Spectrophotometer

111463 박진우 Spectrophotometer

Kind and principle of Spectrophotometer

Micro-volume UV/Vis Spectrophotometer • 1ul의 적은 시료량으로도 정확한 data를 얻을 수 있으며 nucleic acid, protein 등 biomolecule의 정량과 기타 유무기물질의 정량, 정성분석에 적합하며 200~850nm의 넓은 범위의 자외/가시광선 영역을 측정할 수 있고 특별히 희석할 필요 없이 고농도시료를 측정 할 수 있다.

분자는 UV/Vis을 흡수하면 결합성 전자와 비결합성 전자가 ground state에서 excited state로 전이된 다음여러 경로를 거쳐 다시 ground state로 되돌아가면서 E.를 방출하게 되는데 이러한 변화를 관찰함으로써 분자의 전자구조적 성질을 파악한다.

정상분석에서는 분자의 구조분석 (최대흡수파장, 흡광도, band의 분리형태 등을 종합적으로 해석)에 이용되며 순도확인 및 정량분석에도 널리 사용된다.

Fourier Transform Infrared Spectrophotometer (FT-IR) • 적외선 흡수 분광법은 분자의 운동과 회전운동에 관계한다. 적외선은 X-선, 자외선, 가시광선보다 E.가 낮기 때문에 원자내 전자의 전이현상을 일으키지 못하고 분자의 vibration, rotation, translation 등과 같은 여러 분자운동을 일으키게 된다.

주로 분자의 진동에 의한 특수한 흡수 스펙트럼이 나타나며 이것을 분자의 진동 스펙트럼 (molecular vibration spectrum) 또는 적외선 스펙트럼 (IR spectrum)이라 한다.

분자 진동의 종류는 크게 streching vibration과 bendingvibration으로 나뉜다. 신축진동은 2원자 사이의 결합축에 따라 원자간의 거리가 계속적으로 변하는 운동으로 대칭과 비대칭 운동이 있다. 굽힘진동은2결합 사이의 각도가 변하는 진동으로 scissoring, rocking, wagging, twisting으로 구분된다.

Atomic Absorption Spectrophotometer • 원자흡광법은 금속 원자를 불꽃 또는 전기로등을 사용하여 태워 만들어진 기체 상태의 중성원자에 적당한 복사E.를 쪼여줌으로써 일어나는 복사E흡수현상을 기초로 한 분석법이다.

How to use Spectrophotometer

시험 조작 • 분광광도계를 사용하여 시료의 흡광도를 측정할 때는 대조액을 조제하여야 한다. 대조액은흡광물질이 없는 용액을 말하는데 흡광물질을 제외하고는 시료용액과 반드시 동일하게 만들어져야 하는데 그 이유는 시료 중에는 흡광물질 이외에 빛의 흡수에 영향을 미치는 다른 물질이 들어있을 수 있기 때문이다.

분광광도계는 반드시 빛의 통과율(%T)을 보정한 후에 사용하여야 한다. • 대조액에는흡광물질이 들어있지 않으므로 광원으로부터 나오는 빛을 100% 통과시킬 것이므로 대조액의통과율은100%T를 나타내도록 보정하여야 하며 또한 광원으로부터 빛이 모두 흡수되어 검출기에 전혀 닿지 않는다면 통과율은0%T가 될 것이기 때문에 이 조건에서는 통과율이 0%T가 되도록 보정하여야 한다.

일반적으로 분광광도계의 외부에는 세 개의 조절자가 있는데 두 개는 분광광도계의 보정을 위한 조절자(0%T와 100%T)이며 나머지 한 개는 파장 조절을 위한 조절자다.

발색시약과 가리움제 • 자외선 및 가시광선 영역에서 빛을 거의 흡수하지 않는 성분을 분석 할 때는 적당한 발색시약을 사용하여 빛을 흡수하는 화합물로 변화시키는 것이 중요하다.

발색시약의 조건은 • 발색된 색이 예민하고 안정할 것 • 방해 성분이 적도 목적성분에만 반응할 것 • 발색된 화합물의 조성이 명확할 것 • Beer’s law를 따를 것 이다.

일반적으로 분석시료에는 흡광분석을 방해하는 물질들이 함유되어 있는 경우가 많다. 이 때에는 제 3의 물질로서 가리움제를 첨가하여 방해물질의 작용을 방지할 수 있는데 가리움제는 방해물질이 발색시약과 반응하지 못하게끔 하는 역할을 한다.

Notice of Spectrophotometer

자외선까지 사용이 가능한 분광광도계는 UV영역의 빛 파장을 사용하기 위해서 장비 안에 있는 D2램프의 원활한 광량을 위해서 제품을 킨 뒤 10~15분 정도의 워밍업이 필요하다.

광량이 떨어지거나 파장이 맞지 않을 때는 data가 흔들릴 수 있는데 이를 검사하고 싶다면 제품 취급업체에 전화하여 확인해도 되고 간단히 직접 체크할때는 셀 홀더에 아무것도 넣지 않고 임의의 파장을 선택해서 여러 번 측정하여도 된다.

출처 분광광도계의 종류 적외선 분광광도계의 원리 분광광도계의 사용법

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