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Howard Mold Counting Method

Howard Mold Counting Method. FSA KOREA. 실험 전 체크해야 할 기구 및 시약. 현미경 Monitoring, 쌍안 또는 일안의 mechanical stage 와 40~200 배율 조절이 가능한 현미경. 뷰렛에이드 , 뷰렛 (2ea). 1㎖ 마이크로 피펫 , 피펫팁. 증류수. Homogenizer 4~8 개의 칼날과 최소 200㎖ 이상의 전용 컵 (2 개 이상 권장 ). 70% 알코올. 시약스푼 : 5ea.

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Presentation Transcript

  1. Howard Mold Counting Method FSA KOREA

  2. 실험 전 체크해야 할 기구 및 시약 • 현미경Monitoring, 쌍안 또는 일안의 mechanical stage와 40~200배율 조절이 가능한 현미경 • 뷰렛에이드, 뷰렛(2ea) • 1㎖ 마이크로 피펫, 피펫팁 • 증류수 • Homogenizer • 4~8개의 칼날과 최소 200㎖ 이상의 전용 컵 • (2개 이상 권장) • 70% 알코올 • 시약스푼 : 5ea • Howard Mold Chamber & cover glass • 렌즈페이퍼 • Howard Mold Counting 전용 Eye-piece • 실험용 티슈 • 전자저울 & weighing dish • Hot plate &stirrer 또는 burner • 시약 : 팩틴 또는 CMC, 1% NaOH, 2-Octanol • 비커 : 500㎖ – 3ea • 메스실린더 : 100㎖ 또는 200㎖ - 2ea

  3. HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10㎜ Hausser Scientific HUKO FS Sampling 시 약 - 1% NaOH : ready to use - Silica gel 소포제 또는 2-octanol : ready to use - 5% 안정액: 고속 교반기에서 85℃ 물 475㎖을 넣고 25g의 팩틴을 조금씩 넣으며 용해시켜 만든다.(미리 만들어 놓아야 준비시간을 단축시킬 수 있다.) 10,000rpm 10,000rpm + 고추가루 시료 5g 1% NaOH 30㎖ 1% NaOH 70㎖ 10,000rpm에서 5초간 혼합 1%NaOH 70㎖로 혼합기 내벽의 부착물을 씻어 내리고10,000rpm에서 3분간 혼합한다. Silicagel 또는 2-octanol3~4방울을 첨가해 거품을 제거한다. 적당량의 시료를 하워드 곰팡이계수 슬라이드에 점적 하여 관찰한다.. 5% 안정액 25ml

  4. Hausser Scientific HUKO FS HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10㎜ Covering X10

  5. Principle of Howard Mold Counting Method • HMC는 1단위부피(0.15㎣)당 들어있는 곰팡이 균사체의 양성/음성을 판정한다. • HMC는 일정 개수(50)의 필드(또는 단위부피)를 검경하여 전체 시료의 품질을 평균값에 따라 평가하는 원리로 고안되었다.

  6. 1.382㎜ 0.1㎜ HMC에서 단위부피란? X10 원의 넓이 = πr2 = ¼πd2 = 0.7854 X d2 계수측정 시 시야의 넓이 = 직경2 X 0.7854 = 1.3822㎜ X 0.7854 = 1.5㎟ 현미경시야의 넓이 = 1.5㎟ 시야의 1부피 = 넓이 X 높이 = 1.5㎟ X 0.1㎜ = 0.15㎣

  7. Eye - Piece Micrometer(보조유리원판)E.P.M • E.P.M은 가로 세로 각 6칸으로 분할된 격자가 그려진 유리원판으로 현미경의 접안렌즈에 장착하여 사용하는 보조기구이다.※E.P.M은 길이를 재는 자(ruler)외에 어떤 의미도 없다. • E.P.M은 AOAC와 식품공전에 명시되어있는 판정규정*에 따라 균사체의 길이를 측정하는데 보다 용이하도록 제작되어 있다.*한 필드에서 균사체의 길이가 1.382㎜의 1/6을 넘으면 그 필드는 양성으로 판정

