2006届硕士学位论文答辩
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2006届硕士学位论文答辩. 研 究 背 景. COX - 2 的生物学性能. ◆ COX - 2 为前列腺素 ( PGs) 合成过程中一个主要限速酶,在大多数恶性肿瘤的表达升高。 ◆与肿瘤的发生、发展密切相关: ☆ 促进肿瘤血管的生成 VEGF ☆ 刺激肿瘤细胞的增殖 EGF ☆ 抑制肿瘤细胞的凋亡 Bcl-2 ☆ 促进肿瘤的浸润转移 MMP2. COX - 2 与鼻咽癌的研究.

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2006届硕士学位论文答辩

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Presentation Transcript


2006

2006届硕士学位论文答辩


2006

研 究 背 景


Cox 2

COX-2的生物学性能

◆COX-2为前列腺素(PGs)合成过程中一个主要限速酶,在大多数恶性肿瘤的表达升高。

◆与肿瘤的发生、发展密切相关:

☆促进肿瘤血管的生成 VEGF

☆刺激肿瘤细胞的增殖 EGF

☆抑制肿瘤细胞的凋亡 Bcl-2

☆促进肿瘤的浸润转移 MMP2


Cox 21

COX-2与鼻咽癌的研究

◆目前国内外研究的不多,Peng JP等发现N1-N3期患者的COX-2较N0期患者表达升高 ,提示COX-2与鼻咽癌颈部淋巴结转移有关 。

◆COX-2对CNE-2E细胞的粘附、运动和侵袭能力有何影响,与CD44V6、E-cadherin之间的表达调控关系如何,它们之间否有相关性 ,尚未见相关报道。


2006

研 究 目 的


2006

◆ COX-2在鼻咽癌淋巴道转移中有何重要作用,其对鼻咽癌细胞的粘附性和运动、侵袭能力有何影响?

◆在CNE-2E细胞中COX-2和CD44V6,E- cadherin的表达有无相关性,COX-2可否通过诱导CD44V6的表达升高和下调E- cadherin的表达来参与鼻咽癌细胞的淋巴道转移 ?


2006

技 术 路 线


2006

体外实验

临床病理

CNE-2Z

慢性炎

原发灶

转移灶

塞莱昔布(-)

塞莱昔布(+)

免疫组化

免疫细化

RT-PCR

细胞运动粘附实验

COX2 ECAD CD44V6

COX2 ECAD CD44V6

细胞运动、侵袭、同异粘附性

综合结果分析

COX2对细胞侵袭能力的影响


2006

结果和讨论临床病理部分


2006

COX-2在鼻咽慢性炎上皮的弱阳性表达(SP ×400)

COX-2在鼻咽癌癌旁上皮的阳性表达(SP ×400)

COX-2在鼻咽癌组织的阳性表达(SP ×400)

COX-2在淋巴结转移灶的强阳性表达(SP ×400)


2006

CD44v6在鼻咽慢性炎上皮的弱阳性表达(SP ×400)

CD44v6在鼻咽癌癌旁上皮的阳性表达(SP ×400)

CD44v6在鼻咽癌组织的阳性表达(SP ×400)

CD44v6在淋巴结转移灶的强阳性表达(SP ×400)


2006

E-cad在鼻咽慢性炎上皮的弱阳性表达(SP ×400)

E-cad在鼻咽癌癌旁上皮的阳性表达(SP ×400)

E-cad在鼻咽癌组织的阳性表达(SP ×400)

E-cad在淋巴结转移灶的强阳性表达(SP ×400)


2006

COX-2在鼻咽癌癌栓的表达 (SP ×400)

CD44v6在鼻咽癌癌栓的表达 (SP ×400)

E-cadherin在鼻咽癌癌栓的表达 (SP ×400)

鼻咽癌阴性对照 (SP ×400)


2006

结果

COX-2、 CD44v6 和E-cad在不同鼻咽病变表达

阳性率(%)

