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Immunologie in der Labormedizin. Konteptvorlesung 2 Themenblock 8 Beda M. Stadler. Diese Folien stehen auch als PPT Files zum download bereit unter: http://www.iib.unibe.ch/teaching/immed.htm. Einige der Folien werden als Illustration verwendet und sind nicht Lernstoff.

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Presentation Transcript
immunologie in der labormedizin

Immunologiein der Labormedizin

Konteptvorlesung 2

Themenblock 8

Beda M. Stadler

Diese Folien stehen auch als PPT Files zum download bereit unter:

http://www.iib.unibe.ch/teaching/immed.htm

Einige der Folien werden als Illustration verwendet und sind nicht Lernstoff.

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kv2 im berblick
KV2 im Überblick

Lernziele: Immunologie in der Labormedizin

  • Was sind Immunassays?
  • Was versteckt sich hinter den Abkürzungen?
  • Assay Beispiele um immunologische Prinzipien zu vertiefen
  • Aussagekraft von Labordaten
  • Vertrauensgrenzen

KV 8.2

kv3 im berblick
KV3 im Überblick

Immunologie in der Labormedizin

  • Präzipitationsteste
  • Agglutinations Teste
  • Antigen-Antikörper Teste
    • Allgemein
    • Allergie Diagnostik
    • Flowzytometrie
    • HLA Diagnostik
    • Autoimmun Diagnostik
  • Sensitivität und Spezifität von Labortesten

KV 8.2

immunodiffusion ouchterlony gel

Antigen

Kontrollserum

Testserum

A

1

2

1

1

1

6

2

6

2

6

2

A

A

A

5

3

5

3

5

3

4

4

4

Identität

Keine Identität

Partielle

Identität

Immunodiffusion(Ouchterlony Gel)

KV 8.2

pr zipitinkurve

C

B

A

Präzipitinkurve

Anti-B

+

Anti-C

Anti-A

Antigen

Antikörper

Immunkomplex

Äquivalenz

Prozone

Postzone

Immunkomplex

Antigen

KV 8.2

radiale immunodiffusion

Antikörper im Gel

Ag

Ag

Ag

Ag

Diameter2

AK Konzentration

Radiale Immunodiffusion

KV 8.2

serum elektrophorese
Serum Elektrophorese

-

gamma

beta

Globuline

alpha2

alpha1

Albumin

+

Paraproteinämie-Patient

KV 8.2

immun elektrophorese
Immun-Elektrophorese

Normales Serum

Albumin

Transferrin

IgM

IgA

IgG

+

-

Antikörper gegen

Serumproteine

Patienetenserum

mit IgA Mangel

Beispiel

KV 8.2

der indirekte coombs test
Der indirekte Coombs Test

Step 1

Y

+

Y

Y

Y

Y

Erythrozyten

Patienten

Serum

Step 2

Y

Y

Y

Y

Y

Y

+

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Coombs Reagens

(Antiglobulin)

z.B. anti-RhD Antikörper

KV 8.2

blutgruppenbestimmung geltechnik
Blutgruppenbestimmung: Geltechnik

monoklonaler Antikörper gegen Blutgruppen A Antigen in der oberen Gelmatrix

Resultat: Blutgruppe A RhD neg

KV 8.2

z b schwangerschaftstest
z.B. Schwangerschaftstest

rapid determination of human chorionic gonadotropin (hCG) in urine specimens

Primary antibodies (anti-hCG labelled or on solid phase)

Secondary antibodies (anti-Ig on solid phase)

KV 8.2

allergieserologie welcher test

Anti-b2-Glycoprotein 1 (IgG)

ELISA

U/ml

<15

Cardiolipin-Antikörper (IgG)

SYNELISA

GPL-U/ml

<12

Analyse

Messprinzip

Masseinheit

Referenz-bereich

ECP ("eosinophil cationic protein")

FEIA

g/L

2.5-15

Tryptase

FEIA

g/L

1-13.5

Methylhistamin

RIA

µg/g Kreatinin

70-160

Total IgE

FEIA

kIU/L

(altersabhängig)

Allergen-spezifisches IgE (RAST)

FEIA

Rastklassen 0-6

0

Allergen-spezifisches IgG

FEIA

mg/L

< 50 mg/L

Präzipitine

Immundiffusion

qualitativ

negativ

Allergieserologie: welcher Test?

