ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΤΙΚΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 58

ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΤΙΚΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ GRAM(-) ΚΟΚΚΩΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ-ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ PowerPoint PPT Presentation


  • 146 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΤΙΚΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ GRAM(-) ΚΟΚΚΩΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ-ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ. Ομιλήτρια: Γεωργία Καγκάλου Ειδικευόμενη Ιατρικής Βιοπαθολογίας ΝΕΠΘ Συντονίστρια: Δρ. Αθηνά Κανσουζίδου. GRAM(-) ΚΟΚΚΟΙ ΜΕ ΙΑΤΡΙΚΟ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝ. Neisseria meningitidis Neisseria gonorrhoeae

Download Presentation

ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΤΙΚΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ GRAM(-) ΚΟΚΚΩΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ-ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Gram

ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΤΙΚΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ GRAM(-) ΚΟΚΚΩΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ-ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ

Ομιλήτρια: Γεωργία Καγκάλου

Ειδικευόμενη Ιατρικής Βιοπαθολογίας ΝΕΠΘ

Συντονίστρια: Δρ. Αθηνά Κανσουζίδου


Gram

  • GRAM(-) ΚΟΚΚΟΙ ΜΕ ΙΑΤΡΙΚΟ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝ

  • Neisseria meningitidis

  • Neisseria gonorrhoeae

  • Moraxella catarrhalis

  • Eikenella corrodens

  • Kingellakingae


Gram

N. meningitidis

  • Είναι απαιτητικός μικροοργανισμός

  • Αναπτύσσεται καλύτερα σε θρεπτικά υλικά εμπλουτισμένα με αίμα μετά από επώαση στους 35-37°C και ατμόσφαιρα 2-5% CO2για 18-24 ώρες

  • Απομονώνεται συνήθως από το ΕΝΥ ή από το αίμα

  • Η καλλιέργεια του ΕΝΥ στα θρεπτικά υλικά πρέπει να γίνεται αμέσως, διότι ο μηνιγγιτιδόκοκκος δεν επιβιώνει σε θερμοκρασία δωματίου


Gram

Μηνιγγιτιδόκοκκος-Θρεπτικά υλικά

Αιματούχο άγαρ

  • Ως βάση χρησιμοποιείται ένα καλό θρεπτικό άγαρ, όπως Columbia agar, Trypticase soy agar, Brucella agar, Brain heart infusion agar, Mueller-Hinton agar

  • Προστίθεται 5% απινιδωμένο αίμα προβάτου ή κονίκλου ή αλόγουή ανθρώπου


Gram

Μορφολογία αποικιών N.meningitidisστο αιματούχοάγαρ

Άχρωμες έως γκρι, χωρίς αιμόλυση, στρογγυλές, λείες, υγρές, γυαλιστερές έως περλέ και κυρτές με σαφώς καθορισμένα όρια


Gram

Σοκολατόχρωμο άγαρ

Προέρχεται από το αιματούχο άγαρ, που έχει θερμανθεί στους 80°C, πλούσιο σε αυξητικούς παράγοντες, όπως NAD και αιμίνη

Οι αποικίες στο σοκολατόχρωμο άγαρ είναι μεγάλες, άχρωμες έως γκρι και αδιαφανείς


Gram

Υλικό Levinthal

Προέρχεται από το αιματούχο άγαρ, το οποίο έχει θερμανθεί μέχρι βρασμού. Με το βρασμό το αίμα πήζει σε αδρές κροκίδες, τα πήγματα καθιζάνουν και το διαυγές υπερκείμενο διαχωρίζεται

Οι αποικίες στο Levinthal είναι γκριζωπές, γυαλιστερές και κατά την ανάπτυξή τουςδεν προκαλούν μεταβολή του θρεπτικού υλικού


Gram

Θρεπτικός ζωμός

  • Χρησιμοποιείται ένας πλούσιος θρεπτικός ζωμός, όπως ο θειογλυκολικός, στον οποίο προστίθεται γλυκόζη 1g/dl

  • Μετά από επώαση γίνεται ανακαλλιέργεια σε θρεπτικά υλικά

  • Ο ζωμός έχει διπλό σκοπό, εκτός από εμπλουτισμό, αραιώνει και την αντιμικροβιακή δράση του ENY


Gram

Αιμοκαλλιέργεια

  • Αιμοκαλλιέργεια πρέπει να γίνεται σε όλες τις περιπτώσεις μηνιγγίτιδας, για διαπίστωση μηνιγγιτιδοκοκαιμίας.

