1 / 63

A szabályozó fehérjék szabályozása

A szabályozó fehérjék szabályozása. A Rac kis G fehérje szabályozása. GAP Rac· GTP Rac· GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP. GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin nukleotid kicserélő faktor GDI = Guanin nukleotid disszociáció inhibitor.

elias
Download Presentation

A szabályozó fehérjék szabályozása

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. A szabályozó fehérjék szabályozása

  2. A Rac kis G fehérje szabályozása GAP Rac·GTP Rac·GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin nukleotid kicserélő faktor GDI = Guanin nukleotid disszociáció inhibitor

  3. A kis GTPázok alcsaládjai és szabályozó fehérjéi RAS RHO RAB ARF RAN H-Ras Rho-A Rab1- ARF1- Ran K-Ras Rho-B Rab32 ARF7 N-Ras Rho-C Rap1 Rac1 Rap2 Rac2 Ral Cdc42 GAPok 25 70 52 27 1 GEFek 50-60 Rho-GDI Rab-GDI

  4. Mi újság a GEF-ek körül?

  5. A DH-GEFek domén szerkezete (Zheng, 2001)

  6. GEF-ek GTPázok Target fehérjék

  7. GEF-ek GTPázok Target fehérjék

  8. GEF-ek GTPázok Target fehérjék

  9. GEF-ek GTPázok Target fehérjék

  10. GEF-ek GTPázok Target fehérjék PROBLÉMA: Hol a specificitás?

  11. Specificitás pedig van: Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226

  12. GEF-ek GTPázok Target fehérjék MEGOLDÁS: fehérje komplexek

  13. 1. példa RGS PH/DH p115RhoGEF

  14. RGS PH/DH p115RhoGEF Rho

  15. RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje Jaffe A.B. et al. MCB 24. 1736. 2004; Cur. Biol. 15. 405. 2005;

  16. RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz

  17. RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P

  18. RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MKK7 MLK2 kináz Jun → Jun-P

  19. Gα12 RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MKK7 MLK2 kináz Jun → Jun-P

  20. LPA-R Plazmamembrán Gα12 RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MKK7 MLK2 kináz Jun → Jun-P

  21. LPA-R Plazmamembrán Gα12 RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MKK7 MLK2 kináz Jun → Jun-P

  22. LPA-R Plazmamembrán Gα12 RGS PH/DH p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MKK7 MLK2 kináz Jun → Jun-P Kísérleti tény: CNK1 hiány: LPA-indukált jun-P hiányzik, de stressz-rost képzés változatlan CNK1 túltermelés: (GEF/Rho63 indukált) jun-P ↑ stressz-rost képzés ↓ (Rho megkötése)

  23. 2. példa Tiam-1 Rac Conolly BA et al., MCB 25. 4602. 2005.

  24. 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 IRSp53 siderophilin

  25. 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 IRSp53 siderophilin WAVE 2 Aktin citoszkeleton p38 MAP kináz p70 S6 kináz

  26. 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 IRSp53 siderophilin WAVE2 Aktin citoszkeleton p38 MAP kináz p70 S6 kináz

  27. Cdc42 IRSp53 Mena filopódium képzés

  28. DH/PH Tiam-1 Rac Cdc42 IRSp53

  29. DH/PH Tiam-1 Rac Cdc42 IRSp53

  30. DH/PH Tiam-1 Rac IRSp53 WAVE2 lamellipodium képzés

  31. PDGF-R Ras DH/PH Tiam-1 Rac IRSp53 WAVE2 lamellipodium képzés

  32. PDGF-R Ras DH/PH Tiam-1 Rac IRSp53 WAVE2 Kísérleti tény: IRSp53 hiányban PDGF-R indukált lamellipódium képzés ↓ lamellipodium képzés

  33. 3. példa Cool-2/α-Pix (Cloned out of library 2) (PAK-interactive exchange factor) Feng et al., EMBO J. 23. 3492. 2004; Baird et al., Curr. Biol. 15. 1. 2005

  34. Cool-2/α-Pix dimér mint Rac-GEF Cdc42 → Rac aktiválás mechanizmusa

  35. Cool-2/α-Pix monomer mint Cdc42-GEF Gβγ + PAK kötődés

  36. Cool-2/α-Pix monomer mint Cdc42-GEF Gβγ + PAK kötődés GEF-smg-target komplex

  37. Gondolatok: • G-fehérje kaszkádok • Gα12 → p115RhoGEF → Rho • Ras → Tiam-1 → Rac • Cdc42 → Cool-2/α-Pix → Rac 2. smg kezd „beágyazódni” (up-stream, down-stream kapcsolatok)

  38. GAPok

  39. Rho/Rac GAPok doménszerkezete TiCB 13. 13-22. 2001

  40. Lipidek részvétele GAP-ok szabályozásában Chimaerin Rac PMA, DAG, stb. ↑ / ↓ ASAP1 ARF1, ARF5 PIP2 ↑ GIT ARF6 PIP3 ↑ ARAP1 ARF1, ARF5 PIP3 ↑ Rho = ARAP3 ARF6 PIP3 ↑ Brown et al. MCB 18. 7038. 1998; Vitale et al. JBC 275. 13910. 2000; Miura et al. Mol. Cell 9. 109. 2002; Krugmann et al. Mol. Cell 9. 95. 2002

  41. A PL szerkezet hatása az ARF-GAP1 aktivitására Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848.

  42. A vezikulaméret hatása az ArfGAP1 aktivitására Bigay J. et al. Nature 2003. 426. 563.

  43. Az ARF-GAP1 szabályozásának modellje Bigay et al. Nature 2003. 426. 563

  44. Az ARFGAP és ARFGEF lipid érzékenysége ARF1. Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848-51

  45. Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848-51

  46. A p190RhoGAP domén szerkezete Src PKC GTPáz 4 x FF GAP

  47. PShatása az endogén GTPáz aktivitásra Rac Rho Ligeti et al. JBC 2004.

  48. PShatása p190 Rho-GAP és Rac-GAP aktivitására Rho Rac + PS Bound 32P-GTP (%) Bound 32P-GTP (%) p190GAP relatív menyisége Ligeti et al. JBC 2004.

  49. A kísérletek kontrollja [32P]GTP fogyás alapján [32P]foszfát keletkezés alapján Ligeti et al. JBC 2004.

  50. PSésSDShatása a p190 Rho- és RacGAP activitására Ligeti et al. JBC 2004.

More Related