testele de histocompatibilitate l.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
TESTELE DE HISTOCOMPATIBILITATE PowerPoint Presentation
Download Presentation
TESTELE DE HISTOCOMPATIBILITATE

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 39

TESTELE DE HISTOCOMPATIBILITATE - PowerPoint PPT Presentation


  • 171 Views
  • Uploaded on

TESTELE DE HISTOCOMPATIBILITATE. TRANSPLANTUL. = Actul de a transfera celule, tesuturi sau organe dintr-o parte in alta, fie de la acelasi individ, fie intre indivizi diferiti Tipuri: Autogrefa= transplantul de tesuturi proprii dintr-o parte in alta a aceluiasi individ

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'TESTELE DE HISTOCOMPATIBILITATE' - malha


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
transplantul
TRANSPLANTUL
  • = Actul de a transfera celule, tesuturi sau organe dintr-o parte in alta, fie de la acelasi individ, fie intre indivizi diferiti
  • Tipuri:
    • Autogrefa= transplantul de tesuturi proprii dintr-o parte in alta a aceluiasi individ
    • Alogrefa = transplantul de tesuturi de la un donor genetic diferit de acceptor, dar care apartine aceleiasi specii
    • Xenogrefa = transplantul de tesuturi de la un donor care apartine unei alte specii
istoric
ISTORIC
  • Secolul II:
    • India, autogrefa, piele, rinoplastie
  • Secolul III (??):
    • Inlocuirea membrului inferior gangrenos al imparatului Iustinian cu cel al unui cadavru
  • 1959:
    • Boston, rinichi, gemeni bizigoti
  • 1967:
    • Denver, ficat
  • 1968:
    • Cape Town, inima; Minneapolis, maduva hematopoetica
conditii transplant
CONDITII TRANSPLANT
  • Compatibilitate AB0
  • Identitate HLA cat mai mare
  • Absenta in serul pacientului a unor Ac anti-donor
  • Stimulare slaba la reactia mixta limfocitara
compatibilitate ab0
COMPATIBILITATE AB0
  • Incompatibilitate minora:
    • Donorul are Ac (aglutinine)
    • Exemplu: donor 0 si primitor A/B/AB
  • Incompatibilitate majora:
    • Donorul are Ag
    • Exemplu: donor A/B/AB si primitor 0
  • Incompatibilitate minora si majora
    • Exemplu: donor A/B si primitor B/A
  • Nu este esentiala
  • Obiectiv: prevenirea hemolizei post-transplant
complexul major de histocompatibilitate
COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE
  • = MHC
  • La om – HLA (human leucocyte antigen)
  • Grup inrudit de gene pe cromozomul 6
  • Roluri:
    • Imunitate celulara
    • Imunitate umorala
    • Mecanisme de recunoastere intercelulara
    • Discriminare self / nonself
organizarea hla
ORGANIZAREA HLA
  • 3 clase HLA:
    • Clasa I:
      • Glicoproteine membranare
      • ~ Celule nucleate
      • Prezentarea Ag peptidice endogene LT citotoxice
    • Clasa II:
      • Glicoproteine membranare
      • CPA
      • Prezentarea Ag exogene LT helper
    • Clasa III:
      • Proteine cu functie in imunitate
polimorfism genic
POLIMORFISM GENIC
  • Clasa I:
    • HLA A – 451 alele
    • HLA B – 782 alele
    • HLA C – 238 alele
  • Clasa II:
    • HLA DR – 525 alele
    • HLA DQ – 105 alele
    • HLA DP – 147 alele
    • (HLA DM – 11 alele)
    • (HLA DO – 21 alele)
conditii pentru compatibilitate
CONDITII PENTRU COMPATIBILITATE
  • Se testeaza cel putin 3 locusuri:
    • HLA-A
    • HLA-B
    • HLA-DRB1
  • 6 Ag
  • ≥4 identice
teste de histocompatibilitate
TESTE DE HISTOCOMPATIBILITATE
  • Moleculare
  • Serologice
  • Celulare
metode moleculare
METODE MOLECULARE
  • Leucocite din sange
  • Extractia ADN-ului
  • Amplificarea genelor HLA:
    • PCR-SSP
    • PCR-SSOP
    • SBT
  • Interpretarea rezultatelor
pcr ssp
PCR-SSP
  • PCR-SSP (Sequence Specific Primers)
  • Pentru HLA clasa I si II
  • Amplificarea genelor HLA utilizand primeri:
    • Rezolutie mica – se amplifica grupuri de alele
    • Rezolutie inalta – se amplifica alele specifice
  • Electroforeza pe gel de agaroza a produsilor de amplificare:
    • Deplasare in functie de dimensiuni
    • Comparare cu marker
  • Citirea si interpretarea rezultatelor:
    • Apare banda specifica doar daca exista alela
pcr ssop
PCR-SSOP
  • PCR-SSOP (Sequence Specific Oligonucleotide Probes)
  • Amplificarea intregului exon
  • Hibridizarea produsului de amplificare cu secventa complementara
  • Vizualizarea strip-urilor cu benzi
  • Interpretarea computerizata
  • Rezolutie scazuta
slide18
SBT
  • SBT (Sequence Based Typing)
  • Rezolutie maxima
  • Amplificarea genei de interes
  • Secventializare
  • Confruntare cu baza de date – alele compatibile
  • Detectarea unor alele noi
metode serologice
METODE SEROLOGICE
  • Utilizeaza seruri cu concentratii mari de Ac anti-HLA specifici
    • Femei multipare
    • Lichid placentar
    • Pacienti cu transplante de organ sau transfuzii multiple
    • Ac monoclonali
metoda de lucru
METODA DE LUCRU
  • Separarealimfocitelorprincentrifugare in gradient de densitate
  • Ser cu Ac anti-HLA in godeuri
  • Se adaugasuspensielimfocitara in fiecaregodeu (complexe Ag-Ac)
  • Se adauga complement (ser de iepure)
  • Daca s-au format complexe se activeazacomplementul  lizaosmotica a celulelor
  • Se adauga colorant vital (eozina)
  • Se citeste la microscop cu contrast de faza
interpretarea rezultatelor
INTERPRETAREA REZULTATELOR
  • Limfocite vii: necolorate, stralucitoare, refractile
  • Limfocite moarte: umflate, rosu inchis
  • Pentru fiecare godeu: % limfocite moarte
  • Martor negativ: <10% moarte
  • Martor pozitiv: 100% moarte
interpretarea rezultatelor23
INTERPRETAREA REZULTATELOR
  • Identificarea serurilor care au reactionat cu suspensia limfocitara
  • Toate serurile cu specificitatea respectiva trebuie sa dea reactie pozitiva (>50% limfocite moarte)
tipizare hla a
TIPIZARE HLA-A

