149-2.1 实验目的 (1) 使用 Agilent 8453 紫外 - 可见分光光度计测定铁含量，根据分析结果，计算出铁的具体含量。

实验149-2 紫外-可见光度法仿真 149-2.1 实验目的 (1) 使用Agilent 8453紫外-可见分光光度计测定铁含量，根据分析结果，计算出铁的具体含量。 (2) 吸收定律：A=lg（I0/I）=KcL。根据这一关系可以用工作曲线法来测定未知溶液中吸光物质的浓度。

149-2.2 实验原理 • 在分之中，除了电子相对于原子核的运动之外，还有原子核之间振动和转动引起的相对位移。这三种运动能量都是量子化的，对应有一定的能级。分子的能量是这三种能量的总和。当用一定频率（波长）的电磁波（光）照射分子，其能量恰好等于分子的两个能级差时，则分子就会吸收光的能量而由较低的能级跃迁到较高的能级，同时光的强度（能量）变小。吸光度符合吸收定律：A=lg（I0/I）=KcL。

根据被测量物质分子对紫外-可见波段范围（150～800nm）单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定性、定量或结构分析的一种方法。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。根据被测量物质分子对紫外-可见波段范围（150～800nm）单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定性、定量或结构分析的一种方法。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。 • 根据A=lg（I0/I）=KcL可以用工作曲线法来测定未知溶液中吸光物质的浓度。

140-2.3 实验装置 • Agilent 8453紫外-可见分光光度计使用最新的二极管阵列技术，符合欧洲药典（EP）和美国药典（USP）所有规范要求。Agilent8453具备二极管阵列的优势，氘、钨双灯设计，波长范围190～1100 nm，分辨率小于2 nm，并且标准杂散光强度低于0.03%，配有安捷可见光化学工作站软件。

149-2.4 实验步骤 • （1) 启动系统平台，选择实验仪器 • (2) 进入到起始界面 • (3) 进入流程图界面，进行实验准备工作 • (4) 实验准备工作 • (5) 启动工作站软件 • (6) 确定工作波长 • (7) 建立工作曲线 • (8)测试待测样品

149-2.5 注意事项 • （1）氢气做载气时尾气一定要排到室外。 • （2）手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡，进样速度要快，每次相同速度。 • （3）色谱柱两头要用玻璃棉塞好，防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。

149-2.6 问题讨论 • （1）紫外-可见分光光度计由哪几部分部件组成？ • （2）物质分子对紫外-可见波段范围是多少？ • （3）紫外-可见分光光度计的工作原理是怎样的？

149-2.7 参考答案 （1）紫外-可见分光光度计由哪几部分部件组成？答：紫外-可见分光光度计由5个部件组成： ①辐射源。必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500 nm），氘灯或氢灯（180～460 nm），或可调谐染料激光光源等。 ②单色器。它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。

③试样容器，又称吸收池。供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。容器的光程一般为0.5～10 cm。 ④检测器，又称光电转换器。常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。 ⑤显示装置。这部分装置发展较快。较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。

（2）物质分子对紫外-可见波段范围是多少？ • 答：紫外-可见光谱仪涉及的波长范围是0.2～0.8μm（对应波数50000-12500厘米-1），它在有机化学研究中得到广泛的应用。通常用作物质鉴定、纯度检查，有机分子结构的研究。

（3）紫外-可见分光光度计的工作原理是怎样的？ • 答：紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外--可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。

149-2.1 实验目的 (1) 使用 Agilent 8453 紫外 - 可见分光光度计测定铁含量，根据分析结果，计算出铁的具体含量。