expression du g nome n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Expression du G é nome PowerPoint Presentation
Download Presentation
Expression du G é nome

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 20

Expression du G é nome - PowerPoint PPT Presentation


  • 59 Views
  • Uploaded on

Expression du G é nome. Le transcriptome. Déchiffrage de l’Information Génique. L’information est encodée dans la séquence de nucléotides contenus dans des unités discrètes Les gènes

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Expression du G é nome' - zahi


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
expression du g nome

Expression du Génome

Le transcriptome

d chiffrage de l information g nique
Déchiffrage de l’Information Génique
  • L’information est encodée dans la séquence de nucléotides contenus dans des unités discrètes
    • Les gènes
  • L’information contenue dans les gènes est transcrite pour générer les ARNs puis décodée pour générer les protéines
les g nes

Site d’initiation

de la transcription

Region 3’ nontraduite

Region 5’ nontraduite

Introns

5’

3’

Int. 1

Int. 2

Exon 1

Exon 2

Exon 3

Promoteur/

Region régulatrice

Séquence de

terminaison

Exons

Transcrit d’ARN

Les Gènes

Seulement un des deux brins d’un gène est codant!

codant
Codant
  • Brin Codant
  • Brin positif
  • Brin sens
  • Brin complémentaire à la matrice
  • Brin dont la séquence est la même que celle de l’ARN transcrit
  • Brin sur lequel se retrouve le promoteur

4

non codant
Non Codant
  • Brin non Codant
  • Brin négatif
  • Brin anti sens
  • Brin matrice
  • Brin dont la séquence est complémentaire à celle de l’ARN transcrit

5

codant vs non codant

5’ TAG 3’

ADN:

3’ ATC 5’

Transcription

5’

?

3’

ARN:

Traduction

Leu

Protéine:

Code génétique: CUA = Leu

UAG = Arrêt

Codant Vs Non-codant
slide7

Transcription

Traduction

Génome

Transcriptome

Répertoire d’ARN des gènes qui

codent pour des protéines

Répertoire d’ARN qui représente la

fraction du génome qui est exprimée

Protéome

Répertoire de protéines dérivées

du transcriptome

slide8

Un Génome

  • Le transcriptome est-il le même dans toutes les cellules d’un organisme?
  • Le transcriptome est-il toujours le même dans une cellule donnée?
est ce qu une s quence code pour un transcrit
Est-ce qu’une Séquence Code pour un Transcrit?
  • Analyse d’hybridations Northern : 
  • RT-PCR 
comparaison des m thodes
Comparaison des Méthodes

Northern RT-PCR

Séquence doit être connue

Non Oui

Présence ou absence d’un transcrit

Oui Oui

Permets de déterminer la taille

Oui Non

Sensibilité

Faible Élevée

Comparer l’abondance relative

Oui Oui

Obtenir la séquence du transcrit

Non Oui

Déterminer quel brin d’ADN est transcrit

Oui Oui

Déterminer combien de transcrits sont fait à partir d’une séquence

Oui Non

LA SÉQUENCE DOIT ÊTRE EXPRIMÉE

OUI OUI

analyse northern
Analyse Northern
  • Isoler l’ARN total de cellules ou d’un tissu
  • Séparer les ARN d’après leurs grosseurs sur gel d’agarose dénaturant
    • Formaldéhyde + Formamide
  • Hybridation avec une sonde complémentaire

ARNr

ARNt

hybridation northern
Hybridation Northern
  • Nécessite une sonde
    • Hybridation = la sonde possède des séquences d’un gène
      • La séquence est exprimée
    • Intensité du signal d’hybridation = abondance relative
    • Nombre de signaux d’hybridation = nombre de transcrit
      • Possiblement nombre de gènes
hybridation northern1
Hybridation Northern
  • Permet de comparer la quantité relative d’un transcrit
    • Sensibilité faible
    • Requiert un témoin interne
      • Gène dont l’abondance est constante sous les différentes conditions examinées
        • Témoin pour les variations de la quantité d’ARN chargé
        • Utilise des gènes domestiques :
          • Gènes qui assurent les fonctions indispensables à la vie de tous les types de cellules
          • Expression constitutive
probl me

Tissus: F C R P

Actine

Fos

Problème
  • Un Northern d’ARN isolé de différents tissus a été sondé avec le gène Fos et le gène domestique actine. Expliquer les résultats obtenus
rt pcr
RT-PCR
  • Permets d’amplifier une séquence d’ARN
    • Isoler l’ARN total de cellules ou d’un tissu
    • Transcrire les ARN en ADNc avec transcriptase inverse
    • Amplifier par PCR la séquence d’intérêt
r action de transcriptase inverse g ne non sp cifique

AAAAAAA

AAAAAAA

ARNm

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

Appariement d’amorce polyT

Transcription d’ADNc

T.I.

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

TTTT

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

Réaction de Transcriptase InverseGène Non-Spécifique

Collection d’ADN complémentaire aux

ARNm exprimés à un temps donné sous une condition donnée

r action de transcriptase inverse g ne sp cifique

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

Appariement d’une amorce

gène spécifique

AAAAAAA

AAAAAAA

Synthèse d’ADNc

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

T.I.

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

AAAAAAA

Réaction de Transcriptase InverseGène Spécifique

ADN complémentaire à unARNm d’intérêt

rt pcr1

Collection d’ADNc

ADNc d’ARN d’intérêt

PCR avec des amorces

spécifiques à une séquence d’intérêt

Analyse sur gel

RT PCR
rt pcr2
RT-PCR
  • La séquence doit être connue pour la conception d’amorces
    • Produit d’amplification =
      • Les séquences des amorces font partie d’un gène
      • La séquence est exprimée
    • Intensité du produit d’amplification = abondance relative
    • La taille du produit d’amplification n’est pas égale à la taille du transcrit