  • Ως θρεπτικό υλικό για τις αιμοκαλλιέργειες χρησιμοποιείται πλούσιος θρεπτικός ζωμός

    • Ζωμός σόγιας και τρυπτικάσης(Trypticase Soy Broth, TSB)

    • Ζωμός με τρυπτόνη (tryptose broth)

    • Θειογλυκολικός ζωμός (THIOL)

    • Ζωμός με εκχύλισμα εγκεφάλου και καρδιάς (Brain Heart Infusion Broth)


Gram

ΑΙΜΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ

  • Βιταμίνες,αιμίνη, κυστίνη, νικοτιναμίδη (NAD) ευνοούν την ανάπτυξη μικροβίων

  • SPS(Sodium Polyanethol Sulfonate ) προστίθεται για ενίσχυση των ζωμών και έχει τις εξής ιδιότητες:

    • Aναστέλλει την πήξη του αίματος μέσα στο ζωμό

    • Aναστέλλει τη φαγοκυτταρική δράση του αίματος

    • Aδρανοποιεί το συμπλήρωμα

    • Mειονέκτημα: δυνατόν να αναστείλλει την ανάπτυξη ορισμένων στελεχών ναϊσσερειών, η δράση αυτή εξουτερώνεται με την προσθήκη μικρής ποσότητας ζελατίνης


Gram

Αιμοκαλλιέργεια Σύστημα Bactec

  • Θρεπτικό υλικό: ζωμός σόγιας-καζείνης, με εκχύλισμα ζύμης και προσθήκη αμινοξέων και βιταμινών

  • Ανάγνωση αποτελέσματος: μετρά το ποσό του CO2, που εκλύεται από το μεταβολισμό του μικροβίου με ειδικό μετρητή βαθμολογημένο, μετεχνολογία LED.

Θετική αιμοκαλλιέργεια: για την απομόνωση του μικροβίου γίνεται εμβολιασμός σε κατάλληλα θρεπτικά υλικά


Gram

Καλλιέργεια Ρινοφαρυγγικού επιχρίσματος

  • Για την απομόνωση του μηνιγγιτιδοκόκκου σε μηνιγγίτιδα, ιδιαίτερα όταν χορηγούνται αντιβιοτικά και η καλλιέργεια του ΕΝΥ και του αίματος είναι αρνητική

  • Για την διαπίστωση μικροβιοφορίας

  • Εμβολιάζεται σε αιματούχο, σοκολατόχρωμο και Levinthalάγαρ


Gram

Υλικό μεταφοράς και συντήρησης

(Stuart ήAmies)

  • Οι ναισσέρειες διατηρούνται για πάνω από 3 ημέρες

  • Η έλλειψη πηγής αζώτου στο υλικό αποκλείει συνήθως την πιθανότητα πολλαπλασιασμού

  • Αντιθέτως η άφθονη ποσότητα υδατάνθρακος εξασφαλίζει επαρκή προμήθεια ενέργειας και παρατείνει την επιβίωση των μικροβίων

  • Η σύνθεση του υλικού εξασφαλίζει σταθερό Ph 7,4+/-0,2.


