diamino pimelinsav meghat roz sa
Download
Skip this Video
Download Presentation
Diamino-pimelinsav meghatározása

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 14

Diamino-pimelinsav meghatározása - PowerPoint PPT Presentation


  • 74 Views
  • Uploaded on

Diamino-pimelinsav meghatározása. Készítette: Kelényi Janka. Diamino-pimelinsav (DAP). Diaminosavak csoportjába tartozik. Lizin ε-karboxi-származéka. Nem-fehérjeépítő aminosav.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Diamino-pimelinsav meghatározása' - pink


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
diamino pimelinsav meghat roz sa

Diamino-pimelinsav meghatározása

Készítette: Kelényi Janka

diamino pimelinsav dap
Diamino-pimelinsav (DAP)
  • Diaminosavak csoportjába tartozik.
  • Lizin ε-karboxi-származéka.
  • Nem-fehérjeépítő aminosav.
  • Baktériumok sejtfalának jellemzője. Jelenlétében normál növekedés, hiányában nem képesek új sejtfal-proteoglikánokat előállítani.
  • Minden Gram-negatív baktériumban, azonban csak néhány Gram-pozitív baktériumban jelenik meg.

Kelényi Janka

slide3
DAP
  • A Braun-féle lipoproteinek diaminopimelinsavon keresztül kapcsolódnak a Gram-negatív sejtfalakhoz.
  • A Gram-negatív Escherichia coli esetében diaminopimelinsavhoz közvetlenül kapcsolódik a szomszéd láncvégi D‑alanin. A sejtfal teichoinsav nélkül tömörebb, így kisebb rétegvastagság mellett is szilárd.

Kelényi Janka

dap meghat roz s
DAP meghatározás

Grant és West egyszerűsített módszere

  • Hidrolízis tömény sósavval
  • Tisztítás
  • Papír kormatográfiás vizsgálat
  • Elemzés
  • 80%-os visszanyerés

Kelényi Janka

dap meghat roz s1
DAP meghatározás

Mikrohullámmal gyorsított eljárás

  • Egészsejtes hidrolízis folyadék és gőzfázisban lévő 6 N sósavval, lezárt edényben.
  • Nyomás és hőmérséklet érzékelővel ellátott mikro használata.
  • Folyadék- és gőzfázisú mikrohullámmal történő eljárással azonos minőségű eredmény nyerhető, mint a hagyományos módszerrel.
  • A hidrolízis időtartama így 16-20 óráról kevesebb, mint 10 percre csökkenthető
  • A teljes vizsgálati idő kevesebb mint 90 perc
  • A gőzfáziú megoldás esetében megkönnyíti az eljárás menetét a fázisok közötti sósavmosás elhagyása

Kelényi Janka

grant s west m dszere i
Grant és West módszere I.

Módszer elve:

  • DAP extrakció talajból
  • Hidrolízis HCl-al
  • Mennyiségi meghatározás
  • Vékonyréteg kromatográfia

Anyagok és eszközök:

  • Spektrométer
  • Rotációs bepárló
  • Kromatográfiás papír
  • Rázógép
  • Vízfürdő (25-100°C között állítható)
  • Szűrőpapír
  • Centrifuga és centrifuga csövek

Kelényi Janka

grant s west m dszere ii
Grant és West módszere II.

Vegyszerek:

  • HCl (12 M)
  • trimetilkloroszilán (1% toluol)
  • pellet NaOH
  • Mozgó fázis I (30:20:6:24 V/V)
    • Bután-1-ol
    • Piridin
    • Ecetsav, tömény
    • Víz
  • Mozgó fázis II (7:1 V/V)
    • Buán-1-ol
    • Hangyasav

Kelényi Janka

grant s west m dszere iii
Grant és West módszere III.

Vegyszerek: (folytatás)

  • Ninhidrin reagens
    • 1g ninhidrin
    • 100 mg kadmium-acetát
    • 5 ml ecetsav
    • 100 ml aceton
    • 10 ml desztillált víz
  • H2SO4 (tömény)
  • Metanol
  • DAP standard oldat

Kelényi Janka

grant s west m dszere iv
Grant és West módszere IV.

Eljárás:

  • 3 db 2,5g talajminta bemérése
    • Inkubálásrázógépen (100 fordulat/perc)
    • 25°C
    • 48 óra
    • 20 ml HCl (12 M)
  • Hidrolizálás
    • 20 ml desztillált víz
    • 105°C
    • 18 óra
  • Hidrolizátumok szűrése
  • Maradékok kimosása 2x10 ml desztillált vízzel
  • Lombik szililezése a felszíni DAP abszorpció megelőzésére
  • Rotációs bepárlóval 45-50°C-on a szűrőket kiszárítjuk (3x)

Kelényi Janka

grant s west m dszere v
Grant és West módszere V.

Eljárás: (folytatás)

  • Semlegesített hidrolizátumot desztillált vízbe visszaoldjuk
  • Huminanyagok eltávolítása centrifugálással
  • A felülúszókat adott térfogatra egészítjük ki
  • DAP meghatározás
    • Whatman papír
    • 2 cm-es távolságban viszik fel az egyes mintákat
    • 72 óra
  • Levegőn szárítása a kromatográfiás papíroknak
  • Ninhidrin reagensbe mártás

Kelényi Janka

grant s west m dszere vi
Grant és West módszere VI.

Eljárás: (folytatás)

  • Folt előhívása, kivágása
    • 24 órán belül
    • Tömény H2SO4-val
    • Sötétben
  • A foltok eluálása 4 ml metil-alkohollal
  • 500 nm-en spektrofotometriás mérés
  • Minden kromatográfiás papírból kivágunk egy ugyanakkora darabot (vak minta), mint a mintáknál és mossuk 4 ml metil-alkohollal. Ezzel a háttér-abszorbancia értékkel korrigálunk a mérés során.

Kelényi Janka

grant s west m dszere vii
Grant és West módszere VII.

Eredmények:

  • Érzékenysége kb. 10 μg/ g talaj
  • Extrakciós veszteség max. 38 %
  • Talaj élettelen szerves frakciójában megjelenik a DAP

Kelényi Janka

felhaszn lt irodalom
Felhasznált irodalom
  • http://hu.wikipedia.org/wiki/Diamino-pimelinsav
  • delfin.unideb.hu/~szentirm/mikrobana.doc
  • http://davidcwhite.org/fulltext/310.pdf
  • Alef K. and Nannipieri P. (Editors): Methods in Applied Soil Microbiology and Biochemistry, Academic Press Limited, London, 1995

Kelényi Janka

ad