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Notch est décidément partout!

Notch est décidément partout!. TD2 Avril 2012. Les cellules souches. cellules souches et intestin . Dans la région 1-4 des cryptes? 1974: présence de «  crypt -base collumnar cells  » (CBC).

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Notch est décidément partout!

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Presentation Transcript

  1. Notch est décidément partout! TD2 Avril 2012

  2. Les cellules souches

  3. cellules souches et intestin Dans la région 1-4 des cryptes? 1974: présence de « crypt-base collumnarcells » (CBC). cellules intercalées entre les cellules de Paneth à la base des cryptes, et capables de proliférer. Ces cellules auraient une activité de cellules souches

  4. A la pêche aux marqueurs… Lgr5… Olfm4...

  5. Signalisation Notch • Notch: molécule transmembranaire • 4 récepteurs (notch 1, …) et 5 ligands (delta 1-3 -4 ou jagged 1-2) • Lorsque notch interagit avec son ligand: Clivage de la partie intracellulaire de notch (NotchIntraCellular Domain), translocation dans le noyau • Activation de la transcription de gènes • « interrupteur »

  6. Souris LGR5-GFP • Traitement des intestins avec ou sans DBZ (inhibiteur de notch)

  7. Quantité totale de GFP Intensité GFP Cellules GFP/cryptes

  8. L’inhibition de la signalisation Notch entraine une forte diminution du nombre de CBC Pourquoi une diminution de ce type de cellules? Moins de prolifération?Moins de mort cellulaire?

  9. Prolifération ?

  10. apoptose ? Ctrl : pas d’apoptose au niveau des CBC DBZ:?

  11. La diminution du nombre de CBC est due à Une diminution de la proliferation Une induction de l’apoptose Notch réduit le nombre de cellules souche?

  12. Analyse de la formation d’organoïdes

  13. Notch est nécessaire au maintien du nombre de CBC

  14. Impact de Notch sur des marqueurs de CBColfm4 ARNm anticorps inhibiteur

  15. Impact de Notch sur des marqueurs de CBC Cellules LS174T immunoprécipitation de la chromatine

  16. Impact de notch sur la différenciation(bleu alcian)

  17. Impact de notch sur la différenciation(chromogranine A)

  18. Impact de notch sur la différenciation(dcamKL1)

  19. Impact de notch sur la différenciation(lysosyme) Marquage anormal

  20. L’inhibition de Notch entraine une augmentation du nombre de cellules sécrétrices Mais les granules de sécrétion des cellules de Paneth semblent anormaux

  21. Analyse ultrastructurale Bleu : cellule de Paneth Orange: CBC Morphologie anormale ?

  22. Un double marquage particulier ctrl DBZ Muc-2: cellules en gobelet MMP-7: cellules de Paneth

  23. Lorsque notch est inhibé, les cellules expriment à la fois des marqueurs de cellules de Paneth et des marqueurs de cellules en gobelet La signalisation Notch est necessaire pour maintenir le phénotype « cellules de Paneth » Le blocage de la signalisation Notch stimule la formation et l’accumulation de cellules qui co-expriment des marqueurs de cellules de Paneth et de cellules en gobelet

  24. Mécanismes moléculaires Atoh1: facteur de transcription régulé par Notch Marquage de Atoh1

  25. Mécanismes moléculaires facteur de transcriptions activés en aval de Atoh1 et impliqués dans la différenciation des cellules sécrétrices

  26. Atoh1 impliqué dans la regulation des CBC? Souris KO Atoh1

  27. La régulation des CBC par Notch est indépendant de atoh1

  28. Donc… Notch régule différents aspects de la différenciation intestinale 1/ action sur CBC en activant la transcription d’olfm4, la prolifération et la survie cellulaire 2/favorise la différenciation des celllles absorbantes en inhibant Atoh1 3/ ségrégation des cellules de Paneth et des cellules en gobelet.

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