Gram

ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ ΜΗΝΙΓΓΙΤΙΔΟΚΟΚΚΟΥ

  • Μετά την ανάπτυξη στα θρεπτικά υλικά και τη χαρακτηριστική εμφάνιση των αποικιών

  • Γίνεται επιβεβαίωση ότι πρόκειται για μηνιγγιτιδόκοκκο

  • Παρασκεύασμα από την ανάπτυξη, χρώση Gram, μικροσκοπική εξέταση

  • Έλεγχος διαφόρων βιοχημικών ιδιοτήτων του μικροβίου

Απαιτείται επίπεδο βιοασφάλειας 2 (BSL-2)


Gram

ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ

Για τη διαπίστωση της μορφολογίας του μικροβίου, από τις αποικίες γίνονται παρασκευάσματα με φυσιολογικό ορό επάνω σε αντικειμενοφόρο πλάκα, τα οποία βάφονται κατά Gram και εξετάζονται στο μικροσκόπιο

Ο μηνιγγιτιδόκοκκος εμφανίζεται ως Gram(-) διπλόκοκκος


Gram

Άμεσο παρασκεύασμα - Χρώση Gram

  • Χαρακτηριστική μορφολογία Gram(-) διπλοκόκκων σε σχήμα καφέ-φασολιού, ενδοκυτταρίως στα πολυμορφοπύρηνα ή εξωκυτταρίως

  • Είναι δυνατόν να διακρίνεται και το έλυτρο


Gram

ΑΛΓΟΡΙΘΜΟΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΗΣ N.meningitidis

ΔΕΙΓΜΑ

ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ ΣΕ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ

ΑΠΟΙΚΙΕΣ (ΜΟΡΦΟΛΟΓΙΑ)

GRAM ΑΠΟ ΤΗΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ

ΒΙΟΧΗΜΙΚΕΣ ΔΟΚΙΜΑΣΙΕΣ

ΚΑΤΑΛΑΣΗ(+)

ΟΞΕΙΔΑΣΗ(+) ΟΞΕΙΔΑΣΗ(-) ΌΧΙ N.meningitidis

ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΔΙΑΣΠΑΣΗΣΣΑΚΧΑΡΩΝ (-) ΟΧΙN.meningitidis

ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΟΞΕΩΣ ΣΕ ΓΛΥΚΟΖΗ, ΜΑΛΤΟΖΗ ΌΧΙ ΣΕ ΣΟΥΚΡΟΖΗ, ΛΑΚΤΟΖΗ

ΟΡΟΛΟΓΙΚΗ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΜΕ ΑΝΤΙΟΡΟΥΣ ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ,

ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ΣΤΕΛΕΧΩΝ

ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ


Gram

Δοκιμασίες ταυτοποίησης Δοκιμασία Καταλάσης

Καταλάση: ένζυμο που διασπά το υπεροξείδιο του υδρογόνου σε νερό και μοριακό οξυγόνο, που εκλύεται υπό μορφή φυσαλίδων

Αντιδραστήριο: πρόσφατο υδατικό διάλυμα (έως 5 ημερών), υπεροξειδίου του υδρογόνου (hydrogen peroxide 3%)


Gram

Εκτέλεση δοκιμασίας Καταλάσης

  • Μια αποικία του μικροβίου ανακατεύεται σε σταγόνα του αντιδραστηρίου επάνω σε αντικειμενοφόρο πλάκα

  • Παρατηρούμε για εμφάνιση φυσαλίδων

  • Πιθανότητα ψευδώς θετικής δοκιμασίας, όταν το υλικό στο οποίο αναπτύχθηκε το μικρόβιο είναι το αιματούχοάγαρ


Gram

Δοκιμασία οξειδάσης

Το αντιδραστήριο της οξειδάσης(tetramethyl-o- phenylenediaminedihydrochloride)μετατρέπεται σε μωβ από τους μικροοργανισμούς που περιέχουν το κυτόχρωμα C της οξειδάσης ως μέρος της αναπνευστικής αλυσίδας τους.

