prinsip dasar metode kultur jaringan hewan n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN PowerPoint Presentation
Download Presentation
PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 27

PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN - PowerPoint PPT Presentation


  • 1210 Views
  • Uploaded on

PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN. Tim Biologi Unair. Kultur jaringan hewan : budidaya jaringan dalam media kultur sehingga mampu tumbuh dan membelah Kultur jaringan merupakan upaya memanfaatkan sifat totipotensi sel secara in vitro. Media Kultur Jaringan Hewan.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN' - noelani-jeremiah


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide2

Kulturjaringanhewan: budidayajaringandalam media kultursehinggamamputumbuhdanmembelah

  • Kulturjaringanmerupakanupayamemanfaatkansifattotipotensiselsecara in vitro
media kultur jaringan hewan
Media KulturJaringanHewan
  • Optimalisasi media: meliputi pH, tekanan, sumberenergidansumberkarbon, asam amino, vitamin, mineral dan air.
  • Media dasartersusun: asam amino, asamlemak, glukosa, ion, vitamin danko-faktor ,dll. Misalnya:
    • Serum
    • Aditif : antibiotikpenisilindansteptomycin , antifungi: fungizone0,5%, danMercapto Ethanol
    • Sistempenyangga : sodium bikarbonat
  • Berdasarkanasalnya, dibagimenjadi 2, yaitu:
    • Media alami, yaitu media yang berasaldaricairanjaringanembriodan medium plasma darah
    • Media sintetik, yaitu media yang dibuatsecarakimia, misalnya: MEM, RPMI
media alami plasma darah
Media alami: Plasma darah
  • Komponenterbesar (90%) dalamdarah
  • Plasma darahberfungsiuntukmengangkut sari makanankesel-selsertamembawasisapembakarandariselketempatpembuangan
  • Bahanalamidikelompokkandalamtigakategori, yaitu:
    • Koagulat, misalnyakoagulan plasma darahdankolagen.
    • Cairanbologis, misalnya serum.
    • Ekstrakjaringan, misalnyaekstrakembrio
m edia sintesis
Media sintesis

dibagimenjadi 3, yaitu:

  • Minimum essential medium (MEM), yaitu medium dasar yang tersusunatasasam amino esensialdan vitamin.
  • Medium pemelihara (maintenance medium/MM), untukmemeliharaseldalammetabolismerendahdanjangkawaktuagak lama. Medium initerdiridari MEM & serum konsentrasirendah (2 – 5 %).
  • Medium penumbuh (growth medium) yaitu, medium yang diperkayadengannutrienuntukmenumbuhkankulturselsecaracepat, medium iniditambahkan serum cukupbanyak (10 – 20 %).
eksplan kultur jaringan hewan
EksplanKulturJaringanHewan
  • Berasaldariembriodanjaringandewasa.
  • Jaringanembrionik yang digunakanharussteril.
  • Jaringanembrionikdapattumbuhdengancepat, tidaktergregasidanbermigrasidengancepat.
  • Mitosis padajaringanembrioniksegeraterjadisetelahdikultur.
  • Jaringandewasa yang tumbuhcepatadalahselepiteldanjaringan tumor.
teknik kultur jaringan hewan
TeknikKulturJaringanHewan
  • Dilakukanpadaukurantertentuuntukmeminimalkanterjadinyakontaminasi.
  • Harusdiperhatikan (harussteril):
    • Lingkungandidalamkultur (media) dandiluarkultur (udara, manusia, kondisilaboratorium)
    • Selamakultur, faktorfisiksepertiunsurharadanhormon.
    • Semuasumberkontaminasi (ruanganlaboratorium, laminerdanalat-alatbedahuntukkultur) harusditiadakan.
berdasarkan tempat untuk kultur jaringan hewan terdapat 3 teknik kultur jaringan yaitu
Berdasarkantempatuntukkulturjaringanhewanterdapat 3 teknikkulturjaringanyaitu :
  • Slide Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadagelasobyekcekung.
  • Flask Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadacawankultur.
  • Test-tube Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadatabungreaksi, botolterutamauntukjenissel yang tidakmelekat.
slide11

Flask Culture memberikankeuntunganlebihjikadibandingkandengan slide culture. Karenajaringandapatdikultursampaibertahun-tahun.

