fixação de complemento, Neutralização ou Imunoensaios que utilizam sinalizadores da interação Ag-Ac com conjugados ligantes, como Imunofluorescência, Radioimunoensaio, Imunoenzimáticos, Imunofluorimétricos e Quimioluminiscência Outros testes: Hipersensibilidade a Antígenos: Reações intradérmicas e percutâneas.

  3. INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

  4. KA [Ag] + [Ac ] [Ag-Ac] KA= [Ag-Ac] ([Ag] + [Ac]) KA= Constante intrínseca de associação

  5. FORÇAS QUE ATUAM NAS INTERAÇÕES ANTÍGENO/ANTICORPO Moléculas que apresentam grupos laterais iônicos de cargas opostas que se atraem fortalecendo a interação Ag-Ac. Forças fracas que ocorrem devido à proximidade física entre as moléculas. A mais fraca das ligações. Ocorrem entre o núcleo de um átomo e a nuvem de elétrons de outro formando dipolos que se atraem. Atua em moléculas não polares facilitando a aproximação, os choques moleculares e as ligações.

  6. Metodologias que utilizam reagentes não marcados: • Precipitação • Aglutinação • Hemólise (Fixação de Complemento) • Metodologias que utilizam reagentes marcados • Radioimunoensaios • ELISA • Imunofluorescência • Western Blotting • Citometria de Fluxo

  7. IMUNOPRECIPITAÇÃO

  8. Zona de equivalência: Ag-Ac se ligam equimolarmente formando uma rede estável. Excesso de antígeno: Os complexos podem ser dissolvidos quando há excesso de Ag pois o Ac fica livre para se ligar a novos Ag adicionados diminuindo a formação de complexos insolúveis. Excesso de Ac: Ocorre redução de imunocomplexos pois todo o Ag está precipitado e fica Ac livre no sobrenadante. Pró-Zona

  9. IMUNODIFUSÃO

  10. Ac no gel Ag Ag Ag Ag Diameter2 Ag Concentração Imunodifusão radial (Mancini) • Método • Anticorpo no gel • Antígeno no poço • Interpretação • Diâmetro do anel é proporcional à concentração do Ag • Quantitativo • Níveis de Ig

  11. Imunoeletroforese/Precipitação

  12. AGLUTINAÇÃO

  13. INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO: TESTE DE GRAVIDEZ

  14. AGLUTINAÇÃO EM LÁTEX: FATOR REUMATÓIDE Fator Reumatóide: Anticorpos que reconhecem epítopos presentes na fração cristalizável (Fc) da molécula de IgG. A maioria destes Acs são da classe IgM porém pode-se encontrar também Acs IgA e IgG. Teste: Visualização de aglutinação das partículas de látex revestidas pelo antígeno (no caso IgG humana ou de coelho) Interpretação: Igs com atividade FR estão presentes em pequena quantidade e com baixa avidez no soro de amior parte das pessoas. No caso de artrite reumatóide surge uma alta quantidade de FR de alta afinidade

  15. Enfermidades em que o encontro de Fator Reumatóide é comum

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