1 / 49

Bakteriális kemotaxis

Bakteriális kemotaxis. Kurzusvezető: Dr. Kőhidai László 2012. A kemotaxis során megfigyelhető eltérő mozgási formák értelmezése. A baktérium ostor - 12-30nm. {. monotrich. 5. lopotrich. peritrich. Felépítő protein: flagellin (53.000) pentahelikális felépítés

ogden
Download Presentation

Bakteriális kemotaxis

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Bakteriális kemotaxis Kurzusvezető: Dr. Kőhidai László 2012.

  2. A kemotaxis során megfigyelhető eltérő mozgási formák értelmezése

  3. A baktérium ostor - 12-30nm { monotrich 5 lopotrich peritrich • Felépítő protein: • flagellin(53.000) • pentahelikális felépítés • gyors regeneráció (3-6 perc)

  4. A baktérium ostor bazális testének szerkezete { ostor 22.5 nm „hook” { L rotor P 27 nm S M stator

  5. A baktérium ostor rotációjának iránya és a mozgás-típusok közötti összefüggés CCW CW tumbling

  6. R M Berry: Torque and switching in the bacterial flagellar motor. An electrostatic model. Biophys J. 1993 April; 64(4): 961–973

  7. Egyenes szakaszok hossza Tumbling szám Gradiens Egyenes szakaszok hossza Tumbling szám Gradiens

  8. E. COLI

  9. E. COLI

  10. A bakteriális kemotaxis és adaptáció A sejtek mozgására nem csupán a koncentráció-grádiens változása hat ! Az adaptációs mechanizmusok megléte e sejtek „primitív” memóriájának létélre utal.

  11. dipeptidek cukrok aminosavak periplazmikus kötő/szállító molekulák kemotaxis receptporok intracellulláris szignalizációs út

  12. Bakteriális cheotaxis receptorok kimutatása osztódási gyűrű receptor

  13. Aszpartát receptor ligandkötő-hely „coiled-coil” domain metilációs helyek szignáltovábbító rész

  14. O O C C O O Asp receptor részei ligandkötő hely metilációs hely 8 db szignál továbbító rész alap-aktivitásban

  15. O O C C O O O O O O C C C C O O O O Asp kemotaxis receptor metilációja metiltranszferáz CH3 CH3 metilészteráz

  16. CheA-P CheA CheA-P + CheY CheY-P+ CheA CheY + Pi CheY-P + CheZ Repellens molekula CheW , CheB-P 200 ms Mg2+ CW rotáció „tumbling” Mg2+

  17. Attraktáns molekula CheA aktivitás CheY-P mennyiség H+ vándorlási iránya az ostor motor régiójában megfordul CCW rotáció „úszás”

  18. Trg Tsr Tar Tap galaktóz ribóz Ni2+, Asp Leu, Ser dipeptidek CheR CheA CheW CheB-P CheZ CheB CheA-P CheY MOTOR CheY-P

  19. Tsr CheB Tar CheA CheY CheW Trg CheZ Tap CheR Aer MotA =MotB Ser -m Asp +P FliG FliM FliN Maltóz MalE +P RbsB Ribóz -P MglB D-Gal Dipeptid DppA +m Gázok m = metiláció P = foszforiláció

  20. Repellens molekulák CH3 CheY-P CheA CheB-P Che A-P CheY CheB CheA Receptor Effektor

  21. NH3 Homocyst CheD CheR -CH3 H2O SAM CheV -P Methanol ADP -P CheB ATP H2O Pi Pi Sink P- CheA CheW CheZ L CheY CheY P- CheC CheX FliY Motor app

  22. A CheY szerkezete

  23. A ChA - ChY komplex

  24. FlgK - a „hook” régió FlgD- hosszát szabályozza FlgB, C, G - összekötő „pálca” FliF - M-gyűrű Mot A - Transzmembrán proton-csatorna Mot B - Kapcsoló fehérje Fli G - CheY-CheZ Fli M- kapcsolat Fli N- Baktérium legfontosabb flagelláris proteinjei

  25. Flagelláris proteinek • Több operonon elhelyezkedő, 30-nál több gén • határozza meg • Szintézisét, illetve expresszióját a Sigma 28 faktor • szabályozza • „Hook asszociált protein” (HAP) : • - a flagellin molekulák nukleációs helyét adja • - növeli a mechanikai ellenállóképességet • Fő fajtái: Fli, Flg, Flh

  26. A bakteriális kemotaxis proteinek jellemzése • CheA - hisztidin autokináz • P1 - 22 aminosav, nem gátlódó régió • P2 - 25 aminosav, a CheY interakcióban • vesz részt • CheAL (long) - His48 autofoszforilálódik, mely • része a CheY és CheB aktiválódási • folyamatának • CheAL működése pH-függő. Optimális pH 8.1 - 8.9 • - ha a citopl. pH 7.6 alá csökken a Tar és Trg • receptorok továbbítanak szignált • ChAS (short) - kináz aktivitással rendelkező, de NEM • autofoszforilálódó alegység • - aminoterminálisan 97 as. szekvencia • hiányzik