  • Τη δοκιμασία δίνουν θετική και άλλα μέλη του γένους Neisseria


Gram

Αντιδραστήριο οξειδάσης

  • Για την παρασκευή του αντιδραστηρίου διαλύονται 0,1g σε 10 ml νερό αποσταγμένο

  • Το διάλυμα πρέπει να παρασκευάζεται καθημερινά και αυτό που δεν χρησιμοποιείται απορρίπτεται

  • Εναλλακτικά μπορεί να διανέμεται σε κλάσματα του 1 ml και να αποθηκεύεται σε κατάψυξη στους -20°C


Gram

Εκτέλεση δοκιμασίας

  • Σε μία μη πορώδη επιφάνεια (τρυβλίοPetri ήγυάλινη πλάκα) διαβρέχουμε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού, με σταγόνες αντιδραστηρίου οξειδάσης

  • Μια αποικία από το αιματούχο άγαρ τρίβεται επάνω στο ποτισμένο με αντιδραστήριο διηθητικό χαρτί

  • Αλλαγή του χρώματος σε ερυθρό-μωβ σε 10sec

  • Με ενστάλαξη του αντιδραστηρίου επάνω σε αποικίες του μικροβίου, οι οποίες παίρνουν ερυθρό-μπλε-μωβ χρώμα (το μικρόβιο δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για ανακαλλιέργεια)


Gram

Δοκιμασία διάσπασης σακχάρων

  • Χρησιμοποιούνται τα σάκχαρα γλυκόζη, μαλτόζη, λακτόζη, σακχαρόζη

  • Τα σάκχαρα προστίθενται σε σωληνάρια που περιέχουν υλικό-βάση σε συγκέντρωση 1%

  • Η βάση είναι το υλικό CTA


Gram

Υλικό CTA(Cystinetrypticase agar)

  • Περιέχει κυστίνη, καζείνη, άγαρ, χλωριούχο νάτριο και θειώδες νάτριο

  • Στο υλικό προστίθεται ως δείκτης το ερυθρό της φαινόλης (κίτρινο χρώμα με την παρουσία οξέος σε Ph 6,8 ή χαμηλότερο)

  • Το υλικό διατηρείται στο ψυγείο στους 4°C


Gram

Εκτέλεση δοκιμασίας

  • Ετοιμάζονται σωληνάρια (με 2ml υλικό) για τα τέσσερα σάκχαρα

  • Τα σάκχαρα προστίθενται σε αναλογία 1% ή χρησιμοποιούνται χάρτινοι δίσκοι χωριστά για κάθε σάκχαρο που βυθίζονται στο υλικό

  • 3-5 αποικίες από το αιματούχο άγαρεμβολιάζονται στο κάθε σωληνάριο

  • Επωάζονται τα σωληνάρια στους 35-37°C χωρίς CO2


Gram

Δοκιμασία σακχάρων

Θετική δοκιμασία: ανάπτυξη θολερότητας και κίτρινου χρώματος στο ανώτερο τμήμα του υλικού, η οποία υποδεικνύει ανάπτυξη των βακτηρίων και παραγωγή οξέος

  • Aρνητικά αποτελέσματα δεν πρέπει να ερμηνεύονται πριν από 72 ώρες επώασης


Gram

ΠΙΝΑΚΑΣΔΙΑΣΠΑΣΗΣΣΑΚΧΑΡΩΝ

N.lactamica


Gram

Ορολογική ταυτοποίηση μηνιγγιτιδοκόκκου

  • Με βάση τον πολυσακχαρίτη του ελύτρου οι μηνιγγιτιδόκοκκοι ταξινομούνται σε 13 οροομάδες: A, B, C, D, H, I, K, L, X, Y,Z, W135 και 29E

  • Ένα μεγάλο ποσοστό στελεχών που ανακτώνται από ρινοφαρυγγικούς μικροβιοφορείς είναι δυνατό να μην εκφράζουν ανιχνεύσιμο αντιγόνο του πολυσακχαριδικού ελύτρου, δηλαδή να μην είναι δυνατή η κατάταξή τους σε οροομάδες