  8. X10 X10 HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10㎜ Hausser Scientific HUKO FS 1.382mm 검경 전 현미경 셋팅 방법

  9. Hausser Scientific HUKO FS HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10㎜

  10. 검경 패턴 X10

  11. 하나의 필드에서 다른 하나의 필드로 넘기는 방법 1페이지 동해물과 백두산이 마르고 닳도록 하느님이 보우하사 우 리나라 만세 무궁화 삼천리 화려 강산 대한 사람 대한으로 길 이 보전하세 남산 위에 저 소나무 철갑을 두른 듯 바람 서리 불변함은 우리 기상일세 무궁화 삼천리 화려강산 대한 사람 대한으로 길 이 보전하세 2페이지

  12. 판정 기록표 Set 1-1 = 7

  13. 판정 기록표 Set 1-2 = 10

  14. 1set에서 양성필드의 합 1set 전체 필드의 합(50) 100 = % 판정결과의 계산 17 = 34% 100 50

  15. 곰팡이 균사의 실제 현미경 사진

  16. X100

  17. X200

  18. X100

  19. X200

  20. X100

  21. X200

  22. X100

  23. X200

  24. X100

  25. X200

  26. X100

  27. X200 Not mold

  28. 면역형광 검사법을 이용한 곰팡이 관찰 Alternaria alternata Fusarium sp. Mucur circinelloides Penicillum frequentans Aspergillus niger

  29. 이물 사이에서 면역형광 검사법을 통해 본 곰팡이 균사 조각

  30. History of MHC • Troy, V.S. 1952. Mold Counting of Tomato Products • Fábr, V.K. etc. 1959. Factors Involved in the interpretation of Mold Counts of Tomato Products. Food Technology. 13:318-322 • Parran, H.M. etc. 1972. Method for Preparing Garlic Powder(Ground Dehydrated Garlic Bulbs) for Examination by the Howard Mold Count Method. J. of AOAC. 55(1):78-79 • Mossel, D.A. etc. 1975. Further Studies on the Suitability of Various Media containing Antibacterial Antibiotics for the Enumeration of Mould in Food and Food Environments. J. of Appl. Bacteriol. 39(1):15-22 • Cichowicz, S.M. 1978. Use of High-Speed Over-Head Mixer in Howard Mold Count Preparations. J. of AOAC. 61(4):992-994 • Blaser, P. 1978. Comparison of methods for the quantitative detection of Moulds in Food. Ⅰ. Communication : Selective Staining Procedures for the Directmicrosocopic Mould Count. Zentralbl. Bakteriol. 166(1):45-62 • Robertson, A. etc. 1988. Immunofluorescence Detection of Mould-An Aid to the Howard Mould Counting Technique. Food Microbiology, 5:33-42

  31. Modified Method • Jarvis, B. 1977. A Chemical Method for the Estimation of Mould in Tomato Products. J. of Food Tech. 12:581-591 • Bishop, R.H. etc. 1982. Estimation of Fungal Contamination in Tomato Products by a Chemical Assay for Chitin. J. of Food Sci. 47:437-439 • Cousin, M.A. etc. 1984. Chemical Detection of Mold in Processed Foods. J. of Food Sci. 49:439-445 • Lin, H.H. etc. 1985. Detection of Mold in Processed Foods by High Performance Liquid Chromatography. J. of Food Protec. 48(8):671-678 • Lin, H.H. etc. 1986. Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Detection of Mold Tomato Puree. J. of Food Sci. 51(1):180-183 • Kamphuis, H.J. etc. 1989. A Rapid and Reliable Method for the Detection of Molds in Foods: Using the Latex Aglutination Assay. J. of Food Protec. 52(4):244-247 • Li, S.etc. 2000. Immunochemical Detection of Molds. J. of Food Protec. 63(2):281-291

  32. 제작 : FSA KOREA Co. • 감수 : 연세대학교 생명공학산업화연구소장- Dr. 박지용 중앙대학교 식품공학과- Dr. 하상도 한국보건산업진흥원- 김용수 책임연구원 Hausser Scientific LTD. - Mr. Chip Behr 감사합니다.

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