KV 8.2

immun assay ria elisa

Antigen

Antikörper

Immun Assay: RIA & ELISA
  • Radio
  • Immuno
  • Assay

Isotop Enzyme

markierter

Antikörper

  • Enzyme
  • Linked
  • Immuno
  • Sorbent
  • Assay

Messung der

Radioaktivität

oder

Enzymaktivität

KV 8.2

elisa
ELISA

Markierter Antikörper

Substrat

Enzym

Anti-A

Produkt

A

KV 8.2

sandwich elisa
Sandwich ELISA

Anti-Antikörper

Substrat

Enzym

Produkt

Anti-A

A

KV 8.2

beispiel flowzytometrie
Beispiel: Flowzytometrie

Analyse

Messprinzip

Masseinheit

Referenzbereich

HLA-B27

Zytofluorometrie

qualitativ

positiv/negativ

Lymphozyten

Zytofluorometrie

Zellen/l

1200-2800

CD3 absolut

Zytofluorometrie

Berechnung

Zellen/l

% der Lymphozyten

690-2540

55-84

CD4 absolut

Zytofluorometrie

Berechnung

Zellen/l

% der Lymphozyten

410-1590

31-60

CD8 absolut

Zytofluorometrie

Berechnung

Zellen/l

% der Lymphozyten

190-1140

13-41

NK-Zellen

Zytofluorometrie

Berechnung

Zellen/l

% der Lymphozyten

90-590

5-27

B-Zellen

Zytofluorometrie

Berechnung

Zellen/l

% der Lymphozyten

90-660

6-25

KV 8.2

slide23
FACS

sample

Fluorescence

Activated

Cell

Sorter

nozzle

red fluorescence

sheet flow

prism

green fluorescence

laser

right angle scatter

forward scatter

sorted cells

KV 8.2

beispiel hla typisierung

Analyse

Messprinzip

Masseinheit

Referenzbereich

HLA-B27

Zelllyse

qualitativ

positiv/negativ

HLA-Typ I (A, B, C) (serologisch)

Zelllyse

qualitativ

Phänotypisierung

HLA-Typ I (A, B)

PCR-SSP

qualitativ

Phänotypisierung

HLA-Typ II (DR)

PCR-SSP

qualitativ

Phänotypisierung

HLA-Typ II (DQ)

PCR-SSP

qualitativ

Phänotypisierung

HLA-Typ II (DP)

PCR-SSP

qualitativ

Phänotypisierung

HLA-Typ Organempfänger

PCR-SSP

qualitativ

Phänotypisierung

T-Zell Cross-match

Zelllyse

qualitativ

negativ

B-Zell Cross-match

Zelllyse

qualitativ

negativ

Leukozytenantikörper

Zelllyse

qualitativ

negativ

Beispiel: HLA Typisierung

KV 8.2

berlebensrate nierentransplantate
Überlebensrate Nierentransplantate

Number of HLA mismatches

A & BDQ & DR

0 0

A & BDQ & DR

3 or 4 1 or 2

KV 8.2

slide33
PCR

KV 8.2

array technologie
Array Technologie

„DNA Chips“

KV 8.2

hiv western blot
HIV: Western Blot
  • Lane 1, HIV+ serum(positive control)
  • Lane 2, HIV- serum (negative control)
  • Lane A, Patient A
  • Lane B, Patient B
  • Lane C, Patient C

KV 8.2

beispiel autoimmunserologie

Analyse

Messprinzip

Masseinheit

Referenzbereich

Rheumafaktor

Nephelometrie

IU/ml

< 20

Zellkerne (ANA)