Gram

Ορολογική ταυτοποίηση μηνιγγιτιδοκόκκου

  • Οι μηνιγγιτιδόκοκκοι είναι δυνατόν να υποδιαιρεθούν:

  • Σε 20 οροτύπους με βάση τα αντιγόνα των τάξης 2 και 3 OMP (PorB)

  • Σε 10 υπο-οροτύπουςμε βάση τα αντιγόνα των τάξης 1 OMP (PorA)

  • Σε 13 ανοσοτύπους με βάση τη δομή του λιποολιγοσακχαρίτη (LOS)


Gram

  • Ταυτοποίηση με αντιορούς

  • Γίνεται εναιώρημα του μηνιγγιτιδοκόκκου σε Φ.Ο

  • Προστίθεται μία σταγόνα αντιορού

  • Γίνεται καλή ανάμιξη και ανακίνηση για 2 λεπτά

  • Παρατήρηση για συγκόλληση μόνο σε έναν αντιορό, ο οποίος καθορίζει την οροομάδα

  • Ψευδείς συγκολλήσεις:

  • Παρατηρούνται σε περισσότερους αντιορούς

  • Επανάληψη μετά ανακαλλιέργεια σε MH άγαρ


Gram

N.gonorrhoea

Για την απομόνωση του γονοκόκκου τα δείγματα εμβολιάζονται στα κατάλληλα θρεπτικά υλικά και επωάζονται σε θερμοκρασία 35-36,5οC, σε ατμόσφαιρα CO2 5-10%


Gram

N.gonorrhoeae - Θρεπτικά υλικά

ΥΛΙΚΟ THAYER-MARTIN

Είναι ένα πολύ εμπλουτισμένο θρεπτικό υλικό στο οποίο έχουν προστεθεί αντιβιοτικά, για την αναστολή της ανάπτυξης άλλων σαπροφυτικών μικροβίωνπου υπάρχουνστα δείγματα από την ουρήθρα, τον τράχηλο της μήτρας, τον πρωκτό και το φάρυγγα.


Gram

Σύνθεση του υλικού THAYER-MARTIN

  • Ως βάση χρησιμοποιείται το GC Agar στο οποίο προστίθεται βόειος αιμοσφαιρίνη, IsovitaleX Enrichmentκαι VCNinhibitor

  • Η αιμοσφαιρίνη παρέχει τον παράγοντα Χ (αιμίνη)

  • Το υλικό IsovitaleXπαρέχει τον παράγοντα V (NAD), βιταμίνεςκαι άλλους παράγοντες που ευνοούν την ανάπτυξη των ναϊσσερειών

  • Το VCNinhibitor περιέχει τα αντιβιοτικά:

  • βανκομυκίνη (αναστέλλει τα Gram(+) βακτηρίδια),

  • κολιστίνη (αναστέλλει τα Gram (-) βακτηρίδια),

  • νυστατίνη ( αναστέλλει τους μύκητες).


Gram

Μορφολογία αποικιών στο THAYER-MARTIN

Οι αποικίες του γονοκόκκου στο Thayer-Martin είναι μεγάλες, στρογγυλές, λείες, κυρτές, άχρωμες έως γκρι, αδιαφανείς και η ανάπτυξή τους δεν προκαλεί αποχρωματισμό του υλικού


Gram

MARTIN-LEWIS AGAR

  • Το υλικό, όπως το Thayer-Martin, χρησιμοποιείται για την απομόνωση των ναϊσσερειών από δείγματα με χλωρίδα βακτηρίων και μυκήτων

  • Ως βάση χρησιμοποιείται το σοκολατόχρωμο άγαρ, στο οποίο προστίθενται:

  • IsovitaleX

  • VCA Inhibitor (βανκομυκίνη, κολιστίνη, ανισομυκίνη) και επιπλέον τριμεθοπρίμη

  • Καζεΐνη, πεπτόνη, άμυλο καλαμποκιού


Gram

NYC Medium

(New York City medium)

