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Tecniche di preparazione e conservazione degli emocomponenti

Tecniche di preparazione e conservazione degli emocomponenti. Bologna, 11/3/2006. Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL Ravenna. Definizioni. prodotti del sangue gli emocomponenti e gli emoderivati emocomponenti

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Tecniche di preparazione e conservazione degli emocomponenti

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Presentation Transcript

  1. Tecniche di preparazione e conservazione degli emocomponenti Bologna, 11/3/2006 Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL Ravenna

  2. Definizioni • prodotti del sangue gli emocomponenti e gli emoderivati • emocomponenti i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesi • emoderivati i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità medicinali estratte dall’emocomponente plasma mediante processo di lavorazione industriale Legge 21/10/2005, n° 219: Nuova disciplina delle attività trasfusionali e della produzione nazionale degli emoderivati

  3. emocomponenti i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesi Sangue intero Eritrociti Leucociti Piastrine Plasma Emocomponenti di 2° livello • Terapia trasfusionale mirata • Conservazione idonea di ciascun componente

  4. Centrifugazione + filtrazione Eritrociti Leucociti Piastrine Plasma • Quantità raccolta • Emocomponenti non ottenibili da unità di sangue intero

  5. Plasma Eritrociti Leucociti Plasma Centrifugazione Piastrine Piastrine 2000 rpm 5-8 min Centrifugazione 3500 rpm 15-20 min Leucociti Eritrociti Plasma Leucociti Centrifugazione Piastrine Piastrine

  6. Eritrociti • Emazie concentrate • Emazie concentrate private del buffy coat • Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive • Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive • Emazie lavate • Emazie leucodeplete • Emazie irradiate • Emazie congelate • Concentrato di emazie da aferesi

  7. Emazie concentrate 2-6 °C 35 gg Emazie concentrate private del buffy-coat

  8. Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive 2-6 °C 42 gg Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive

  9. Emazie lavate PNH – deficit IgA • Lavaggi con soluzione isotonica a 4 °C • Proteine < 0.3 g/unità 2-6 °C Conservare il minor tempo possibile (<24 h se apertura del sistema)

  10. Emazie leucodeplete Emazie irradiate • 25-50 Gy • Filtrazione - Leucociti < 1x106 2-6 °C Stessa durata del prodotto corrispondente (<24 h se apertura del sistema) Irradiazione entro 14 gg dal prelievo Trasfusione entro 28 gg dal prelievo Trasfusione entro 48 ore dall’irradiazione in neonati o iperpotassemia

  11. Emazie leucodeplete • Riduzione alloimmunizzazione • Riduzione infezioni post-operatorie • Riduzione reazioni trasfusionali non-emolitiche • Riduzione GVHD • Riduzione trasmissione patogeni (CMV, CJD) • Riduzione mortalità post-operatoria (cardio-chirurgia) • Riduzione ospedalizzazione

  12. Emazie congelate Glicerolo 15-20% Glicerolo 40% Entro 7 gg dalla raccolta -60 -80 °C Azoto liquido (-150 °C) Fino a 10 anni Scongelamento Deglicerolizzazione Utilizzare nel più breve tempo possibile

  13. Leucociti • Concentrato granulocitario da aferesi • Cellule staminali emopoietiche periferiche

  14. Concentrato granulocitario da aferesi Authors’ conclusions:‘Currently there is inconclusive evidence from RCTs to support or refute the generalized use of granulocyte transfusion therapy in the most common neutropenic patient population’

  15. Concentrato granulocitario da aferesi • Mobilizzazione leucocitaria nel donatore (Steroidi o G-CSF) Conservazione a 20-24°C per 24 h Utilizzare nel più breve tempo possibile • Granulociti da sangue intero (buffy-coat): • Utilizzati, prevalentemente in OE pediatrica, negli anni ‘80 • Abbandonati per inefficacia

  16. Cellule staminali emopoietiche periferiche Da aferesi • Uso autologo o omologo • Preparazione del paziente/donatore (mobilizzazione CD34) • Ciclofosfamide 4 g /m2 (autologo) • G-CSF s.c. per 4-5 gg • 1-2 procedure (2-3 ore) in giorni successivi Congelamento in azoto liquido con crioprotettori Conservazione a -80°C Scongelamento a 37°C e impiego immediato

  17. Cellule staminali emopoietiche periferiche Da cordone ombelicale • Facilità di prelievo • Necessità meno stringente di HLA-matching • Ridotta GVHD • Minore rischio di rigetto (blando condizionamento) • Ridotto numero di cellule CD34 (pazienti pediatrici) • Espansione in vitro Congelamento in azoto liquido con crioprotettori Conservazione a -80°C Scongelamento a 37°C e impiego immediato

