1 / 18

Katarzyna Szołtysek

Funkcjonalne współzależności szlaków sygnałowych zależnych od czynników transkrypcyjnych TP53 i NF k B. Katarzyna Szołtysek. Mechanizm regulacji NF k B, współzależności z TP53. TP53 jako czynnik transkrypcyjny. www.brc.riken.jp /.../201p53_network.html. Regulacja aktywacji TP53.

eara
Download Presentation

Katarzyna Szołtysek

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Funkcjonalne współzależności szlaków sygnałowych zależnych od czynników transkrypcyjnych TP53 i NFkB. Katarzyna Szołtysek

  2. Mechanizm regulacji NFkB, współzależności z TP53

  3. TP53 jako czynnik transkrypcyjny www.brc.riken.jp/.../201p53_network.html

  4. Regulacja aktywacji TP53 • MDM2 negatywny regulator p53: • wiąże się z domeną TA p53 • eksport p53 z jądra komórkowego • funkcja ligazy ubikwityny • PTEN pozytywny regulator p53: • defosforyluje PIP3 (Pi3-4-5P) • blokada aktywacji Akt/PKB http://p53.free.fr/index.html

  5. Cel pracy • zidentyfikowanie i scharakteryzowanie funkcjonalnych współzależności pomiędzy szlakami sygnałowymi zależnymi od czynników transkrypcyjnych NFkB i TP53 • analiza wpływu aktywacji szlaku zależnego od NFkB na przeżycie komórek nowotworowych eksponowanych na czynniki genotoksyczne (promieniowanie UV i promieniowanie jonizujące) • analiza profilu ekspresji wybranych genów regulowanych przez czynniki transkrypcyjne NFkBi TP53, w warunkach kontrolnych i w komórkach eksponowanych na czynniki stresu komórkowego • identyfikacja genów, na których aktywność mają wpływ oba czynniki transkrypcyjne i opracowanie modelu funkcjonalnych współzależności obu szlaków sygnałowych

  6. Model doświadczalny HCT116(rak jelita grubego) • p53+/+ (wt) • p53-/- (bi-allelicknock-out) HCT116 STATUS p53: A – RT-PCR B – Western blot A B

  7. Analiza poziomu ekspresji genów oraz białek TP53 zależnych Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-) Analiza (WB, qRT-PCR): regulacja p53 blokada cyklu komórkowego indukcja apoptozy

  8. Analiza poziomu ekspresji genów oraz białek TP53 zależnych Analiza aktywacji badanych ścieżek sygnałowych Indukcja białka p53: A – Western blot A B C Indukcja ścieżki NFkB: B – Western blot C – RT-PCR

  9. Analiza poziomu ekspresji genów TP53 zależnych Schemat ścieżki sygnałowej TP53

  10. Analiza ekspresji genów regulatorowych, zależnych od TP53 – MDM2 HCT116 p53-/- HCT116

  11. Analiza ekspresji genów regulatorowych, zależnych od TP53 – PTEN HCT116 p53-/- HCT116

  12. Analiza ekspresji genów zależnych od TP53 – p21 HCT116 p53-/- HCT116

  13. Analiza ekspresji genów zależnych od TP53 – Noxa HCT116 p53-/- HCT116

  14. Wnioski: • stymulacja komórek TNFa wpływa na aktywację genów zależnych odp53, wywołaną promieniowaniem UV • poziom ekspresji MDM2 i PTEN ulega podwyższeniu w obu stosowanych schematach • poziom ekspresji p21/WAF1 i Noxa ulega początkowemu obniżeniu, a następnie podwyższeniu w obu stosowanych schematach aktywacji analizowanych ścieżek sygnałowych

  15. Analiza poziomu ekspresji genów NFkBzależnych Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-) Analiza: qRT-PCR PCR Array (SABioscience - NFkB dependent genes)

  16. Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-) Analiza: cDNA 1h

  17. Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-) Analiza: cDNA 1h

  18. Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB Analiza qRT-PCR: BCL3, NFKBIA, REL, IL1A, IL8, TNF, TNFAIP3

More Related