  • Υλικό διαφανές και πολύ εκλεκτικό για την απομόνωση του γονοκόκκου από δείγματα με χλωρίδα

  • Ως βάση χρησιμοποιείται το GC agar, στο οποίο προστίθενται:

    • Αίμα αλόγου

    • Το υλικό Yeast autolysate growth supplement, το οποίο παρέχει κλάσματα ζυμοειδών μυκήτων, με γλυκόζη και διττανθρακικό νάτριο

    • Το υλικό VCAT, που περιέχει βανκομυκίνη, κολιστίνη, αμφοτερικίνη Β και τριμεθοπρίμη


Gram

Χρώση Gram

Σε παρασκευάσματα από καλλιέργεια η μορφολογία δεν είναι τυπική, ανευρίσκονται Gram(-) καφεοειδείς κόκκοι, σε ζεύγη, μικρές ομάδες ή και μεμονωμένοι

Άμεσο παρασκεύασμα από το πύο: πιο χαρακτηριστική μορφολογία (ενδοκυτταρίως στα πολυμορφοπύρηνα και εξωκυτταρίως)


Gram

ΑΛΓΟΡΙΘΜΟΣ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗΣ ΤΗΣ N.gonorrhoeae

ΔΕΙΓΜΑ

ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ ΣΕ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ

36οC, CO2

ΜΟΡΦΟΛΟΓΙΑ ΑΠΟΙΚΙΩΝ

GRAM ΑΠΟ ΤΙΣ ΑΠΟΙΚΙΕΣ

GRAM(-)

ΔΙΠΛΟΚΟΚΚΟΙ ΑΛΛΗ ΜΟΡΦΟΛΟΓΙΑ

ΟΞΕΙΔΑΣΗ(+),ΚΑΤΑΛΑΣΗ(+)

ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΣΑΚΧΑΡΩΝ

ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΣ

ΘΕΤΙΚΟ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑ ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ

ΟΞΕΙΔΩΤΙΚΗ ΔΙΑΣΠΑΣΗ ΓΛΥΚΟΖΗΣ


Gram

Ταυτοποίηση με αντιορό

  • Η δοκιμασία γίνεται από αποικίες γονοκόκκου

  • Το αντιδραστήριοπεριέχει μονοκλωνικό αντίσωμα, το οποίο ανιχνεύει την Porπρωτεΐνη της εξωτερικής μεμβράνης


Gram

Δοκιμασία ανοσοφθορισμού

  • Το μονοκλωνικό αντίσωμα που είναι προσροφημένο στη μικροπλάκα είναι σημασμένο με ισοθειοκυανική φλουορεσκείνη και αντιδρά ειδικά με τη N.gonorrhoeae(ειδικότητα 100%, ευαισθησία 99%), καθώς δεσμεύεται με τις πρωτεΐνες πορίνες της εξωτερικής μεμβράνης

Στο μικροσκόπιο φθορισμού η N.gonorrhoeae έχει εικόνα φθοριζόντων διπλοκόκκων με σχήμα νεφρού, σε χρώμα πράσινου μήλου


Gram

ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ΣΤΕΛΕΧΩΝ

  • Τα στελέχη γονοκόκκου και μηνιγγιτιδοκόκκου διατηρούνται:

  • Σε ζωμό BHIB με 20% γλυκερόλη

  • Σε απινιδωμένο αίμα προβάτου και άπαχο γάλα 10% με προσθήκη γλυκερόλης 15%

  • Η διατήρηση γίνεται σε καταψύκτη στους -80°C ή σε υγρό άζωτο στους -196°C, για μακρά χρονικά διαστήματα


Gram

Moraxella catarrhalis

  • Είναι αερόβια ή προαιρετικά αναερόβια. Οι αποικίες στο αιματούχο άγαρ, μετά 24ωρη επώαση είναι μικρές, χρώματος γκρι-λευκό, αδιαφανείς, λείες και στεγνές.

