1 / 34

Interações Antígeno-Anticorpo

Interações Antígeno-Anticorpo. Ana Cláudia Carvalho Gouveia. Interações Ag - Ac. Ligações não covalentes Reversíveis. Características das interações Ag-Ac. Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo). Características das interações Ag-Ac.

vienna
Download Presentation

Interações Antígeno-Anticorpo

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. InteraçõesAntígeno-Anticorpo Ana CláudiaCarvalhoGouveia

  2. Interações Ag - Ac • Ligações não covalentes • Reversíveis

  3. Características das interações Ag-Ac Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

  4. Características das interações Ag-Ac Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade • - Capacidade do Ac distinguirseuimunógeno de outrosAgs.

  5. Características das interações Ag-Ac • Reação cruzada • - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente • semelhantes • - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não • relacionado, mas com propriedades químicas similares.

  6. Métodos • Reagentes não marcados • (A ligação do Ac altera o estadofísico do Ag) • Reação de aglutinação • Reação de precipitação • Reagentes marcados • RIA • ELISA • IF, citometria de fluxo • Western Blotting

  7. Reação de aglutinação (Ag insolúvel) Diretaeritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos Passivalátex Qualitativos Semi-quantitativos Ex.: classificaçãosanguinea Ex.: detectarinfecções

  8. Tipagemsanguínea

  9. InibiçãodaAglutinação

  10. Reação de precipitação • Quantidades de Ag solúvelsãoadicionadas a umaquantidadefixa de sorocontendo o Ac. • A medidaque a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitadotambémaumentaaté um máximo, paradepoisdiminuir. Precipitadovisível

  11. Precipitaçãoemsolução

  12. Precipitaçãoem gel Imunodifusão Radial

  13. Precipitaçãoem gel ImunodifusãoDupla

  14. Reagentesmarcados • Enzimas, fluorocromos, isótopos • Tipos: • RIA • ELISA • IF, citometria de fluxo • Western Blotting

  15. Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas • Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Riscooperacional (radiação)

  16. - Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

  17. Imunofluorescência • - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculasreveladoras • chamadasfluorocromos. • Visualização em microscópio de fluorescência

  18. Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

  19. Aplicações: • Detecçãodireta de microrganismos • (secreções, urina, cortes de tecidos); • Identificação de subpopulações de linfócitos; • Fenotipagem de célulastumorais ImunofluorescênciaDireta Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis emsecreçãouretral

  20. ImunofluorescênciaIndireta • Aplicações: • Detecção de anticorposespecíficos contra • diversosmicrorganismos; • Diagnóstico de doenças auto-imunes; Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi Detecção de Ac anti-nuclear

  21. Citometria de fluxo • Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; • Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; • As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

  22. Citometria de fluxo • As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; • A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

  23. - O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e aluz fluorescente emitida pode sermedida por um ou mais detectores.

  24. CD4 • Aplicações: • Caracterização de populações celulares; • Contagem de microrganismos; • Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; • - Análise de proliferação celular. CD8 CD19

  25. Western Blot

  26. Ensaiosimunocromatográficos Testerápido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnóstico de gravidez ( detecção de beta HCG)

  27. Técnicas de Biologia Molecular

  28. ReaçãodaPolimeraseemCadeia Amostra + Reagentes

  29. RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

  30. Termociclador

  31. DetecçãodaAmplificação Eletroforeseem gel de poliacrilamida Produto (PCR ou RT-PCR)

  32. Relatório Qual a principal diferença entre osmétodos de ELISA e imunofluorescência? 2. Emumatipagemsanguíneahouveaglutinaçãoao se misturar o sanguepesquisado e ossoros anti-AB e anti-Rh. Determine o tiposanguíneo e faça um esquemaexplicando a reaçãoocorrida. Quais as características do anticorpoquepodeminfluenciar a sualigaçãoaoantígeno? Aorealizarosexamespré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentouteste ELISA positivopara HIV. Como vocêinterpretaesteresultado? Descrevasuscintamente a reaçãoocorrida. Qualimunoensaiovocêescolheriapara o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifiquesuaresposta.

More Related