OKSİDATİF STRES VE ANTİOKSİDANLAR

1. OKSİDATİF STRES VE ANTİOKSİDANLAR

2. AMAÇ • Bu çalışmada amaç; kromatografik şartları optimize ederek, hedeflenen bitki ekstraktlarındaki bileşenlerin etkin bir şekilde ayırmak ve ayrılan her bir bileşenin FRAP antioksidan kapasitesini eş zamanlı olarak belirlemek için bir on-line HPLC-FRAP sistemi geliştirmekti.

3. GENEL BİLGİLER (özet) • Serbest Radikaller • Reaktif Oksijen Türleri (ROS) • Antioksidanlar • Oksidatif Stres • Fenolik Maddeler • Flavonoidler • Fenolik asitler • Kromatografi (HPLC)

4. Serbest Radikaller • Serbest radikaller, kimyasal olarak en dış yörüngesinde bir elektron kaybetmiştir.

5. Serbest radikallerin yapısında, çoğunlukla oksijen yer almaktadır. (reaktif oksijen türleri=ROS) • ROS oksijen içeren, küçük ve oldukça reaktif moleküllerdir. • Serbest radikaller (ROS) kararsız bir yapıdadırlar ve kararlı hale gelmek için hücrelere saldırarak hasar oluştururlar.

6. Ateroskleroz İnflamasyon Kalp ve beyin hastalıkları Artrit Kanser Reaktif Oksijen Türleri Diyabet Katarakt Alzheimer Sıtma, amfizem Radyasyon hasarı Yaşlanma Parkinson Reaktif Oksijen Türleri (ROS)

7. Antioksidanlar • Serbest radikal oluşumunun, temelinde oksijen olduğu için, gerçekte bir oksidasyon (oksidan) faaliyettir. • Vücudumuz, bu faaliyete karşı “antioksidan” larla cevap vermektedir.

8. Antioksidan Pro-oksidan ve oksidan Oksidatif Stres • Antioksidanların miktarı oluşan serbest radikalleri dengeleyemez ve serbest radikal seviyesi, antioksidan seviyesine göre artar ise serbest radikaller hücrelerde oksidatif hasarlara yol açar ve bu duruma oksidatif stres denir. 

9. Flavonoidler özellikle meyve ve sebzelerde bulunur. C6-C3-C6 yapısında Fenolik asitler yaygın olarak bitki taç kısmında bulunur. 1. Hidroksi benzoik asit türevleri 2. Hidroksi sinamik asit türevleri 3 , , 2 4 B 8 , 2 5 7 , C 6 A 6 3 5 4 Fenolik Maddeler(En yaygın görülen antioksidanlar)

10. Fenolik Asitler

11. Fenolik Bileşiklerin Biyoaktiviteleri • antimutajen, • antikarsinojen, • antioksidan, • antiviral, • antibakteriyel, • antitrombotik, • antialerjik.

12. Antioksidan Kapasite Belirleme Yöntemleri • Hidrojen Atomu Transfer (HAT) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler (substratın hidrojen verebilme yeteneğini ölçer) 2. Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler (substratın (antioksidan) indirgeyici yeteneğini ölçer)

13. Hidrojen Atomu Transfer (HAT)Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler • Oksijen radikal absorbans kapasitesi (ORAC), • Toplam radikal yakalama antioksidan parametresi (TRAP), • Oksijen kullanım inhibisyonu (IOU), • Linoleik asit oksidasyonu inhibisyonu, • LDL oksidasyonu inhibisyonu • Krosin beyazlatma

14. Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler • Folin-Ciocalteu ayıracı ile toplam fenolik madde miktarı (FCR/TPC), • Troloks eşdeğeri antioksidan kapasite (TEAC/ABTS), • Demir (III) iyonu indirgeyici antioksidan güç (FRAP), • Bakır (II) iyonu indirgeyici antioksidan kapasite (CUPRAC), • DPPH (2,2'difenil-1-pikrilhidrazil) radikali temizleme

15. KROMATOGRAFİ • Hareketli fazın cinsine göre: - Sıvı kromatografisi - Gaz kromatografisi • Kullanılan tekniklere göre: - Kağıt kromatografisi (PC) - İnce tabaka kromatografisi (TLC) - Kolon kromatografisi (CC) - Gaz kromatografisi (GC) HPLC

16. KROMATOGRAFİ HPLC Adsorpsiyon kromatografisi, polarlıkları farklı bileşenlerden oluşan karışımların ayrılmasında iyi sonuç verir.

17. Bitkisel poşet çaylarda klasik spektrofotometrik FRAP analizi

18. Bitkisel çaylarda antioksidan aktiviteler 1. Toplam fenolik Madde İçerikleri GAE veya CAE (µg/mL)

19. 2. DPPH Radikali Temizleme Aktiviteleri SC50 seyrelme oranı x 10-4

20. 3. Demir (III) İndirgeme/ Antioksidan Güç Aktiviteleri (FRAP)

21. Yaylaçayı bitki ekstraktlarında klasik spektrofotometrik FRAP analizi

22. Yaylaçayı Ekstraktlarının FRAP Aktiviteleri Çözücülerin literatürdeki bağıl polarite değerleri su, metanol, etanol, n-bütanol, izopropanol ve asetonitril için sırasıyla 1,000- 0,762 - 0,654 - 0,602 - 0,546 ve 0,460’tır.