  • Οι αποικίες στο σοκολατόχρωμο άγαρ έχουν χρώμα ροζ-καφέ. Αναπτύσσεται επίσης στα υλικά Thayer Martin, Martin Lewis και New York City.


Gram

Moraxella catarrhalis

  • Μικροσκοπική εξέταση:Gram(-) διπλόκοκκος

  • Kαταλάση θετική, οξειδάση θετική

  • Aνάγει τα νιτρικά άλατα και παράγει DΝάση

  • Είναι μη σακχαρολυτική

  • Σε αντίθεση με τις ναϊσσέρειες δίνει θετική την δοκιμασία υδρόλυσης της τριβουτυρίνης, διότι παράγει το ένζυμο βουτυρική εστεράση


Gram

Δοκιμασία αναγωγής νιτρικών αλάτων

  • Σε θρεπτικό ζωμό, ο οποίος περιέχει νιτρικό κάλιο προστίθενται 2-3 αποικίες

  • Επώαση και προσθήκη αντιδραστηρίων

  • Τα αντιδραστήρια αντιδρούν με τα νιτρώδη άλατα, για σχηματισμό ερυθρής ένωσης (p-σουλφο-βενζόλιο-αζωαναφθυλαμίνη), η παρουσία της οποίας υποδεικνύει των αναγωγή των νιτρικών αλάτων σε νιτρώδη


Gram

Παραγωγή DNάσης

  • Η DNάση είναι ένζυμο, που διασπά το DNA

  • Η δράση της DNάσης μπορεί να ανιχνευτεί με εμβολιασμό σε DNάσηάγαρ

    • Μετά από 24ωρη επώαση η υδρόλυση του DNA ανιχνεύεται από την αλλαγή στο χρώμα του υλικού από μπλε σε ροζ, γύρω και κάτω από την περιοχή του ενοφθαλμισμού

Οι ναϊσσέρειες σε αντίθεση με τη Moraxella δίνουν την αντίδραση αρνητική


Gram

Eikenella corrodens

ΧΡΩΣΗ GRAM

  • Η Eikenellacorrodens και η Kingellakingaeαποτελούν συγγενή είδη των ναϊσσερειών

  • Αποικίζουν το στοματοφάρυγγα του ανθρώπου και είναι ευκαιριακά παθογόνα

Η E.corrodensείναι καταλάση αρνητική, οξειδάση θετική και ανάγει τα νιτρικά άλατα


Gram

Kαλλιεργητικέςιδιότητες

Eikenellacorrodens

Αναπτύσσεται σε αιματούχο και σοκολατόχρωμοάγαρ

Oι αποικίες μετά 48ωρη επώαση στους 37οC σε CO2 5-7% είναι μικρές, διαμέτρου 0,5-2 mm, έχουν χρώμα γκριζωπό και έχουν χαρακτηριστικό άρωμα χλωρίνης

Πολλά στελέχη έχουν χαρακτηριστική εμφάνιση σκασίματος ή διάβρωσης της επιφάνειας του υλικού.


Gram

Kingellakingae

  • Είναικαταλάση(-), οξειδάση (+)

  • Προκαλεί διάσπαση της γλυκόζης και της μαλτόζης με παραγωγή οξέος

Στο αιματούχο άγαρ προκαλεί αιμόλυση

Οι αποικίες μετά 48ωρη επώαση στο αιματούχοάγαρ στους 35-37°C σε CO2 5-10% είναι μικρές, λείες, με σαφή άκρα και προκαλούν σκάσιμο της επιφάνειας του υλικού


Gram

ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑ

  • Η αντιμετώπιση της λοίμωξης επιτυγχάνεται μετη χορήγηση αντιβιοτικού

  • Για τη δοκιμασία ευαισθησίας στα αντιβιοτικά απαιτητικών μικροοργανισμών, όπως οι ναϊσσέρειες χρησιμοποιείται το Mueller-Hinton agar

