Praktiká 4 neissériové infekcie hemofilové infekcie

1. Praktiká 4 neissériové infekciehemofilové infekcie • Diagnostika neissériových infekcií • kvapavka - výter z pošvy, sekrét • Mikroskopia, kultivácia, biochemické testy, dôkaz patogenity, citlivosť na ATB

2. Diagnostika neissériových infekcií - gonococových • Gramovo farbenie - veľmi citlivé (90%) a špecifické (98%) - u purulentnej uretritídy u mužov a purulentnej artritídy. V ostatných prípadoch ( cervicitída, anorektálne infekcie,faryngitída) - senzitivita aj špecificita nízke. Farbenie kultúry. • Kultivácia - Selektívne média Thayer Martinova pôda, čokoládový agar s ATB (vankomycin), 5% CO2 !vysušenie a chlad! - odobratý materiál sa nikdy neodkladá do chladničky • Biochemická identifikácia - odlíšenie od Neisseria meningitis a nepatogénnych neissérií - teoretický význam • Genetické sondy- dôkaz z klin. materiálu

3. Biologický materiál • kvapavka - u žien - výter - kontaminujúca flóra u mužov - prostatický sekrét

4. Mikroskopický preparát • Výter z pošvy pri pozorení na kvapavku: - farbenie podľa Grama: G-diplokoky, kávové zrná, epitelie, leukocyty, • Kultúra kolónií: G- diplokoky

5. Kultivácia Neisseria gonorhoe • Tampón pošvy alebo sekrét na KA, modifikovaný KA, čokoládový agar s ATB - potlačenie sprievodnej flóry • Šedé kolónie, po zakvapkaní cytochrómoxidázovým činidlom sčernajú - preparát podľa Grama - biochemické testy na odlíšenie od iných neissérií

6. Dôkaz katalázy - N. gonorrhoe - zimný semester - nákres

7. Určenie citlivosti na ATB • Diskový difúzny test • 6-8 ATB na platňu • zóna inhibície rastu v mm - porovnanie so štandardami Bez zóny inhibície - rezistencia na testované ATB Zóna inhibície rastu - dostatočne veľká ATB disk Rast testovanej baktérie Malá zóna inhibície

8. Citlivosť na ATB • Neisseria gonorrhoe - PNC - tvorba penicilinázy, aj chromozomálne mediovaná rezistencia - zmena povrch, - ceftriaxon - TTC, chinolóny, makrolidy - azitromycin - súčasná terapia chlamýdiovej infekcie

9. Hemofilové infekcie • Invázne – celkové ochorenia súvisiace s prdchádzajúcou bakterémiou spôsobené opúzdrenými kmeňmi – najviac (98%) typom b (H.i.b), v neočkovanej populácii s vekovým nahromadením v skupine detí od 6. mes. do 3. roku života – meningitída, sepsa, primárna pneumónia, celulitída, artritída • Neinvázne – lokalizované infekcie spôsobené neopúzdrenými kmeňmi H.influenzae, zriedkavo inými (H.parainfluenzae, H.hemolyticus..) – faryngitída, sekundárna pneumonia, otitída, sínusitída, konjunktivitída.........

10. Hemofilové infekcie - diagnostika Odber materiálu – neinvázne ochorenia: TT, TN, odlíšenie nálezu hemofila ako bežného komensála HCD, vyvolávateľa bakt.ochorenia, superinfikujúceho agens po vírusovej infekcii HCD., Ostatné – etiologický dôkaz – otitídy – nie TU ale aspirát stredoušnej tekutiny, - sínusitídy - punktát sínusov, - sek. pneumonia - aspirát z pľúc alebo nález čistej kultúry z riedeného spúta • Invázne ochorenia – meningitída – CSM + krv • - bakterémia – krv • - artritída, celulitída – punktát + krv • - prim. pneumonia – aspirát, spútum (ako hore), + krv

11. Mikroskopický dôkaz - - Gramovo farbenie Haemophilus influenzae • Kultivácia - -Haemophilus influenzae na čokoládovom agare a krvnom agare - satelitizmus, identifikácia pomocou faktorov X,V,XV • Biochemické vlastnosti • Dôkaz voľných antigénov H. influenzae typ b - diagnostika bakteriálnych ochorení CNS • Určenie antigénnej štruktúry H. influenzae typ b - dôkaz púzdra

12. Mikroskopický dôkaz • Mikroskopický dôkaz - - Gramovo farbenie Haemophilus influenzae - G - paličky ( kokoidné paličky až vláknité útvary • Dokaz púzdra H.influenzae - Burriho farbenie, - quellung reakcia - reakcia bobtnania púzdier - po aplikácii špecifického antiséra (anti a, b, c, d, e alebo f) k testovanej kultúre a zafarbení podľa Burriho prípadne v natívnom preparáte sa zvýrazní púzdro, - aglutinácia špecifickým antisérom - vznik aglutinácie a vyčírenie suspenzie po aplikácii špecifického antiséra ku kultúre na sklíčku

13. Kultivácia Haemophilus sp. -Haemophilus influenzae na čokoládovom agare a krvnom agare - satelitizmus, identifikácia pomocou faktorov X,V,XV • čokoládový agar - teplom pri príprave pôdy dochádza k rozpadu erytrocytov a uvoľneniu hemínu a NAD z erytrocytov - faktor X a V • krvný agar - Stafylococcus aureus uvoľňuje NAD (V faktor)- v jeho okolí rastie Haemophilus • závislosť na X alebo V alebo obidvoch faktoroch slúži k druhovej identifikácii - H.i. - potrebuje obidva XV, H. parainfluenzae len V

14. Dôkaz voľných antigénov H. influenzae typ b - rýchla diagnostika bakteriálnych ochorení CNS • Prítomnosť H.i.b v CSM, krvi moči je možné dokázať rýchlym testom pomocou latex aglutinácie Na latexové častice je naviazaná protilátka proti Hib. Ak sa Hib nachádza v tekutine, naviaže sa na protilátku na latexovej častici a dôjde k tvorbe viditeľných zhlukov. Výhoda - veľmi rýchly test - 30 minút. Reagujú aj nevitálne baktérie - usmrtené napr. Predchádzajúcou liečbou ATB. Nevýhoda - potrebné pomerne veľké množstvo baktérií - už viditeľné v mikroskopickom preparáte a jasné klinické príznaky