IIF

Titer

< 1:80

Thyreoidea Thyroglobulin

Agglutination

Titer

< 1:400

C1-Esteraseinhibitor (funktionell)

Fotometrie

% des Normwertes

70-130%

C1q-tragende Immunkomplexe

ELISA

g/ml

< 35

Hautbiopsie

DIF

qualitativ

negativ

Schleimhautbiopsie

DIF

qualitativ

negativ

Beispiel: Autoimmunserologie

KV 8.2

immunfluoreszenz

AntinukleäreAntikörper (ANA)

Immunfluoreszenz

Fluorochrom

markierter AK

Y

Ag

Gewebe

KV 8.2

slide43
FISH

KV 8.2

fish beispiel
FISH Beispiel

Fluorescent in situ hybridisation of a small intestinal biopsy in a case of Whipple's disease (confocal laser scanning microscopy). Tropheryma whipplei rRNA is blue, nuclei of human cells are green and the intracellular cytoskeletal protein vimentin is red. Magnification approximately 200 x.

KV 8.2

immunhistochemie
Immunhistochemie

Human Papillomavirus DNA demonstrated by In Situ Hybridisation (pink)in epithelial cells identified by indirect immunofluorescence using antibody against cytokeratin (green)

KV 8.2

sensitivit t und spezifit t
Sensitivität und Spezifität
  • Sensitivität (epidemiologisch)
  • Sensitivität (analytisch)
    • niedriger Titer
    • Serokonversion
    • Verdünnung

KV 8.2

slide47
oder...
  • Sensitivität = Wahrscheinlichkeit, dass Test bei kranken Personen positiv ausfällt
  • Spezifität = Wahrscheinlichkeit, dass Test bei gesunden Personen negativ ausfällt

KV 8.2

genauigkeit der labordiagnostik
Genauigkeit der Labordiagnostik

echt Positive

Sensitivität =

X 100%

echt Positive + falsch Negative

echt Negative

Spezifität =

X 100%

echt Negative + falsch Positive

KV 8.2

aussagekraft der labordiagnostik
Aussagekraft der Labordiagnostik

positiver

prädiktiver Wert =

echt Positive

X 100%

echt Positive + falsch Positive

negativer

prädiktiver Wert =

echt Negative

X 100%

echt Negative + falsch Negative

KV 8.2

pr diktive werte
Prädiktive Werte

Annahme: Test Sensitivität = 100% / Spezifität = 99.5%

  • Population #1, die Prävalenz der Infektion ist hoch
  • Population: 1000 Seren getestet
    • 50 Seren von infizierten Individuen
    • 950 Seren von nicht infizierten Individuen
  • Test Results: 50 positive:
    • 45 aus der infizierten Gruppe
    • 5 falsch positive aus der nicht infizierten Gruppe
  • Der positive prädiktive Wert ist:

PPV = 45/ 45+5 = 90%

  • 9 von 10 positiven Resultaten sind von infizierten Individuen

KV 8.2

pr diktive werte51
Prädiktive Werte

Annahme: Test Sensitivität = 100% / Spezifität = 99.5%

  • Population #2, die Prävalenz der Infektion ist tief
  • Population: 1000 Seren getestet
    • 7 Seren von infizierten Individuen
    • 993 Seren von nicht infizierten Individuen
  • Test Results: 7 positive:
    • 2 aus der infizierten Gruppe
    • 5 falsch positive aus der nicht infizierten Gruppe
  • Der positive prädiktive Wert ist:

PPV = 2/ 2+5 = 28.6%

KV 8.2

kv2 im r ckblick
KV2 im Rückblick

Immunologie in der Labormedizin

  • Traditionelle Serologie
  • Moderne immunologische Teste
  • Molekularbiologische Methoden
  • Outlook: Point-of-care testing ?

Immunologie Wahlpraktikum 3. Studienjahr 2004

„Ein Einblick in die Labormedizin“

http://www.immunology.unibe.ch/teaching/Praktikum/praktikum.htm

KV 8.2