  • Στο υλικό μπορεί να προστεθεί 5% αίμα προβάτου ή αλόγου


Gram

  • Μέθοδος των δίσκων κατά Kirby-Bauer Τεχνική

  • Παρασκευάζεται το εναιώρημα του μικροβίου

  • Το άγαρενοφθαλμίζεται 3 φορές προς όλες τις κατευθύνσεις, ώστε να εξασφαλιστεί η ομοιόμορφη κατανομή του εναιωρήματος


Gram

Τεχνική της μεθόδου Kirby Bauer

Ως αποτέλεσμα ενός αντιβιογράμματος ο μικροοργανισμός χαρακτηρίζεται ευαίσθητος, ανθεκτικός ή ενδιάμεσης ευαισθησίας

  • Με αποστειρωμένη λαβίδα ή με την ειδική συσκευή τοποθετούμε τους δίσκους των αντιβιοτικών

  • Η μέτρηση της ζώνης ευαισθησίας γίνεται με τη χρήση χάρακα


Gram

Αντιβιόγραμμα σε αυτόματο μηχάνημα

  • Μικρομέθοδος αραιώσεων σε ζωμό

  • Μετρά MIC (Minimum Inhibitory Concentration)

  • Πλάκες μικροτιτλοποίησης με υποδιπλάσιες αραιώσεις αντιβιοτικών

  • Ανάγνωση του αποτελέσματος με αυτοματοποιημένα συστήματα (VITEC)

MIC είναι η ελάχιστη συγκέντρωση του αντιβιοτικού, που αναστέλλει την ανάπτυξη του μικροβίου

  • Άλλες μέθοδοι υπολογισμού MΙC:

  • Μέθοδος αραίωσης αντιβιοτικών σε άγαρ

  • Μέθοδος κλιμακωτής διάχυσης(E-test)


Gram

ΕΚΤΙΜΗΣΗ ΑΝΤΙΒΙΟΓΡΑΜΜΑΤΟΣ

  • Ο οργανισμός CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute) στις ΗΠΑ

  • Η επιστημονική επιτροπή EUCAST(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) έχει συσταθεί από την Ευρωπαϊκή Εταιρεία Κλινικής Μικροβιολογίας και Λοιμώξεων (ESCMID)


Gram

ΕΠΙΛΟΓΗ ΑΝΤΙΒΙΟΤΙΚΩΝ

  • Τα αντιβιοτικά που επιλέγονται για το Μηνιγγιτιδόκοκκο περιλαμβάνουν απαραίτητα τις κατηγορίες των πενικιλλινών και των κεφαλοσπορινών

  • Για το Γονόκοκκο επιλέγονται η πενικιλλίνη (αποτελεί το αντιβιοτικό εκλογής) και οι κεφαλοσπορίνες


Gram

ΕΠΙΛΟΓΗ ΑΝΤΙΒΙΟΤΙΚΩΝ

  • Πολλά στελέχη Moraxella παράγουν β-λακταμάση. Το EUCAST προτείνει αντιβιοτικά από τις κατηγορίες των πενικιλινών, των κεφαλοσπορινών, των αμινογλυκοσιδών και άλλα αντιβιοτικά

  • Η Kingella είναι ευαίσθητη στα αντιβιοτικά πενικιλλίνη, αμπικιλλίνη και ερυθρομυκίνη

  • Η Eikenella είναι ανθεκτική στη κλινταμυκίνη και ευαίσθητη στην αμπικιλλίνη και 3ης γενεάς κεφαλοσπορίνες


Gram

Το CLSI προτείνει 12 αντιβιοτικά για το Μηνιγγιτιδόκοκκο και 23 για το Γονόκοκκο, για τα οποία δίνει διάμετρο της ζώνης αναστολής και MIC


Gram

Το EUCAST προτείνει 18 αντιβιοτικά για το Μηνιγγιτιδόκοκκο και 27 για τον Γονόκοκκο, για τα οποία δίνει MIC


Gram

Σας ευχαριστώ πολύ


  • Login