Processamento de tecidos duros: técnica de descalcificação

1. Processamento de tecidos duros: técnica de descalcificação

2. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Ação dos descalcificadores sobre os componentes do tecido. • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados;

3. Técnica de descalcificação • Pontos importantes 2) Ação dos descalcificadores sobre os componentes do tecido • distorção; • maceração; • vacuolização; • contração; • inchação. • Os riscos são maiores quando o tempo de ação do descalcificador é prolongado. • tamanho recomendável da peça: 2 mm x 2 cm x 2 cm.

4. Técnica de descalcificação • Pontos importantes 2) Ação dos descalcificadores sobre os componentes do tecido • Peças espessas expostas por longo tempo ao agente descalcificador: maceração periférica pode prejudicar coloração pela eosina.

5. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: agentes • ácido nítrico; • ácido hidroclorícrido; • ácido sulfúrico; • ácidos orgânios: ácido acético e ácido tricloroacético (rápida descalcificação, boa preservação, mas há inchaço); • Ácidos inorgânicos: maior porder de descalcificar, mas causam mais danos aos núcleos; • Ácidos orgânicos: causam mais inchaço nas fibras, porém preservam melhor os núcleos.

6. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: descalcificador Morse Minimiza a contração celular e o inchaço das fibras - indicado para peças espessas (nenhum lado é menor que 2 mm); a) fixação em formol a 10%; b) solução: 50% de ácido fórmico a 45% + 50% de citrato de sódio a 20% (soluções ficam separados antes do uso); • aplica-se solução 10x o volume do tecido, trocando a solução diriamente;

7. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: Morse, tempo de descalcificação Amostra tempo dente único extraído 7-14 dias dente único com osso adjacente 14-30 dias dois dentes 30-40 dias 3-6 dentes 1-2 meses mandíbula de rato 1-2 dias cabeça de rato 3-5 dias

8. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: descalcificador Morse d) teste químico de descalcificação: - a 5 ml do descalcificador usado, adiciona-se 1 ml de hidróxido de amônia e mistura-se; - adiciona-se 1 ml de solução saturada de oxalato de amônia; precipitado se forma se houver cálcio. Adiciona-se 1 ml de oxalato de amônia a cada 15-20 minutos até completar 4 ml. Se não houver precipitado com 4ml, deixa-se a peça no ácido por 48h até fazer outro teste. Em case de teste negativo por 3 dias, pode-se passar para desidratação.

9. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: descalcificador Morse Minimiza a contração e o inchaço d) lavagem em água corrente por 5 a 24 h, logo após o teste de descalcificação: remove reagentes que possam interferir com os próximos passo; e) desidratação: • etapa I, álcool 30%, 50% e 70% por 24 h; • etapa II, soluções 1-6 de álcool n-butílico, cada uma por 48h. Menos danoso à fixação inicial. * Tempo pode ser reduzido para peças pequenas. f) infiltração com parafina por 5-24 h.

10. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: Morse, soluções de álcool n-butílico Agente solução . 1 2 3 4 5 6 água dest. (ml) 30 15 - - - - etanol 95% (ml) 50 50 45 25 - - n-butílico (ml) 20 35 55 74 100 100

11. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: descalcificador ácido nítrico + formaldeído • rápida descalcificação e preservação da matriz protéica • indicado para peças delgadas (um lado é menor que 2 mm); a) fixação em paraformaldeído 2%/ 0,5% glutaraldeído (inativa enzimas); b) solução: ácido nítrico a 5% / formaldeído 4% (soluções ficam separados antes do uso); • aplica-se solução 10x o volume do tecido por cerca de 6 h; c) teste químico de descalcificação.

12. Técnica de descalcificação • Pontos importantes • Obtenção de secções finas de tecidos mineralizados: descalcificador ácido nítrico + formaldeído d) lavagem em álcool etílico 70%; e) desidratação; f) infiltração com parafina por 5-24 h.