Controllo di Qualità in Immunoistochimica

1. Controllo di Qualità in Immunoistochimica Marco Chilosi Dipartimento di Patologia Università di Verona

2. L’ Orrore in Anatomia Patologica • Colpa grave • Perdita di chances • Negligenza • Imprudenza • Imperizia • Eventi avversi • Riconoscibilità del pericolo • Raccolta delle prove • Nesso di causalità • CTU • Carenza strutturale • Assicurazioni • Obbligo di Risultato • Variabilità diagnostica • Etc…etc…

3. Sick man persecuted by doctors Malato perseguitato dagli speziali Arazzo francese del XVIII secolo

4. Magistrati – Avvocati – Medici Legali Assicuratori Pazienti Periti - Direttori Generali

5. Come evitare gli eventi avversi in Anatomia Patologica?Soluzioni Incremento del controllo sul sistema: • Comunicazione – integrazione • Informazioni – chiarezza - evidenza • Standardizzazione e aggiornamento • Elevati livelli di Diligenza • Competenza • Adeguatezza delle risorse e delle strutture

6. Come evitare gli eventi avversi in Anatomia Patologica?Soluzioni • Incremento del controllo sul sistema: • Comunicazione – integrazione • Informazioni – chiarezza - evidenza • Standardizzazione e aggiornamento • Elevati livelli di Diligenza • Competenza • Adeguatezza delle risorse e delle strutture QUALITA’ (reale e percepita)

7. Definizione della Mission • Fornire la corretta risposta alle domande del Clinico (cliente intermedio) che opera come tramite del Paziente

8. IHC Le analisi immunoistochimiche sono strumenti ormai irrinunciabili in diversi campi della diagnostica istopatologia. Il significato di questo tipo di indagini ha generalmentedue tipologie:

9. Completamento diagnostico, identificazione anomalie di espressione di particolari geni correlabili con particolari caratteristiche di valenza prognostica o predittiva • (ad es. l’indice di proliferazione con Ki67, la valutazione semiquantitativa dell’espressione di Recettori ormonali e di HER2 nel carcinoma della mammella)

10. validazione di ipotesi diagnostiche basata sull’identificazione di specifici “profili immunofenotipici” • (ad esempio l’identificazione di un profilo CD20+, CD5+, CD23-, con iper-espressione di ciclina-D1 consente di confermare l’ipotesi diagnostica di un linfoma B a cellule del mantello).

11. T.L. #00-0175, m:Lymphocytosis IHC profile

12. T.L. #00-0175, m Lymphocytosis DIAGNOSI:Mantle Cell Lymphoma • CORRETTA • PRECISA • COMPLETA • AGGIORNATA • RIPRODUCIBILE • RAPIDA • ECONOMIC. COMPATIBILE

13. Le moderne classificazioni dei tumori si basano sulla integrazione della caratterizzazione morfologica, immunofenotipica e genetica delle cellule neoplastiche 2002 Modern Pathology

14. Accuratezza Quesito clinico: Ulcera gastrica: carcinoma? Linfoma? altro? Diagnosi differenziale morfologica: Neoplasia scarsamente differenziata, suggestivo di carcinoma

15. IHC profile CK8/18 CK8/18 CD20 Ki67 Diagnosi finale: B-LC-NHL

16. aSMA- DESMIN+ VIMENTIN+ CK8- CD99- MYOGENIN+ R.F. f, 1967 #88-1428BOM Diagnosi: leucemia linfoblastica Revisione: Metastatic RABDOMYOSARCOMA Myogenin Desmin

17. Validazione • In contesti di diagnosi differenziale particolarmente critici la “validazione” di una ipotesi diagnostica può essere considerata come Second-Opinion “interna” • Incremento della precisione diagnostica • Diminuzione degli errori • Dimostrazione di prudenza e diligenza • Diminuzione di comportamenti difensivi

18. SCLC IHC profile CK-/+- dot CD56 +++ TTF1 -/++ CDX2 -/+ PAX5 + P53 ++ Ki67>80%+ Ki67 p53 TTF1

19. 08-0066Bio neoformazione mucosa bronchiale Ki67 CD56 CK7

20. CD3 Diagnosi: DLBCL CD20 P53

21. MORFOLOGIA MOLECOLARE Aspetti Legali In caso di “errore” diagnostico • Non esecuzione di marcatori MM • Errata interpretazione dei dati di MM • Non idoneità dei reagenti utilizzati

22. Qualità • Evoluzione della “domanda” • Appropriatezza della risposta

23. 2008

24. #08-3737 - CK5 TTF1 p63 CK7 Caratterizzazione IHC di NSCLC

25. problemi Non è una bacchetta magica • E’ un’arma potente • Può indurre in errore se mal utilizzata • Consumo di risorse • Non sempre efficace controllo dell’efficacia e dell’appropriatezza

