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“Apoptosis inducida por Bid es inhibida por Bcl-2” PowerPoint Presentation
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“Apoptosis inducida por Bid es inhibida por Bcl-2”

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“Apoptosis inducida por Bid es inhibida por Bcl-2”

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  1. “Apoptosis inducida por Bid es inhibida por Bcl-2” JBC, Vol. 18,No 19, 2003. Mariano Dellarole Fernanda Quinteros Laura Sifonios

  2. La vida requiere de la muerte... Células dañadas Infectadas Redundantes Eliminación por un programa de suicidio celular : Apoptosis. Involucrada en : Desarrollo normal Homeostasis de tejidos Defensa contra patogenos Cáncer Su desregulación puede producir: Enfermedades autoinmunes Enfermedades degenerativas

  3. Traslocación * Bid procesamiento tBid proteoloítico (forma activa) (Caspasa 8) Inserción en la membrana mitocondrial Liberación citocromo c Apoptosis * La familia de las proteínas Bcl2 son reguladores de la apotosis *Presentan dominios de homología Bcl2 (BH). *Antecedentes documentados del bloqueo de la apoptosis por Bcl2

  4. La Familia de Bcl-2 Bcl-xl Fuente: review de J. M. Adams, Science 1998 Vol 281

  5. *Objetivo: Determinar los mecanismos mediante los cuales Bcl-2 inhibe la apoptosis inducida por Bid. *Modelo de expresión: pcDNABid HeLa cells pcDNABcl2 pcDNAEGFP

  6. Figura 1: Objetivo: Determinar si Bcl2 inhibe la apoptosis inducida por Bid. • Observación de la morfología. • Análisis bioquímicos. Conclusión: Bcl2 inhibe la apoptosis inducida por Bid.

  7. Figura 2: Objetivo: Estudiar el rol de Bcl2 sobre la liberación del citocromo cinducida por Bid • Inmunoblot de fracciones subcelulares • Inmunofluorescencia Conclusión: Bcl2 bloquea la liberación del citocromo c de la mitocondria inducida por Bid

  8. Figura 3 Objetivo : estudiar el papel de Bcl-2 en el procesamiento proteolitico de Bid. • Inmunoblot. Conclusión: Bcl-2 no evita el procesamiento de Bid..

  9. Figura 4 Objetivo: determinar si Bcl-2 inhibe la translocación de Bid a la membrana mitocondrial. • Inmunoblot de fracciones • subcelulares. Conclusión: Bcl-2 no impide la translocación de tBid a la mitocondria.

  10. Figura 5: Tratamiento alcalino: Fraccionamiento subcelular (digitonina) Carbonato ph 11.5 Organelas Pellet: proteinas resistentes (integradas a mb.) Centr. a 100.000g por 1 hora. Sn: proteinas liberadas (debilmente unidas a mb)

  11. Figura 5: Objetivo: determinar si Bcl-2 inhibe la inserción de tBid a la membrana mitocondrial. • Inmunoblot • Densitometria de las bandas p15 (S1 y S2) Conclusión: Bcl-2 impide la inserción de tBid a la membrana mitocondrial.

  12. Figura 6 Objetivo: determinar si Bcl-2 interactua directamente con tBid. • Co-inmunoprecipitación de • Bcl-2 y Bid/tBid. Inmunoblot. Conclusión: Bcl-2 no interactua con tBid.

  13. Figura 7 Translocación a la mb. mitocondrial. Bax/Bak Oligomerización tBid Apoptosis Objetivo: Bcl-2 inhibe la translocación de Bak/Bax inducida por tBid? • Inmunoblot de fraccionamiento • subcelular. Conclusión: Bcl-2 impide la translocación de Bax a membrana mitocondrial.

  14. Figura 8 Objetivo: analizar el estado de oligomerización de Bak/Bax en la fracción de organelas. células crosslinking pellet digitonina Fracción de organelas inmunoblot Conclusión: Bcl-2 bloquea la oligomirización de Bak/Bax inducida por Bid.

  15. Fin de la historia: • Tres eventos importantes son bloqueados por Bcl-2: • Bcl-2 suprime la inserción de tBid a la membrana de la mitocondria. • Bcl-2 inhibe la translocación desde el citosol a la mitocondria de Bax, • inducida por Bid. • Bcl-2 disminuye la oligomerización de Bax y Bak inducida por Bid. Chán, chán.