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2006 届硕士学位论文答辩会

2006 届硕士学位论文答辩会. 硕士学位论文答辩. PI3K-AKT 信号传导通路对鼻咽癌细胞系 CNE-2Z 增殖和凋亡影响的研究. 研究生：龚晓萌 导 师：姜汉国副教授. 广东医学院病理教研室 2006.6.5. 立题依据. 立题依据. 研究背景. ■ 有 研究显示 PI3K/AKT 途径的改变和某些肿瘤的发生 和侵袭转移有关。 ■ PI3K/AKT 的抑制剂和其它药物合用可以增强放化 疗的敏感性。 ■ 目前国内外尚未见 PI3K/AKT 通路在鼻咽癌中的研究。它在鼻咽癌中是否有此作用，可能的机制如何，有待进一步研究。

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2006 届硕士学位论文答辩会

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Presentation Transcript

  1. 2006届硕士学位论文答辩会

  2. 硕士学位论文答辩 PI3K-AKT信号传导通路对鼻咽癌细胞系CNE-2Z增殖和凋亡影响的研究 研究生：龚晓萌 导 师：姜汉国副教授 广东医学院病理教研室 2006.6.5

  3. 立题依据

  4. 立题依据 研究背景 ■ 有研究显示PI3K/AKT途径的改变和某些肿瘤的发生和侵袭转移有关。 ■PI3K/AKT的抑制剂和其它药物合用可以增强放化 疗的敏感性。 ■目前国内外尚未见PI3K/AKT通路在鼻咽癌中的研究。它在鼻咽癌中是否有此作用，可能的机制如何，有待进一步研究。 ■ PI3K和其下游分子所转导的抗凋亡信号已经成为药物研究领域的焦点。

  5. 研究目的 本课题研究目的： ■研究PI3K、AKT、bcl-2在鼻咽癌中的表达及意义。 ■初步探讨在鼻咽癌中抑制PI3K/AKT通路对鼻咽癌增殖和凋亡的影响及可能机制。

  6. 硕士学位论文答辩 技术路线

  7. 技术路线 临床病理部分： 鼻咽粘膜慢性炎 鼻咽癌 常规组织切片、染色 IHC bcl-2 PI3K AKT

  8. 实验病理部分： 技术路线 wortmannin CNE2Z MTT 生长曲线 IHC ELISA FCM RT-PCR bcl-2 RNA水平 细胞增殖 PI3K、AKT bcl-2表达 P-AKT 细胞凋亡

  9. 硕士学位论文答辩 结 果

  10. 临床病理部分： PI3K、AKT和bcl-2在鼻咽粘膜慢性炎及鼻咽癌中的表达 Positive(%) Positive(%) Positive(%) 鼻咽粘膜慢性炎 31 5(16.12) 11(35.48） 12(38.71) 鼻咽癌 33 28(84.85) 24(72.73) 27(81.82) 组 别 N PI3K AKT bcl-2 鼻咽粘膜慢性炎组和鼻咽癌组间比较，差异均有显著性(P<0.05)

  11. 结果 鼻咽粘膜慢性炎 鼻咽癌 临床标本免疫组化结果

  12. 空白对照 PI3K在鼻咽炎组的表达 PI3K在鼻咽癌组的表达 结果

  13. AKT在鼻咽癌组的表达 AKT在鼻咽炎组的表达 结果

  14. bcl-2在鼻咽炎组的表达 bcl-2在鼻咽癌组的表达 结果

  15. 结果 鼻咽癌中PI3K与bcl-2表达的相关分析 PI3K bcl-2 — ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ — ＋ ＋＋ ＋＋＋ • 0 3 2 0 • 4 2 4 1 • 2 6 6 • 0 0 0 1 Spearman相关分析：PI3K与bcl-2（r=0.501，P<0.005）;

  16. 空白对照（SP×200） 对照组PI3K的强阳性表达（SP×200） 实验病理部分： 结果 Wortmannin对PI3K、AKT、bcl-2蛋白表达的影响

