1 / 19

Syifa F. Syihab 20509004 Stevani O. P. 20509020

Aktivitas Peptidyl Transferase dalam Penentuan Afinitas Pengikatan Antibiotik ( Tiamulin dan Valnemulin ) Mata Kuliah Enzimologi. Syifa F. Syihab 20509004 Stevani O. P. 20509020. Latar Belakang. Antibiotik . Bakteri Resisten. Penurunan Aktivitas Peptidyl Transferase.

faraji
Download Presentation

Syifa F. Syihab 20509004 Stevani O. P. 20509020

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. AktivitasPeptidylTransferasedalamPenentuanAfinitasPengikatanAntibiotik (TiamulindanValnemulin)Mata KuliahEnzimologi Syifa F. Syihab 20509004 Stevani O. P. 20509020

  2. LatarBelakang Antibiotik Bakteri Resisten PenurunanAktivitasPeptidylTransferase Masalah pengobatan infeksi Mutasi rRNA dalam ribosomMycobacterium smegmatis Resistensiantibiotik yang berikatandenganPeptidyltranseferase

  3. PeptidylTransferase

  4. Inhibitor PeptidylTransferase • Chloramphenicolmengikatresidu A2451 dan A2452 pada 23 sRNAdariribosomdanmenghambatpembentukanikatanpeptida. • Pleuromutillin yang mengikatpeptidyltransferase. • Antibiotikmacrolide yang menghambatkerjapeptidyltransferase, dantranslokasipadaribosom.

  5. Struktur & Binding Site PeptidylTransferase Binding site peptidyltransferasepada erythromycin padaD. radiodurans. Keterangan: Hijau: antibiotik Kuning: bagian protein ribosom L4 Hijaumuda: bagian protein ribosom L22 Peptidyltransferase center (PTC): Sisiribosomtempatpembentukanikatanpeptida

  6. Mekanisme PeptidylTransferase (P. Nissen et al., Science 289:920–930, 2000)

  7. EkstraksiPeptidylTransferasedariRibosom(Bruce A. Maguire, et al. 2009. RNA 2008 14: 188-195) Preparasi Resin PembiakanSel PreparasiRibosom Kromatografi Analisis PAGE Ekstraksi & Analisis Protein Ekstraksi & Analisis RNA PengujianRibosom Binding PengujianTranslasi & TranskripsipadaBakteri

  8. Antibiotik Senyawa yang dihasilkanolehsuatumikroorganisme yang menghambatpertumbuhanmikroorganisme lain (selektif) dengancaramenekanataumenghentikansuatuprosesbiokimiadalammikroorganisme (infeksibakteri).

  9. Tiamulin & Valnemulin MerupakanturunansemisintetikdariPleuromutilin. Termasukantibiotikmacrolide yang menghambatkerjapeptidyltransferase & translokasipadaribosom.

  10. PLEUROMUTILIN TIAMULIN VALNEMULIN

  11. A: Model letak PTC padaribosombakteri 70S. Kuning (protein), Biru (subunit 30S dan 50S). Peptidyl transferase centre (ptc) adalah sasaran tiamulin dan valnemulin dalam ribosom bakteri.

  12. Mutasipada 23sRNA M.smegmatis • Struktursekunderpeptidyltransferasedari 23 sRNApadaM. smegmatis 23S rRNA (E. coli numbering) . • Posisimutasitunggalpada strain mutanditandaiwarnahijau(2055), biru (2447), merah (2504) dankuning (2572).

  13. Valnemulinterikatpada PTC (subunit 50S ribosom E. coli ). Nukleotidamutan: hijau(2055), biru (2447), merah (2504) dankuning (2572). Tiamulin (ungu), nukleotida U2506 & U2585 (turquoise)

  14. PengujianafinitaspengikatanantibiotikpadaMycobacterium smegmatis. Penentuan strain dan plasmid (pembiakan strain dalam media) Pembentukan plasmid (mutasipadafragmen) Transformasidanisolasimutanrekombinan Penentuanlajupertumbuhanstrain (inkubasi37 ˚C, 3 hari) Ujikepekaanantibiotik (mengukurnilai OD pada 450 nm yang dibacaolehmicrotitreplatereader) Penelusuranantibiotik (72 jam pada LB plus antibiotic) Percobaanpemodelanmolekul (Visualisasistruktur Kristal danhasilpemotonganolehVMD)

  15. Strain dan Plasmid yang digunakan

  16. Lajupertumbuhan & kepekaanantibiotikpada 23 sRNA M. smegmatis(strain mutan)

  17. Primer DNA Nukleotida

  18. KESIMPULAN • Mutasi menunjukkanresistensi valnemulin yang signifikan. • Mutasipada posisi 2447 dan 2504 juga memberikan resistensi silang terhadap antibiotik lain yang terikat pada PeptidylTransferase dalam M. Smegmatis. • Pemberianantibiotik pada ribosom mutan menunjukkan bahwa mutasi menyebabkan kerusakan struktur pada PeptidylTransferaseCenter dan mengurangi ikatan antibiotik pleuromutilin.

  19. DAFTAR PUSTAKA • Beringer, Malte. RNA 2008 14: 795-801 • Bruce A. Maguire, Lillian M. Wondrack, Leonard G. Contillo, et al. 2009. RNA 2008 14: 188-195. • Committee for Veterinary Medicinal Products. 2008. Tiamulin. European Medicines Agency Veterinary Medicines and Inspections. • David G S Burch BVetMed MRCVS. Valnemulin - New Indications for Colitis and Ileitis. Available at: www.octagon-services.co.uk • HF Noller, V Hoffarth, and L Zimniak Science, Vol 256, Issue 5062, 1416-1419. 1992 by American Association for the Advancement of Science. • Long, S.Katherine, et.al. 2009. Molecular Biology. 71(5), 1218–1227. Blackwell Publishing Ltd. • Mikkelsen, Susan R. and Corton, Eduardo. 2004. Bioanalytical Chemistry. John Wiley & Sons, Inc., Publication • Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUMB). 2009. • P. Nissen et al., Science 289:920–930, 2000.

More Related