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Técnicas diagnosticas en hematología

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Técnicas diagnosticas en hematología

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  1. Técnicas diagnosticas en hematología Pr Marc Maynadié

  2. Desde 2000 la clasificación de las enfermedades hematológicas se hace según varios elementos : • Tipo celular : mieloide, linfoide B, T, NK • El nivel de diferenciación • La arquitectura de la invasión : nodular o difuso • Las anomalías citogenéticas • El perfil molecular

  3. En Hematología, el diagnostico es multifactorial • Morfología : • citología : células • y/o histología : arquitectura • Immunofenotypo : • Immunohistochimica • Citometria de flujo • Cariotipo : formula cromosómica • Biología molecular : mutación, amplificación, deleción • Congelación : colección de tejido maligno

  4. Técnicas de base en Hematología: • Citología : • Leucemia agudas • Síndromes mielodisplasicos • Síndromes mieloproliferativos • Algunas proliferaciones linfoides • Histología : • Todas las proliferaciones linfoides en tejidos solidos • Síndromes mieloproliferativos

  5. LLC LCM Sangre LMA LLA


  6. LAM SMD Medula osea LCM LLA

  7. Infiltración difusa Infiltración nodular

  8. Immunofenotipaje • Immunohistochimica: anticuerpos monoclonales que se usan en laminas. La fijación se revela con una reacción enzimática • Citometria de flujo : anticuerpos monoclonales con molécula fluorescente, se usan en células en suspensión. Cada célula analizada individualmente a gran velocidad.

  9. ImmunoHistochimica

  10. Citometria de flujo Células en suspensión 10 colores

  11. Populacion linfoide B monoclonale

  12. Leucemia aguda

  13. Leucemia mieloide aguda

  14. Leucemia linfoide aguda

  15. Fenotipo : • mieloide, • Linfoide B, T o NK • clonalidad • Nivel de diferenciación : células inmaduras o maduras • Marcadores de pronostico : CD34, … • Minoración del numero de células malignas • Enfermedad residual

  16. Cariotipo convencional : técnicas de bandas R o G Formula chromosomica : 46, XX

  17. Hibridación in situ fluorescente( FISH) : sondas especificas de unas parte de cromosomas Multi FISH FISH multibandas Hybridaciongenomica comparativa (CGH)

  18. Cyanine 5 : jaune - Aqua : bleu -Cyanine 3 : violet -FITC : vert-Texas Red : rouge - MultiFISH métaphase normale Multifish

  19. Leucemia linfoide aguda Chromosome 1 der1 der 19

  20. Principio de la CGH

  21. Zonas amplificadas

  22. Biología molecular Polymerase Chain reaction : PCR diferentes tipos : - Reverse Transcriptase - Real Time - nested pCR…

  23. ADN Chip o microarray miniaturisacion de tecnicas de hybridacion ADN patiente ADN normal Loci a estudiar Trisomia en rojo Monosomia en verde

  24. Vert : gène sous exprimé Rouge : gène surexprimé

  25. 1500 ADNc del X ADNc H : verde ADNcM : rojo Amarillo : equivalente genico ADN Chip ADNc celular : rojo ADNc de referencia : verde cluster de genes con expresión génica aumentada : rojo

  26. Congelación de tejido maligno • Interés mayor • Importante para el diagnostico a posteriori : colección sanitaria • Muy importante par la búsqueda : fundamental, clínica y epidemiológica • Tiene que ser automática y sistemática

  27. Gracias por su atencion