  27. A bakteriális kemotaxis proteinek jellemzése • CheA hyper kináz - pontmutáció a Pro337-nél, melynek • következménye a foszforiláció • sebességének növekedése • A CheA a CheV foszforilációját is irányitja • CheN - Bacillis substilisban található és homológ • E. coli CheA-jával

  28. A bakteriális kemotaxis proteinek jellemzése • CheY - 128 as.-ból áll, foszforilációját a konformáció • megváltozása követi • számos pozícióban lévő as. helyzete változik, • pl.: 17, 21, 23, 39, 60, 63, 64, 66, 67, 68, 69, • 85, 86, 87, 88, 94, 107, 109, 112, 113, 114, • 121 • A Mg2+ jelenléte a CheY aktiválódásához elengedhetetlen • Mg2+ hatására a Lys109 - Asp 57 közötti sókötés • felszakad, ez lehetővé teszi a molekula • foszforilációját

  29. Metil-Accepting Chemotaxis proteinek (MCP-k) jellemzése • MCP1 - Tsr, MCP2 - Tar, MCP3 - Trg, MCP4 - Tap • H1 - 97 kD pI 5.1; H2 - 86 kD pI 5.1; H3 - 76 kD pI 5.3 • DcrA - Hem tartalmú, 668 as.-ból álló, 2 hidrofób • szekvenciát tartalmazó oxigén szenzor, • mely a redox-potenciál változásaira reagál • (Desulfovibrio vulgaris) • Tlpc - 30% homológiát mutat az E.coli MCP-jével; • defgektusa esetén elmarad a pathológiás kemotaxis

  30. Metil-Accepting Chemotaxis proteinek (MCP-k) jellemzése • A metiláció táplálékmolekula-függő folyamat (pl. E.coli) • Éheztetés hatására egy 43kD-os, membrán-asszociált • protein metilációja figyelhető meg; • - táplálék molekulák jelenlétében a metiláció leáll • A metilációs rendszer és a kemotaxis aktivációja • közötti kapcsolat a kemotaxis receptorok, illetve • szignalizációs folyamat alapvető evolúciós hátterére utal

  31. -CH3 CARRIER -CH3 CARRIER Metil-Accepting Chemotaxis proteinek (MCP-k) jellemzése • MCP-k demetilálódása -CH3 Attraktáns MCP-CH3 gyors Metanol + CARRIER lassú A nem metilált intermedier „tumblingot” idéz elő, majd kialakul az ADAPTÁCIÓ

  32. MCP-fluoreszcencia kimutatása eltérő fenotípusú sejtekben

  33. Adaptáció - Tumbling

  34. A sejtek elhelyezkedése optimális koncentrációt Jelentő gyűrűkben - adaptáció Ser gyűrű Asp gyűrű

  35. Metiláció – Szénhidrát típusú ligandok hatása

  36. Metiláció - időfüggés

  37. Kemotaxis - Evolúció Metil-transzferázok CheR Homológia: E.coli metil-transzferáza metilálja a Bac. subst. MCP-jét Eltérés: Bac. subst. CheRB Adaptáció repellensekhez E.coli CheRE Adaptáció attraktánsokhoz

  38. Kemotaxis - Evolúció Metil-észterázok CheB Homológia: Bac.subst. MCP E.coli CheB DEMETILÁCIÓ + ATTRAKTÁNS Bac.subst. CheB E.coli MCP DEMETILÁCIÓ + ATTRAKTÁNS A reakciók sebességét az MCP határozza meg

  39. Kemotaxis - Evolúció Metil-transzferázok CheR Homológia: E.coli metil-transzferáza metilálja a Bac. subst. MCP-jét Eltérés: Bac. subst. CheRB Adaptáció repellensekhez E.coli CheRE Adaptáció attraktánsokhoz

  40. Methanol-képződés dinamizmusa és a ligandspecifitás C. gelida E. coli B. subst.

  41. Bac.subst. CheY • E.coli CheA CheY-P • Bac.subst. CheY-P • E.coli CheZ CheY Kemotaxis - Evolúció • Bac.subst. pozitív kemotaxis a esetén - CheY-P • E.coli pozitív kemotaxisa esetén - Chey-P • Bac.subst. és E. coli CheW 28.6% homológia • Bac. subst. CheB és E.coli CheY 36% homológia • Bac. subst. és E. coli - M gyűrű és pálca

  42. Ca2+ hatása baktériumok kemotaxisára • Kimutatható egy 38kD-os Ca2+-kötő fehérje • Ca2+ csatorna gáltók (pl. verapamil, LaCl3) • a kemotaxis zavarát okozzák

  43. Che A (kb. 650 AS) P1 P2 P3 P4 P5 N H C Foszforiláció RR-bdg. Dimer Katalít. CheW rec bdg. Che Y (kb. 120 AS) N C DD D T/S K Mg2+ bdg. Foszforiláció Katalít.

  44. Sigma faktor Bas.test CheW Che ? Sigma28 CheY CheB • A Sigma28 faktort kódoló gén egy 26 kb-os operon része • A flagellin, a „hook-asszociált protein” (HAP) és • egyes motor proteinek szintézisét szabályozó régió • Hiánya: paralizált flagellum; MCP hiány

  45. Bakteriális chemotaxis mérése 3-csatornás rendszerben

More Related