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NEUROCIENCIAS II. METODOS EXPERIMENTALES. Ablación experimental. Extirpación o destrucción de una parte del encéfalo de un animal de laboratorio; se espera que las funciones que ya no puedan ejecutarse sean las que controlaba previamente la región. Ablatus – llevarse. Estudios de lesión:
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NEUROCIENCIAS II METODOS EXPERIMENTALES
Ablación experimental • Extirpación o destrucción de una parte del encéfalo de un animal de laboratorio; se espera que las funciones que ya no puedan ejecutarse sean las que controlaba previamente la región. • Ablatus– llevarse.
Estudios de lesión: • El funcionamiento de un área cerebral puede deducirse basándose en las conductas que el animal ya no puede realizar después de que se haya destruido dicha área. • El objetivo es descubrir cuáles son las funciones que realizan las diferentes regiones cerebrales y luego entender cómo se combinan estas funciones para dar lugar a determinadas conductas.
Cuidado con… • Todas las regiones del encéfalo están interconectadas. • Ser lo más específico posible.
Producción de lesiones cerebrales Lesión por radiofrecuencia. Las flechas señalan las minúsculas lesiones producidas por el paso de corriente de radiofrecuencia a través de los extremos de electrodos de acero inoxidable, situados en el núcleo preóptico medial del encéfalo de una rata.
Producción de lesiones cerebrales • Acido kaínico. • Destruye las neuronas estimulándolas hasta que mueren. • AK estimula los receptores glutamatérgicos. “Lesión excitotóxica”
Mas específico…. • 6-hidroxidopamina (6-HD). • Es similar a las catecolaminasnoradrenalina y dopamina. • Es captada selectivamente por los axones y botones terminales de neuronas noradrenérgicas o dopaminérgicas y actúa como una toxina dañándolas o destruyéndolas. • Lesión falsa (sham). • Procedimiento placebo que reproduce todos los pasos de realización de una lesión cerebral salvo el que realmente la causa (SSI).
Cirugía estereotáxica Cirugía cerebral que utiliza un aparato estereotáxico para situar un electrodo o una cánula en un lugar específico del encéfalo.
Atlas estereotáxicoPaxinos y Watson, 1998 • Conjunto de fotografías o dibujos de secciones del encéfalo de un determinado animal. • Tiene coordenadas que permiten a un cirujano llegar a una determinada región del encéfalo del animal con un aparato estereotáxico. • Necesitamos una referencia externa Bregma. Es el punto de unión de las suturas sagital y coronal del cráneo. Suele utilizarse como punto de referencia en la cirugía estereotáxica cerebral.
Atlas estereotáxicoPaxinos y Watson, 1998 • Atlas Neuroanatómico de rata. • Para corte coronal y sagital. • Nomenclatura • Peso rata 280-320 Kg. • Ratas macho
Depende de lo que se quiera medir • Guillotina • Anestesia • Perfusión intracardiaca • Se reemplaza la sangre de un animal por SSI y fijador. Objetivo. Preparar el cerebro para su análisis histopatológico.
Fijación y obtención de secciones MICROTOMO
Corte coronal de cerebro de rata procesado con la técnica histológica Hematoxilina Eosina mostrando: A) el rastro el electrodo bipolar en las diferentes áreas del hipocampo, cada círculo representa la punta de un electrodo B) acercamiento de la zona marcada en rectángulo en A observando el rastro del electrodo bipolar en la capa piramidal de CA1.
Microscopía electrónica Para poder ver estructuras anatómicas tan pequeñas como las vesículas sinápticas y detalles de los organelos celulares. Se pasa un haz de electrones de un lado a otro del tejido a examinar. Sinapsis axo-dentrítica
Microscopio electrónico de barrido Grado de amplificación. Muestra objetos en tres dimensiones. El microscopio examina (barre) el tejido mediante un haz móvil de electrones. La información recibida por la reflexión del haz se utiliza para producir una imagen tridimensional muy detallada. Neuronas y neuroglía.
¿Cuales son las estructuras que le aportan información y cuáles la reciben de ella? Conociendo la función de una región determinada….
Marcado de axones aferentes Método de marcado retrógrado. Se inyectó oro fluorado en el Núcleo Ventromedial del Hipotálamo, donde fue captado por los botones terminales y transportado de vuelta a través de los axones hasta sus somas celulares.
Registro con microelectrodos microelectrodos Conjunto de electrodos unidos al cráneo