  • Wadah yang baikuntuk flask culture adalah Carrel flask.
  • TerdapatduatipeFlask Culture, yaitu
    • Thick Clot Culture, sangatbaikuntukpertumbuhan yang cepatdarisuatukulturjaringan
    • Thin Clot Culture, sangatbaiksebagaiujipengaruhmakananpada medium terhadapkultur.
mekanisme kultur sel hewan
MekanismeKulturSelHewan
  • Menyiapkanperalatankultur .
  • Mencuci organ ataujaringandidalam PBS
  • Organ dicincangsampaihalusdenganguntingdanpinset .
  • Dicucikembalidengan PBS
  • Dipindahkandalambotolsteril
  • PenambahansenyawaTripsinuntukmenghancurkan organ
  • Cairandipindahdalambotolsteril
  • Organ yang belumhancurditripsinasiulangdancairan yang terkumpuldisaring, disentrifugasi .
  • Supernatandibuang, diganti MEM, diinkubasi .
  • Setelah 2-3 hari, biakansel yang sudah monolayer dapatdiperbanyakdengancarapasase .
pembuatan kultur jaringan hewan dengan menggunakan media alami
PembuatanKulturJaringanHewandenganMenggunakan Media Alami
  • Mensterilkan Laminar Air Flow danruangandengansinar UV, 2 jam.
  • Menyiapkanalat yang telahdisterilkan (spet; membranmilipore; botolkaca ; aluminium foil; pembakarspiritus)
  • Menyiapkanbahan (darahayamsegar yang diberiamoniumoksalatsebagaiantikoagulan; alkohol 70%; spirtus)
  • Mensentrifugedarah (plasma darah (bag atas) danseldarah (bag bawah).
  • Menempelkanmembranmiliporepadamulutbotoldenganbantuanspetsecaraaseptik.
  • Menyaring plasma darahkedalambotolmelaluimembranmilipore.
  • Setelahsemua plasma darahtersaringkedalambotol, lalumengambilmembranmiliporedanmenutupbotoldenganpenutupnya. Kemudianditutuplagidenganaluminium foil.
slide14

KulturMesenchymal Stem Cells (MSCs) dari 3 macamjaringan (amandel, adiposa, sumsumtulang) menjadibanyakmacamsel (ototpolos, osteosit, kondrosit, saraf, danlemak)

pengaturan pelepasan growth factor untuk regenerasi jaringan
Pengaturanpelepasan growth factor untukregenerasijaringan
  • Pelepasan GF diperlukanuntukpembentukanjaringanbaru, misaljaringanpembuluhdarahdarimiokardium
  • GF untukpembuluhdarah : basic fibroblast growth factor (bFGF)
kultur jaringan tulang
Kulturjaringantulang
  • Pertumbuhandandiferensiasiosteoblastdarimesenkim stem cell akandistimuliolehkontakinterseluler, faktor media (microenvironment) , stimulasifisik, danbentukpermukaansel/jaringan
slide18

Bentukpermukaansel/jaringantulangtergantungpadakomposisisenyawapenyusunmatriksekstraseluler (protein, polisakarida, growth hormone)

  • Pertumbuhanselterjadikarenaadanyainteraksiantarakontakreseptordenganmatrikekstraseluler
slide19

Implantasi : strategipotensialuntukmemfasilitasiregenerasijaringantulang yang rusakkarenapenyakit, trauma

  • Cetakanpenggantitulangterbuatdaribiokeramikpolimer, bahanlogam, dankomposittulang
  • Keberhasilanregenerasidansistemvaskularisasijaringantulangditentukanolehkesesuaiandngcatakannya
slide21

Deteksi stem cell (selinduk) yang ditransplantasikankejaringan lain menggunakanmetodepencitraan (magnetic resonance imaging , MRI)

kultur jaringan kulit
Kulturjaringankulit
  • Digunakanuntuktransplantasikulitbabikekulitlukabakar
  • Alternatif lain menggunakanbahankolagensapi, kolagentulangrawanikanhiu
slide27

KelebihanPenelitianmenggunakanKulturSelHewan

  • Mudahdikontrolfisikokimialingkungannya (pH, suhu, tekananoksigen, dan CO2)
  • Pengambilankesimpulanrelatiflebihmudahdenganmenggunakanpopulasisel yang homogen .
  • Kultursel primer tetapmemilikiintegritasmorfologidanbiokimiawidalamjangkawaktu lama, dengandemikianmemungkinkanmelakukanpenelitianulang (reproducible) danterkontrol .
  • Ekonomis, tidakperlumemakaibanyakhewancoba .

KekuranganKulturSelHewan

  • Memerlukankeahlian, selalumenjagaaseptis, tertibdansabar .
  • Gambaranhistologissudahtidaknampak .
  • Dalamkasuskulturseltelahmengalamiperubahansifataslinya, makahasilpengamatan yang diperolehakanmenyimpang .
  • Tidakadapengaruhsistemikdankerjasamaantar-sel yang berbedadalamsuatujaringan yang kemungkinanmemegangperanpentingdalamaktivitasfisiologis .