protein isolation and amino acid sequencing n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Protein Isolation and Amino acid sequencing PowerPoint Presentation
Download Presentation
Protein Isolation and Amino acid sequencing

Loading in 2 Seconds...

  share
play fullscreen
1 / 14
quynn-branch

Protein Isolation and Amino acid sequencing - PowerPoint PPT Presentation

199 Views
Download Presentation
Protein Isolation and Amino acid sequencing
An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

  1. Protein Isolationand Amino acid sequencing

  2. Determination of Primary Structure 1. หาปริมาณโปรตีนจากตัวอย่าง 2. แยกและทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ 3. ตรวจสอบกรดอะมิโนที่เป็นองค์ประกอบทั้งหมดและน้ำหนักโมเลกุล 4. S-S--->-SH 5. ตรวจชนิดกรดอะมิโนที่ปลาย N- และ C-

  3. Determination of Primary Structure 6. ย่อยโปรตีนเป็นส่วน ๆ แยกแต่ละส่วนออกจากกัน 7. หาลำดับกรดอะมิโนในแต่ละส่วน ดูส่วนที่ overlap เพื่อการเรียงลำดับ

  4. Amino acid sequencing

  5. การหาปริมาณโปรตีน 1. วัด Absorbancy ที่ 280 nm 2. Biuret reaction (580 nm) 3. Lowry’s method (700 nm) 4. Coomassie brilliant blue

  6. การแยกโปรตีน 1. คุณสมบัติทางประจุ: electrophoresis, ion exchange chromatography 2. คุณสมบัติในการละลาย : pI, neutral salt, organic solvent, complex anions, heavy metal cations 3. คุณสมบัติขนาดของโมเลกุล : gel filtration, SDS-PAGE, ultrafiltration, ultracentrifugation 4. คุณสมบัติเฉพาะตัว: affinity chromatography

  7. Amino acid sequencing 1. หาน้ำหนักโมเลกุล : Gel filtration, SDS-PAGE 2. ตรวจสอบชนิดกรดอะมิโนที่ปลาย N- -2,4-dinitofluorobenzene (DNF), pH 8 -Dansyl chloride, pH 10 -Edman degradation

  8. ตรวจกรดอะมิโนที่ปลาย N- (dansyl chloride)

  9. Amino acid sequencing 3. ตรวจสอบชนิดกรดอะมิโนที่ปลาย C- -carboxypeptidase -enzymes

  10. ตรวจกรดอะมิโนที่ปลาย C-

  11. Amino acid sequencing 4. วิเคราะห์หาส่วนประกอบทั้งหมดของโปรตีน โปรตีน + 6N HCl----> hydrolysis Amino acid analyzer หลักการของ ion-exchange chromatography (fig 4.8)

  12. Edman degradation

  13. Amino acid sequencing

  14. การหาลำดับกรดอะมิโนจากลำดับ DNA