Interpretare: fenotip HLA A28, A3

screening pentru anticorpi anti hla
SCREENING PENTRU ANTICORPI ANTI-HLA
  • Detectarea Ac anti-HLA din sangele primitorului
  • Metoda de lucru:
    • Suspensie de leucocite cu HLA cunoscut in godeuri
    • Se adauga ser de la primitor (complexe Ag-Ac)
    • Se adauga Ac anti-Fc
    • Se adauga complement (ser de iepure)
    • Daca s-au format complexe  se activeaza complementul  liza osmotica a celulelor
    • Se adauga eozina si se citeste la microscop
interpretarea rezultatelor27
INTERPRETAREA REZULTATELOR
  • Limfocite vii: necolorate, stralucitoare, refractile
  • Limfocite moarte: umflate, rosu inchis
  • Pentru fiecare godeu: % limfocite moarte
  • Ac anti-HLA  probabilitatea de a gasi un donator compatibil
reactia mixta limfocitara
REACTIA MIXTA LIMFOCITARA
  • MLR (Mixed Lymphocyte Reaction)
  • LT ale unei persoane (P1) raspund la Ag HLA de pe limfocitele unei alte persoane (P2)
  • Stimulare Ag  proliferare limfocitara (sinteza crescuta de ADN)
  • Unidirectionala: se blocheaza proliferarea limfocitelor P2 si se analizeaza proliferarea limfocitelor P1
  • Bidirectionala: P1 si P2 se stimuleaza reciproc si se insumeaza raspunsurile
testul de limfotoxicitate mediata celular
TESTUL DE LIMFOTOXICITATE MEDIATA CELULAR
  • Se realizeaza o reactie mixta unidirectionala  populatie de limfocite citotoxice activate (P1) impotriva limfocitelor P2
  • P1 se pune in contact cu limfocite P2 marcate cu 51Cr
  • Se masoara 51Cr eliberat (comparativ cu celule 51Cr nespecifice de la o alta persoana)
  • ~Simulare transplant
probleme legate de hla
PROBLEME LEGATE DE HLA
  • Rejetul transplantului din cauza LT ale primitorului care recunosc HLA necompatibile
  • Factori care influenteaza rejetul:
    • Sarcina, transfuzii
    • Incompatibilitate HLA
    • Terapie pre-transplant mai putin agresiva
    • Terapie imunosupresoare post-transplant suboptimala
    • Depletia LT din grefele de maduva osoasa
    • Clasa I  tolerarea grefei
    • Clasa II  GVHD
reactia grefa contra gazda
REACTIA GREFA CONTRA GAZDA
  • GVHD (Graft Versus Host Disease)
  • = transplantarea de tesuturi imunocompetente (celule stem hematopoetice), necompatibile cu tesuturile primitorului in gazde imunodeprimate patologic sau farmacologic (medicatie imunosupresoare)
  • Celulele imune din grefa recunosc moleculele HLA ale gazdei ca fiind straine  raspuns imun impotriva celulelor gazdei
reactia grefa contra gazda32
REACTIA GREFA CONTRA GAZDA
  • GVHD acut:
    • <100 zile post-transplant
    • Piele, mucoase, plamani, ficat, tract gastro-intestinal
  • GVHD cronic:
    • >100 zile post-transplant
    • Piele, mucoase, plamani, ficat, tract gastro-intestinal, glande exocrine, tesut conjunctiv
  • Corticoterapie
gvhd acut
GVHD ACUT

Eritem palmar

gvhd acut34
GVHD ACUT

Ulceratii ale mucoasei bucale

gvhd acut35
GVHD ACUT

Degenarea stratului bazal, keratinocite necrozate

gvhd cronic
GVHD CRONIC

Papule confluente hiperpigmentate

gvhd cronic37
GVHD CRONIC

Placi sclerotice hiperpigmentate

gvhd cronic38
GVHD CRONIC

Modificari lichenoide difuze ale buzelor

gvhd cronic39
GVHD CRONIC

Hiperkeratoza, hipergranuloza, acantoza, degenerarea stratului bazal