Imunofenotypizace lymfatických uzlin

1. Imunofenotypizace lymfatických uzlin D. Starostka, M. Bílý, K. Klaricová, I. Ondrová,, M. Wróbel, L. Novosadová Oddělení klinické hematologie Nemocnice s poliklinikou Havířov

2. Možnosti laboratorního zpracování lymfatických uzlin • Cytomorfologie • Cytochemie a imunocytochemie • Histologie • Imunohistochemie • Imunofenotypisace buněčných suspensí • Cytogenetika • Molekulární biologie • Mikrobiologie

3. Postup zpracování lymfatické uzliny • Transport vzorku z operačního sálu v gáze zvlhčené pufrem PBS • Zhotovení otisku na sklíčko k cytologickému vyšetření • Rozstříhání vzorku na drobné části do malého množství PBS • Mechanická desintegrace • Filtrace • Stanovení buněčnosti suspense na hematologickém analyzátoru • Měření na průtokovém cytometru

11. Cíle imunofenotypizace • Hematopoetické buňky (CD45+), nebo CD45- elementy • Zastoupení jednotlivých lymfoidních linií • Přítomnost monoklonality • Charakteristický imunofenotyp

12. Panel pro imunofenotypizaci lymfoproliferací na OKH NsP Havířov • Panleukocytární marker : CD45 • T – markery : CD 3, CD 4, CD 8, CD 5, CD 7, CD 2, CD 1 , TCR • B – markery : CD 19, CD 20, CD 21, CD 22, CD 23, CD 25, CD 38, CD 11c, CD 79b, FMC 7, CD 40, CD 28, CD 103, CD 138 • NK – markery:CD 16, CD 56 • Povrchové, event. intracytoplazmatické imunoglobuliny : těžké řetězce IgG, IgM, IgA, IgD lehké řetězce kappa a lambda

13. Imunofenotyp u chronických B - lymfoproliferací

14. Úskalí přípravy a měření vzorků a interpretace výsledků • Odběr uzliny • Konsistence uzliny • Způsob desintegrace • Potenciální nereprezentativnost vyšetřované populace • Způsob lýzy erytrocytů • Gateování

15. Problém: gate

16. Diagnostický souhrn 1.

17. Diagnostický souhrn 2.

18. Diagnostický souhrn 3.

19. Kasuistiky – klinická data • Kasuistika č. 1: Pacientka O.K., 46 let. Multilokulární lymfadenomegalie s predilekční intraabdominální masou. Leukocytosa (35 x 109/l) s absolutní lymfocytosou (0.70 numfr.). • Kasuistika č. 2: Pacientka J.M., 43 let. Sjögrenův syndrom. Během hospitalisace pro bronchopneumonii zjištěna isolovaná cervikální lymfadenomegalie. Sérový paraprotein IgM. • Kasuistika č. 3: Pacient L.K., 64 let. B-CLL s malým klonem v periferní krvi (leukopenie), nodulární typ postižení KD. Po půlročním sledování masivní rychle narůstající cervikální lymfadenomegalie („býčí šíje“). Klinické podezření na histologickou transformaci B-CLL v high-grade lymfoproliferaci.

20. Kasuistika č. 1 - cytologický nález

21. Kasuistika č. 1 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

22. Kasuistika č. 1 - rozdíly v imunotypu lymfomových buněk uzliny, KD a PK Lymfatická uzlina 48,0 % Kostní dřeň 23,4 % Periferní krev 6,0 %

23. Kasuistika č. 2 - cytologický nález

24. Kasuistika č. 2 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

25. Kasuistika č. 3 - cytologický nález

26. Kasuistika č. 3 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

27. Závěry • Rychlá, citlivá a v mnoha případech diagnostická metoda umožňující v závažných případech bezprostřední léčbu • Spojení s cytologií otiskového preparátu zvyšuje diagnostickou výtěžnost • Odlišení uzlin postižených lymfoproliferacemi od metastatických uzlin (negativita CD45 na metastatických buňkách) • Přesná specifikace B- non-hodgkinských lymfomů (B-NHL) podle charakteristického imunofenotypu • U non-hodgkinských lymfomů (NHL) vysoký stupeň souladu mezi histologickou diagnózou a typizačním nálezem • U Hodgkinova lymfomu vyšetření problematické