非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体第 19 、 21 号外显子突变研究浙江省肿瘤医院叶雪梅毛伟敏刘杏娥

非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体第19、21号外显子突变研究浙江省肿瘤医院叶雪梅毛伟敏刘杏娥 1

浙江省2009年癌症发病率排名 我省恶性肿瘤报告发病率为226.12/10万，死亡率为171.03/10万，占总死亡人数的27.67%，居我省死因首位。 • 在癌症发病人群中，男性肺癌占第一位，女性为第二位。 2

靶向治疗的重要性 初次确诊3/4患者局部晚期及晚期,失去手术机会,以化疗主为的综合治疗手段铂类两药联合方案是目前标准的化疗方 1.仍不能明显延长晚期肺癌的生存期 2.相互比较无特别优秀方案 3.达到了一个平台, 传统方案1年生存率20%-25% 第3代方案1年生存率33%,2年生存率11% 分子靶向药物毒性较小，耐受性较好 • 靶向治疗的目的:改善患者生活质量，延长生存期 3

EGFR Iinhibition Via Tyrosine Kinase Inhibitors 4

TKI 腺癌非吸烟亚裔女性 EGFR突变有效预测因子

随访 TKI治疗测序 step1 step2 step3 课题思路

检测90例NSCLC患者肺癌组织中的EGFR基因第 19和21号外显子的突变率观察Exon19和Exon21的突变类型分析突变与临床特征的关系，并探讨其生物学活性，为临床医生选择最受益人群提供理论依据。目的观察TKI疗效与EGFR突变的关系

方法 DNA测序（正反双向）收集标本（90例）提取DNA （酚氯法）

PCR产物电泳图片 Exon19、exon21目的片段 A B A:Exon19 扩增片段电泳图（371bp） B:Exon21扩增片段电泳图（371bp） (注：1为marker，2～10分别为9个不同标本) 9

1. 突变分布 突变类型 delE746-A750 delL747-P753insS S749S 2244(A→G) exon19 L858R（T→G） L861Q(T→A) exon21 10

2.Mutation types of EGFR in Exon 19 and Exon21 11

1.delL747- P753insS CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCT CCCGTCGCTATCAAGGAATCGAAAGCCAAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTTCTGC 12

2.delE746-A750 CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATC CCCGTCGCTATCAAGACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTT 13

3. L858R（T→G） GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA GATTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA 14

4.L861Q(T→A) GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA GATTTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA 15

5.S749S 2244(A→G)杂合子突变 TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCT TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT 16

6.S749S 2244(A→G)纯合子突变 TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCT TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT 17

Table3. Relationship between EGFR mutation and the clinical characters of NSCLC patients 18

Table 4. Correlation between EGFR exon19 samesense mutation and the clinical character of NSCLC 19

分析从统计表中看,结果表明四种经典突变的突变率与患者的性别、病理类型、吸烟状态相关，而与年龄、TNM分期无关。本研究中，我们发现47例患者发生了Exon19上的同义突变S749S 2244(A→G) ,总突变率为52.2%，此为全球首次报道。统计分析显示该突变与病理类型相关,多发生于鳞状细胞癌中，与其他因素没发现统计学意义。有关同义突变的生物遗传学效应有待进一步深入研究。 20

2 3 1 4 5 1 3 2 同义突变可能是使偏爱密码子变成非偏爱密码子，从而导致相应的tRNA由多数型转为少数型，结果使该密码子的表达大大减低，影响蛋白质的合成＃。即往的分子生物学理论都认为最终得到的蛋白质结构和功能也不会产生变化日前在《科学》杂志上报告说，这种沉默突变并不“沉默”，在某种情况下可以决定蛋白质的最终表现*。讨论 EGFR突变与患者临床特征的关系 EGFR-TK突变类型 EGFR突变与EGFR-TKI疗效的关系各种突变类型与EGFR靶向药物疗效的关系同义突变及其生物遗传学效应探讨

主要突变类型 exon20 Exon19 exon21 41% 5% 46% S768、V769、R776、T790 S768I、 G719S,、S768I/G719S、D761-E762insEAFQ delE746-A750 delS752-I759 delL747-T751insS delL747-P753insS delL747-A750 • L858R • L861Q • L833V • H835L • Q852

结论 1、90例NSCLC患者检测到29例突变，突变率达32.2%。其中Exon19和Exon21各占总突变的55.2%和44.8%。 2、EGFR基因Exon19及Exon21的突变主要见于腺癌，尤其是细支气管肺泡癌、女性、非吸烟患者；突变与患者年龄及TNM分期无相关性。 3、检测到了两种经典的Exon19缺失突变和两种Exon21的替代点突变，它们是：delL747-P753insS（9例）和delE746-A750（7例），L858R（9例）和L861Q（4例）。 4、检测到47例的同义点突变S749S 2244(A→G)，突变率高达52.2%，多见于鳞癌，与患者性别、年龄、分期及吸烟于否无关。 5、同义突变可能与EGFR-TKI耐药相关，还需进一步深入研究其遗传生物学效应及其对于EGFR-TKI抗肿瘤活性的影响和作用机制。 23

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