INFORME DE PRACTICA_ Extraccion de ADN de la Musa sp

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA BIOTECNOLOGÍA INFORME DE LABORATORIO Extracción de ADN de Musa sp DOCENTE Dr. Hebert HernanSoto Gonzales PRESENTADO POR: MANZANO LAURA JUAN JOSE ENRIQUEZ CHAMBI BRIANA LIZETH MANZANO LAURA LUIS GUSTAVO LAQUIHUANACO FIÑO YADIRA MAYDELLI CICLO: VII Ilo - Moquegua, Perú 2024

2. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales ÍNDICE INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 2 OBJETIVO ............................................................................................................................ 2 MATERIALES ....................................................................................................................... 3 METODOLOGÍA ................................................................................................................... 5 RESULTADOS ...................................................................................................................... 7 CONCLUSIONES ................................................................................................................. 8 REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................... 9 ANEXOS ............................................................................................................................. 10 1

3. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales INTRODUCCIÓN La extracción de ADN es un proceso fundamental en estudios genéticos y biotecnológicos, permitiendo el aislamiento del material genético para su posterior análisis. En el caso del plátano (Musa sp.), un cultivo de gran importancia económica y alimentaria, la extracción de ADN es de interés para investigaciones en áreas como la mejora genética, la identificación de variedades y la resistencia a enfermedades. Este proceso implica la ruptura de las paredes celulares del tejido vegetal, la eliminación de proteínas y otros componentes celulares, y la precipitación del ADN mediante soluciones específicas. El método de extracción de ADN en plantas, incluyendo Musa sp., generalmente utiliza detergentes y soluciones salinas para facilitar la separación del ADN del resto de los componentes celulares (Lodhi et al., 1994). Musa sp. es un género de importancia económica y nutricional en muchas regiones tropicales y subtropicales del mundo. La variabilidad genética dentro de este género es notable, y entenderla es crucial para la conservación y mejora de las variedades cultivadas. La extracción de ADN permite a los investigadores estudiar la composición genética de estas especies, identificar marcadores moleculares y comprender la relación entre diferentes cultivares. Este informe detalla el proceso de extracción de ADN de Musa sp., incluyendo los materiales y método utilizado, así como los resultados obtenidos. OBJETIVO ● Desarrollar la capacidad de aplicar una técnica sencilla para la extracción de ADN a partir de células vegetales como la Musa sp., comprendiendo los principios básicos y los pasos fundamentales del proceso de extracción, a fin de reconocer la estructura molecular del ADN y su importancia en estudios genéticos. 2

4. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales MATERIALES Nombre Imagen plátano (Musa sp.) Mortero Cuchillo ultracongeladora Gasa o algodón 3

5. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales Probeta de 100mL Tubos de ensayo Agua destilada Detergente o Shampoo de la marca Jhonson (neutro) Sal de cocina (NaCl) 4

6. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales Etanol o alcohol isopropílico con una concentración mayor a 70%, frío (5°C) Baño de María a 37°C (opcional) Guantes algodón moteado METODOLOGÍA Antes de realizar con el procedimiento colocar el alcohol en la ultracongeladora a una temperatura de 5°C. El procedimiento para realizar el aislamiento del ADN sigue los siguientes pasos: Paso Descripción Evidencia Preparamos una solución salina- jabonosa compuesta con 100 mL de agua (media taza), 10 mL de detergente (1 cucharada) o 20 mL de champú (sin acondicionador, dos cucharadas) y 13 g de NaCl o sal de cocina (1 cucharada). Paso 1: Preparación de solución salina- jabonosa 5

7. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales Pelar y cortar el plátano en cubos pequeños, luego triturar en un mortero hasta que quede sin presencia de grumos (Se puede usar una bolsa hermético y macharlo). Paso 2: Preparación para el plátano con cierre En el mortero con la fruta triturada, verter la solución salino- jabonosa y continuar con el proceso de trituración de la fruta. Opcionalmente preparado en un baño de María a 37°C durante 15 minutos para facilitar la extracción. Paso 3: Adición de solución de sal y detergente a la fruta colocar el Pasar por un colador, o a través de la gasa hasta obtener 5 mL del líquido filtrado en un tubo de ensayo, o 50 mL en un frasco. Paso 4: Separación del material sólido, proteínas y lípidos Sobre el jugo de fruta, verter lentamente por las paredes del tubo de ensayo isopropanol frío. Dejar reposar unos minutos. Debe aparecer una capa blanquecina gelatinosa. Se puede introducir una varilla de vidrio o un palito de madera, con movimientos circulares se puede recuperar el ADN enrollado en la varilla. etanol o Paso 5: Precipitación del ADN por acción del alcohol 6

8. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales RESULTADOS Imagen. ADN de la Musa sp. Nota: Vista de ADN de la Musa sp. En tubo de ensayo Imagen. Replicas del procedimiento Nota: Aplicación del proceso en 3 tubos de ensayo 7

9. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales CONCLUSIONES En este estudio, se compararon dos métodos para la extracción de ADN de Musa sp., utilizando champú transparente y detergente como agentes de lisis celular. Ambos métodos resultaron en la obtención de ADN, sin embargo, se observaron diferencias notables en la calidad y cantidad del material genético extraído. El tratamiento con champú transparente produjo una extracción más limpia, con menor cantidad de contaminantes visibles, lo que sugiere que este agente es menos agresivo en la ruptura de las membranas celulares y en la liberación de compuestos que pueden interferir en la pureza del ADN. Este resultado podría deberse a la formulación suave del champú, que facilita la disolución de lípidos sin alterar significativamente las estructuras celulares no deseadas. Por otro lado, el detergente, si bien permitió la obtención de mayor cantidad de ADN, presentó un nivel más elevado de impurezas, posiblemente debido a una mayor lisis de componentes no deseados, como proteínas y carbohidratos. Esta contaminación pudo afectar la eficiencia de posteriores pruebas de identificación de ADN, al requerir pasos adicionales de purificación. En resumen, se desarrolló la capacidad de aplicar una técnica sencilla para la extracción de ADN a partir de células vegetales como la Musa sp., comprendiendo los principios básicos y los pasos fundamentales del proceso de extracción, pudiendo reconocer la estructura molecular de ADN. 8

10. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍA Lodhi, M. A., Ye, G. N., Weeden, N. F., & Reisch, B. I. (1994). A simple and efficient method for DNA extraction from grapevine cultivars, Vitis species and Ampelopsis. Plant Molecular Biology Reporter, 12(1), 6-13. https://doi.org/10.1007/BF02668658 IES Doctora Josefa de los Reyes. (s.f.). Práctica de biología: Extracción del ADN de un plátano. Junta de Andalucía. Recuperado el 2 de octubre de 2024, de https://blogsaverroes.juntadeandalucia.es/iesdoctorajosefadelosreyes/practica-de- biologia-extraccion-del-adn-de-un-platano/ 9

11. Escuela Profesional de Ing. Ambiental Curso: Biotecnología Docente: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales ANEXOS Imagen. Retiro del alcohol a 5°C Imagen. Foto grupal 10