La Validation de Méthode en Cytogénétique Partie 1 : Théorie

1. La Validation de Méthode en CytogénétiquePartie 1 : Théorie XXIIIème colloque ATC 20 septembre 2013 Suzanne CHEVALLIER, Technicienne

2. La validation/vérification de méthode une exigence normative et réglementaire • Ordonnance n° 2010-49 du 13 janvier 2010 • accréditation obligatoire de tous les laboratoires avant fin octobre 2020 • preuve d’entrée dans la démarche avant fin octobre 2013. • référentiel d’accréditation opposable = NF EN ISO 15189 • Chapitre 5 de la Norme NF EN ISO 15189, paragraphe 5.5.2 et 5.5.3 • COFRAC : Guide technique d’accréditation de vérification /validation des méthodes en Biologie Médicale (SH GTA 04) + formulaire SH FORM 44. • ACLF : Guide pour un dossier de validation en cytogénétique constitutionnelle et en FISH. (version 1, 19/03/2013) Le laboratoire doit utiliser uniquement des procédures validées pour s’assurer qu’elles conviennent à l’utilisation prévue. Les validations doivent être aussi approfondies que nécessaires pour répondre aux besoins […]. Le laboratoire doit enregistrer les résultats obtenus et la procédure utilisée pour la validation. les procédures doivent être documentées et être disponibles au poste de travail du personnel concerné. Extrait du chapitre 5 traitant des exigences techniques, paragraphe 5.5.2 et 5.5.3 2 2

3. Formulaire téléchargeable sur le site www.cofrac.fr Depuis l’arrêté du 17 octobre 2012, ce document doit être obligatoirement transmis au COFRAC. Complété après constitution et rédaction de votre dossier de validation/vérification de méthode (qui lui doit être disponible au poste de travail). Résumé standardisé du ce dossier, ce qui facilite la compréhension de la démarche de validation/vérification des méthodes par l’évaluateur technique du COFRAC. VERIFICATION de méthode (en portée A) : examen est réalisé avec une méthode normalisée (Dispositif Médical de Diagnostic In Vitro marqué CE appelée DM-DIV ). On se limite à vérifier que les performances annoncées sont bien reproduites dans notre laboratoire. Ex : Recherche d’aneuploïdie des chromosomes 13,18 et 21 au moyen d’un kit de sondes marqué DM-DIV et quand on respecte la notice du fournisseur. VALIDATION de méthode (en portée B)  : examen est réalisé par une méthode développée (ou adaptée) par le LBM. Ex : Recherche d’aneuploïdie des chromosomes 13,18 et 21 par des sondes « maison». 3

4. Paramètres à étudier lors d’une vérification / validation de méthode Extrait du guide technique, SH GTA 04-rév.00-Avril 2011 • Lobbying auprès de nos fournisseurs élargir l’offre de DM DIV dans notre discipline. 4

5. Énoncer l’examen, par exemple : caryotype constitutionnel sur lymphocytes (faire un dossier de validation par examen et sur chaque matrice) Donner succinctement le principe  : Ex1 :Culture lymphocytaire / Préparations cytogénétiques / Dénaturation et Coloration des chromosomes / Microscopie Optique / Analyse d’images Ex 2 :FISH suivie d’une analyse visuelle des signaux et d’une acquisition sur système d’analyse d’images Le mesurande est ce qu’on analyse. Pour le caryotype, c’est « le chromosome », « le locus » étudié. Décrire en un ou deux mots la méthode : Ex :Comptage/analyse morphologique Si réactifs marqués DM-DIV CE. AFSSAPS ne souhaite pas référencer l’EEQ / ACLF veux faire l’accréditer l’EEQ. Citez la référence de la procédure générale de validation des méthodes de votre laboratoire que vous avez appliquée. L’évaluateur technique du Cofrac vous demandera ce document. Nom du ou des opérateurs habilités ayant réalisés les tests de validation de la méthode (il faut au moins un biologiste) Citez la référence de la procédure générale de gestion de la portée flexible de votre laboratoire que vous appliquerez. L’évaluateur technique du Cofrac vous demandera ce document. Nom du biologiste médical ou cytogénéticien ayant autorisé la mise en routine de l’examen 5

6. C’ est l‘étape la plus importante dans la validation des méthodes qualitatives. Il s’agit de dresser l’inventaire des modes de défaillances potentielles et établir un plan d’action. (exigences relatives au management : point 4.11 de la norme NF EN ISO 15189). Dans ce tableau il est demandé de mentionner les risques les plus importants, avec pour chaque risque, l’action mise en place en face pour qu’il ne se produise pas. 6

7. Diagramme des cinq M Demande d’examen Résultat rendu 7

8. Spécificité diagnostique ( = l’étude des faux positifs par analyse de témoins sains ) aptitude d'une procédure d'analyse de DIV à reconnaître l'absence d'un marqueur cible associé à une maladie particulière ou à un état particulier GBPC p 18, FISH interphasique spécifique à 95 % Validation en Portée B : On vient de fabriquer une sonde sur un loccus 21 test cette sonde sur un pool de 5 patients masculins normux.(% inf à 5% de faux positif) s Sensibilité diagnostique = (=l’étude des faux négatifs par analyse de témoins portant l’anomalie). La probabilité qu'un dispositif donne un résultat positif en présence du marqueur cible. CNEPGM , 10% des cas de trisomie du a des réarrangements ou à des mosaïque faible. Validation en Portée B : Test la sonde sur patients atteind d’une trisomie libre homogène. Analyse des contamination inter-échantillons ou inter-réactifs important pour les labos ayant automatisés des étapes techniques (automate d’étalement …). • Comparer notre méthode sur un nombre significatif d’échantillons (40 SFBC), par exemple : • Avec un autre laboratoire utilisant la même méthode (CIL) a débuté GFCH ). • Avec une autre méthode mise en œuvre dans votre laboratoire donnant le même résultat( FISH/CGH/Caryo). 8

9. La robustesse est la capacité à ne pas être affectée par de faibles variations des paramètres. Ex: changement d’opérateur. Il faut tester ici la stabilité des réactifs sur leur durée d’utilisation 9

10. 26 octobre 2012 NOM PRÉNOM Titre • Sous-titre Xxxx Texte xxxxX 10