  17. 低浓度组wortmanninPI3K中等强度表达 高浓度组wortmanninPI3K弱阳性表达 随着wortmannin的浓度的增高，PI3K的表达逐渐减弱 结果

  18. 随着wortmannin的浓度的增高，bcl-2的表达逐渐减弱随着wortmannin的浓度的增高，bcl-2的表达逐渐减弱 低浓度wortmannin组 bcl-2中等强度表达 高浓度wortmannin组 bcl-2弱阳性表达 对照组wortmannin bcl-2强阳性表达 结果

  19. 同一时间点各实验组细胞抑制率相比较差异有统计学意义（P<0.01）同一时间点各实验组细胞抑制率相比较差异有统计学意义（P<0.01） wortmannin对CNE-2Z细胞增殖的影响（MTT)

  20. 随着wortmannin浓度的增高，生长曲线逐渐右移，上升平缓且变得低平。同一时间点，各组间细胞数比较，差异有非常显著性(P<0.001)随着wortmannin浓度的增高，生长曲线逐渐右移，上升平缓且变得低平。同一时间点，各组间细胞数比较，差异有非常显著性(P<0.001) wortmannin对CNE-2Z细胞生长曲线的影响

  21. M 0 25 50 75 453bp 248bp bcl-2mRNA的表达随wortmannin浓度升高而逐渐降低，各组间比较差异均有非常显著性(P<0.001) CNE-2Z细胞在不同浓度的wortmannin作用后bcl-2的mRNA的改变

  22. 结果 0nM 25nM 50nM 75nM

  23. Wortmannin使凋亡率升高，各组间的凋亡率比较，差异有非常显著性 (P<0.001) wortmannin对CNE-2Z细胞凋亡的影响

  24. Wortmannin使P-AKT表达降低，各组间的P-AKT浓度比较，差异有非常显著性(P<0.001)Wortmannin使P-AKT表达降低，各组间的P-AKT浓度比较，差异有非常显著性(P<0.001) wortmannin对CNE-2Z细胞P-AKT的影响

  25. 讨 论

  26. ■ PI3K、AKT和bcl-2的过表达与鼻咽癌的发生密切相关 ■ PI3K和bcl-2的相关性提示PI3K和bcl-2可能在鼻咽癌的发生发展过程中具有协同的作用。 临床病理部分 讨论 PI3K、AKT、bcl-2在鼻咽癌中的表达及其意义

  27. 实验病理部分 ■PI3K信号转导通路的抑制剂wortmannin可以通 过干扰PI3K/AKT通路有效抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖，促进CNE-2Z细胞的凋亡 ■PI3K信号转导通路的抑制剂对于临床鼻咽癌的治疗有一定的潜在应用价值

  28. ■ 鼻咽癌中PI3K、AKT、bcl-2在鼻咽癌高表达,他们的过表达可能参与了肿瘤的发生发展。 Wortmannin通过抑制PI3K的活性，下调磷酸化的AKT的表达水平 ■ Wortmannin有效抑制CNE-2Z细胞的生长和增殖，具有明显的量效关系；诱导细胞的凋亡 ■ PI3K/AKT通路的抑制剂在临床鼻咽癌的治疗有很好的应用前景 ■ 小结

  29. 致谢 ■感谢导师姜汉国副教授三年来在学习、工作上所给予的指导和鞭策，在生活上给予的无限关怀与帮助。 ■感谢教研室唐慰萍教授、陈小毅教授、孙宁教授、胡新荣教授、姚运红副教授、卢庆林副教授，赵颖海副教授在课题设计、实验进展和论文完成过程中给予的宝贵指导和帮助。 ■感谢邓惠华高级实验师、蔡琼珍、李飞虹、罗泊涛、赵颖海、熊晖、揭伟、唐加步、唐泽立、包刚等病理教研室全体老师，感谢附属医院病理科黄应桂主任和全体老师。 ■感谢同窗好友和师弟、师妹们的关心和帮助。 ■感谢我的家人的理解和支持。

  30. 敬请各位老师同学批评指正

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