  18. Piastrine • Concentrato piastrinico da aferesi • Concentrato piastrinico da plasma-piastrinoaferesi • Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero • Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat • Concentrato piastrinico lavato • Concentrato piastrinico irradiato • Piastrine crioconservate (da aferesi) • Gel piastrinico

  19. Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero Plasma Centrifugazione Plasma 2000 rpm 5-8 min Piastrine Sangue intero (20-24 °C) Centrifugazione Leucociti 3500 rpm 15-20 min Piastrine Centrifugazione Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat Leucociti

  20. Fino a 5 gg dal prelievo • 20-24 °C • Agitazione continua

  21. Eritrociti Leucociti Piastrine Plasma • Concentrato piastrinico lavato • Concentrato piastrinico irradiato • Come concentrati piastrinici • Piastrine crioconservate (da aferesi) • Congelamento entro 24 ore dal prelievo • Crioprotettore (DMSO) • Conservazione 1 anno a -80°C, 10 anni a -150°C • Utilizzo immediato dopo scongelamento • Gel piastrinico

  22. Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero Plasma Centrifugazione Plasma 2000 rpm 5-8 min Piastrine Sangue intero (20-24 °C) Centrifugazione Leucociti 3500 rpm 15-20 min Piastrine Centrifugazione Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat Leucociti

  23. Gel piastrinico • Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero • Autologo • Quantità di sangue intero variabile (30-50 cc) Aggiunta di calcio e trombina • Elevato contenuto di fattori di crescita degli α-granuli • Favorisce i processi di riparazione tessutale • Utilizzato in chirurgia maxillo-faciale, ortopedia, trattamento ulcere cutanee Utilizzare nel più breve tempo possibile

  24. Plasma • Plasma fresco congelato • Crioprecipitato • Plasma privo di crioprecipitato • Colla di fibrina • PLASMADERIVATI • Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche • Immunoglobuline • Uso ev • Specifiche anti-HBV • Specifiche anti-tetano • Fattori della coagulazione

  25. Plasma fresco congelato • Separato entro 6 ore (non oltre 18) dal prelievo • Congelamento a -30° completato entro 1 ora • Congelato entro 6 ore dal prelievo • Tipo A (aferesi) • Tipo B (scomposizione) • Congelato tra 6 e 72 ore dal prelievo • Tipo C (scomposizione) • Albumina • Immunoglobuline • ATIII • FVIII • FIX • Complesso protrombinico

  26. Plasma fresco congelato • Utilizzo per uso clinico entro • 24 mesi se conservato ad almeno -25°C • 3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C • Scongelato a 30-37°C con idonea strumentazione • Utilizzato nel più breve tempo possibile • Entro 24 ore se conservato a 0-4°C

  27. Scongelamento a 1-6°C Plasma fresco congelato • Crioprecipitato • FVIII, FXIII, vWF, fibrinogeno, fibronectina • Plasma privo di crioprecipitato (cryosupernatant) • vWF metalloproteasi (ADAMTS13) • Ricongelamento entro 1 ora • 24 mesi se conservato ad almeno -25°C • 3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C • Utilizzato nel più breve tempo possibile • Entro 24 ore se conservato a 0-4°C

  28. Colla di fibrina • Crioprecipitato (autologo) • Calcio + trombina • Facilitazione della cicatrizzazione delle ferite chirurgiche • Azione favorevole sull’emostasi Utilizzato nel più breve tempo possibile • Congelamento • 24 mesi se conservato ad almeno -25°C • 3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C • Crioprecipitato • Piastrine congelate • Calcio + trombina Gel criopiastrinico

  29. Emoderivati (Plasmaderivati) • Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche • Immunoglobuline • Uso ev • Specifiche anti-HBV • Specifiche anti-tetano • Fattori della coagulazione • Metodiche di precipitazione/purificazione • Metodi fisici (crioprecipitazione) • Metodi fisico-chimici (etanolo - Cohn) • Metodiche cromatografiche • Gel-filtrazione • Cromatografia a scambio ionico e interazione idrofobica • Cromatografia ad affinità

  30. Emoderivati (Plasmaderivati) – Riduzione rischio infettivo • Quarantena donazione esami Fase finestra • Pathogen inactivation technology

  31. Pathogen inactivation • Trattamenti al calore • Pastorizzazione • Trattamento al vapore • Dry heat • Trattamenti sovente-detergente • TriNButylPhosphate – Tryton X100 • Trattamento al vapore • Dry heat • Nanofiltrazione • Trattamento al blu di metilene • Amatosalene - UV

  32. Pathogen inactivation • Perdita di proteine • Costo • Tossicità sul ricevente • Danno alle cellule • Alchilanti (S-303, PEN110) • Riboflavina Eritrociti • Psoralene - UV • Riboflavina - UV Piastrine

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