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FASES PARA CROMATOGRAFÍA. Licda. Carol villatoro de santisteban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC. GENERALIDADES. Fase estacionaria (FS) Fase móvil (FM) Sistema cromatográfico

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Fases para cromatograf a

FASES PARA CROMATOGRAFÍA

Licda. Carol villatoro de santisteban

Análisis Instrumental

Departamento de Fisicoquímica

Escuela de Química USAC


Generalidades
GENERALIDADES

Fase estacionaria (FS)

Fase móvil (FM)

Sistema cromatográfico

Elección según propósito del análisis, características de la muestra, características de los analitos

Interacción FS-analito

Polaridad



Fases estacionarias1
FASES ESTACIONARIAS

  • Factor clave para la SEPARACIÓN

  • Características de la FS

    • Identidad química

    • Estructura física: (Partículas de soporte, configuración en el espacio, tipos de interacción)

    • Forma de contacto entre fases (plano, columnas)

    • Configuración del soporte (partículas de relleno, pared del capilar)


Adsorci n
ADSORCIÓN

  • Fase estacionaria sólida y polar

    • Carbonato de calcio

    • Sílica

    • Alúmina

Na2SiO3 +H2O + 2HCl = Si(OH)4 + 2NaCl


Reparto
REPARTO

Fase estacionaria líquida

Partículas de soporte: sílica, vidrio+sílica, polímeros

FS unida físicamente o químicamente (reparto o fase enlazada)

Película superficial de fase estacionaria sobre partícula de soporte


Fase enlazada
FASE ENLAZADA

Unión covalente soporte-FS

Sílica – Siloxanos

Equivalente a película muy fina

Características de la partícula determinantes para grado de sililación


Afinidad
AFINIDAD

Aplicación bioquímica

Interacción antigeno-anticuerpo

Alta selectividad


Intercambio i nico
INTERCAMBIO IÓNICO

  • Analitos con carga eléctrica

  • FS (enlazada) cargada

    • Intercambiadores aniónicos (FS +, analito -)

    • Intercambiadores catiónicos (FS -, analito +)

  • FM con contraión

  • Competencia (intercambio) analito-contraión


Exclusi n o permeaci n en gel
EXCLUSIÓN O PERMEACIÓN EN GEL

Interacción FS-analito puramente física

Tamaño y forma --- Peso molecular y conformación

Poros o canales – recorridos distintos



Fases m viles1
FASES MÓVILES

  • Factor clave para la ELUCIÓN

  • Características de la FM

    • Composición química (polaridad)

    • Estabilidad (estado físico, composición, interacción con otras sustancias, interferencias instrumentales)


Polaridad
Polaridad

Armonización en las polaridades analito-FS-FM

Similitud FM-analito – tiempo de retención



Mezclas
Mezclas

Elución isocrática

Uno o varios solventes

Composición constante

Elución en gradiente

Dos o más solventes

Composición varía en función del tiempo

Índice de polaridad de la mezcla: sumatoria de índices individuales por fracción en volumen



Interacciones1
Interacciones

C. de adsorción:

Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS

Fase Normal

Gradiente: aumento de polaridad


Interacciones2
Interacciones

C. de reparto (incluyendo fase enlazada):

Analito se transfiere entre FM y FS en la interfase

Fase Normal

Gradiente: aumento de polaridad

Fase Reversa

Gradiente: disminución de polaridad

Polaridad de la FM influye en conformación molecular de la FS


Interacciones3
Interacciones

C. de exclusión y c. de gases:

FM sólo transporta al analito libre.

Poca interacción FM con FS

Poca interacción FM con analito


Interacciones4
Interacciones

C. de afinidad

Elución en gradiente

Fase de retención: FM sólo transporta al analito

Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS

FM compite con FS por enlazarse con el analito

FM modifica o se une a FS, evitando la unión FS-analito.


Interacciones5
Interacciones

C. de intercambio iónico

Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS

Elución en gradiente

Fase de acondicionamiento: FM se une a FS (atracción electrostática)

Fase de retención: FM y analito compiten

Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS

FM se une a FS

FM modifica al analito evitando la unión FS-analito


FIN

Gracias por su atención


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