组别 例数 COX-2 CD44v6 E-cad

慢性炎 26 26.9 15.4 100

癌旁上皮 33 54.5 48.5 69.7

鼻咽癌 65 61.5 50.8 53.8

癌栓组 27 92.6 85.2 11.1

无癌栓组 38 39.5 26.3 92.1

淋巴结转移灶 30 83.3 86.7 33.3

R ×C表卡方检验,x2=28.556 , df=3 , P<0.0005


2006

COX-2 CD44v6

鼻咽癌组织中两者相关分析

鼻咽癌癌栓中两者相关分析

COX-2

CD44v6 - + ++

- 0 2 2

+ 1 7 2

++ 1 0 12

r = 0.489 , P<0.01

COX-2

CD44v6 - + ++

- 16 10 6

+ 7 4 5

++ 2 3 12

r = 0.403 , P<0.01

鼻咽癌淋巴结转移灶中两者相关分析

COX-2

CD44v6 - + ++

- 2 2 0

+ 2 4 6

++ 1 2 11

r = 0.496 , P<0.005


2006

COX-2 E-cadherin

鼻咽癌组织中两者相关分析

鼻咽癌癌栓中两者相关分析

COX-2

E-cad - + ++

- 0 7 13

+ 1 1 2

++ 1 1 1

COX-2

E-cad - + ++

- 9 5 13

+ 4 3 7

++ 12 9 3

r = - 0.260 , P<0.05

r = -0.432 , P<0.05

鼻咽癌淋巴结转移灶中两者相关分析

COX-2

E-cad - + ++

- 0 7 16

+ 2 0 1

++ 3 1 0

r =-0.647 , P<0.01


2006

讨论

◆ COX-2、CD44v6 、E-cad在鼻咽癌的恶性分化和淋巴道转移中起着重要作用。

◆ COX-2与CD44v6呈正相关,与、E-cad呈负相关,提示COX-2可能通过诱导CD44v6表达升高和下调E-cad的表达来促进鼻咽癌的

浸润和转移。


2006

结果和讨论实验病理部分


2006

结果

MTT塞莱昔布对CNE-2Z细胞活性影响

浓度 OD值

(μmol/L) 24h 48h

0 0.439±0.008 0.345±0.039

25 0.418±0.002 0.305±0.026

50 0.402±0.005 0.272±0.032

75 0.343±0.006 0.227±0.024

100 0.283±0.006 0.181±0.017

F检验:在同一时间范围内,各组间差异有极显著性

(P<0.001), F值分别为462.204,1328.306


2006

结果

不同塞莱昔布浓度组细胞克隆形成率%

浓度 细胞数 克隆形成数

(μmol/L) (个)(个)

0 300 256.0±7.4

25 300 206.5±11.6

50 300 177.0±6.5

75 300 119.8±12.3

100 300 38.0±10.7

F检验:各组间克隆形成率比较,差异有极显著性(P<0.001)

F值321.187。


2006

免疫细化结果

COX-2 CD44v6 E-cadherin

不同浓度组三者的表达情况

浓度 细胞数 强阳性数(个)

(µmol/ L ) (个) COX-2 CD44v6 E-cad

0 400 380±11 375±10 89±11

25 400 313±12 327±13 118±10

50 400 213±8 302±8 158±6

F检验:各组间COX-2、CD44v6、E-cadherin 的表达差异

有显著性(P<0.01),F值分别为298.578 ,107.845, 78.637。


2006

0µmol/L塞莱昔布组COX-2的强阳性表达(SP×400)

25µmol/L塞莱昔布组COX-2的强阳性表达(SP×400)

5 0µmol/L塞莱昔布组COX-2的强阳性表达(SP×400)


2006

0µmol/L塞莱昔布组CD44v6的强阳性表达(SP×200)

25µmol/L塞莱昔布组CD44v6的阳性表达(SP×200)

50µmol/L塞莱昔布组CD44v6的弱阳性表达(SP×200)


2006

0µmol/L塞莱昔布组E-cad的弱阳性表达(SP×200)

25µmol/L塞莱昔布组E-cad的阳性表达(SP×200)

5 0µmol/L塞莱昔布组E-cad的强阳性表达(SP×200)


2006

RT-PCR结果

不同浓度组各指标的mRNA表达水平

相对光密度值(OD)

组别(µmol/L) n COX-2 CD44v6 E-cad

0 3 1.3561±0.0192 1.0941±0.0257 0.5150±0.0083

25 3 0.8884±0.0198 0.8026±0.0234 0.8724±0.0122

50 3 0.8265±0.0169 0.6001±0.0152 1.3596±0.0115

经两独立样本T检验,用药组各指标mRNA与无药组比较,

均P<0.01。


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