27. CD30+ CK8+ Metastasi CR ALCL

28. EMA

29. MPX Bcl-6 BOB-1 OCT-2 TCL1 Bcl-10 bcl-2 CD7 IgG4 CD1a CD2 CD3 CD4 CD5 CD8 CD10 CD20 CD21 Bcl-2 CD22 CD23 CD25 CD30 CD31 CD31 CD34 CD38 CD56 CD57 EG1/2 CD61 CD79a CD117 CD138 MUM1 DOG1 GATA3 HHV8 CYCL-D1 CYCL-D2 CDK6 B-CAT ZAP70 S100 VILLIN D2-40 CLAUD4 CK5 CK7 CK8/18 CK14 CK20 EMA CDX2 SPA-1 CC10 p16 p27 p53 p63 DN-p63 p80 p21 CALR IgD VIMENT FASCIN TENASC a-SMA CD34 FVIII DESM CALD Napsin Ki67 SKP2 OP18 EGFR HER-2 ER PR LAMBDA IgG LMP1 EBER CMV HHV8 JC GLICOF KAPPA IgM DBA44 CD123 TRAP

30. problemi • Non è una bacchetta magica • E’ un’arma potente • Può indurre in errore se mal utilizzata soluzioni • Competenza specifica – ESPERIENZA • Approfondimento - Cultura • Standardizzazione - Controllo di qualità

31. Two separate promoters give rise to the transactivating and DN classes of products Forme troncate Forme transattivanti Nat Rev Mol Cell Biol. 2000 Dec;1(3):199-207.

33. problemi • Non uniforme accettazione ed utilizzo tra i Patologi • Appassionati, tiepidi e detrattori • Non uniforme disponibilità territoriale di reagenti ed attrezzature • Eterogenea e non chiara inclusione nel nomenclatore tariffario

36. problemi • Non uniforme accettazione ed utilizzo • Non uniforme disponibilità • Non chiara inclusione nel nomenclatore tariffario soluzioni SIAPEC

37. Sistema Qualità – Appropriatezza – Efficacia - Prelievo Fissazione Inclusione Taglio ICH no Vetrino E&E Diagnosi Differenziale ICH SI

38. Competenze Responsabilità Sintesi Morfologia - Immunofenotipo Diagnosi Definitiva ICH si Programmazione marcatori ICH Ag Retrieval Immunostaining Step 1° Step 2° Step 3° Preparati ICH Valutazione dei Risultati Ambito pofessionale Ambito tecnico

39. Attività di CdQ identificazione di “indicatori”, correlati a tutti e tre i livelli, idonei per valutare e monitorare differenti parametri: correttezza dei processi pre-analitici ed analitici, idoneità dei protocolli tecnici Idoneità dei protocolli interpretativi Valutazione di Appropriatezza ed Efficacia idoneità dei marcatori disponibili (rispetto alle problematiche diagnostiche di maggior frequenza), aggiornamento dei marcatori disponibili,

40. PRODOTTO: Analisi Immunoistochimica • Possiamo individuare tre diversi tipi (o livelli) di “prodotto” Ognuno da sottoporre a dettagliata analisi per individuare le caratteristiche qualitative, le modalità di CdQ e gli indicatori

41. PRODOTTO: Analisi Immunocitochimica 3° Referto con sintesi diagnostica dei risultati nel contesto di una diagnosi differenziale • 2° • Descrizione della immunoreattività di un marcatore • in una popolazione cellulare in un campione di tessuto • - valutazione quantitativa • - valutazione qualitativa 1° Vetrino con colorazione “immunostaining”

42. J Clin Pathol 2000 Feb;53(2):125-30 Reliability of immunohistochemical demonstration of oestrogen receptors in routine practice: interlaboratory variance in the sensitivity of detection and evaluation of scoring systems. Rhodes A, Jasani B, Barnes DM, Bobrow LG, Miller KD. UK national external quality assessment scheme for immunocytochemistry (NEQAS-ICC). CdQ 2° livello CdQ 1° livello J Clin Pathol 1989 Oct;42(10):1096-100 Comparative quality assessment in immunocytochemistry: pilot study of CD15 staining in paraffin wax embedded tissue in Hodgkin's disease. Angel CA, Warford A, Day SJ, Lauder I. J Histochem Cytochem 2002 Nov;50(11):1425-34 A novel quality control slide for quantitative immunohistochemistry testing. Sompuram SR, Kodela V, Zhang K, et al. CytoLogix Corporation, Cambridge, Massachusetts.

43. Qualità di immunostaining Caratteristiche qualitative • Intensità “specifica” • Segnale/fondo • Artefatti • Specificità Area negativa artefattuale

44. Histopathology 1989 Dec;15(6):627-33 External quality assurance and assessment in immunocytochemistry. Reynolds GJ. A quality assurance scheme for immunocytochemistry was started in 1984. There are currently 140 participating laboratories, most of which have shown considerable improvement in their results since joining the scheme. In our experience the supplier of the primary antibody does not affect the quality of the results; the sensitivity of the method used and the experience of the staff carrying out the technique are the most important factors. Participation in a scheme such as this enables laboratories to have their results compared with others and to share problems.

45. - Standardisation - Quality control programs

46. PRODOTTO: Analisi Immunocitochimica • Vetrino con colorazione “immunostaining” • Valutazione e Descrizione della immunoreattività di un singolo marcatore immunofenotipico (o diversi marcatori) in una popolazione cellulare in un campione di tessuto

47. UK national external quality assessment scheme for immunocytochemistry (NEQAS-ICC).

48. Estrogen Receptor Status by Immunohistochemistry Is Superior to the Ligand-Binding Assay for Predicting Response to Adjuvant Endocrine Therapy in Breast Cancer.Jennet M. Harvey, Gary M. Clark, C. Kent Osborne, D. Craig Allred. J Clin Oncol 17: 1474-1481,1999

50. Score 3+ >30% intense membrane staining